乳腺癌组织中扭曲基因和雌激素受体的表达及临床意义

何　清　张纬建　李　晶

(福建医科大学附属第一医院放疗科，福建　福州　350005)



乳腺癌组织中扭曲基因和雌激素受体的表达及临床意义

何清张纬建李晶1

(福建医科大学附属第一医院放疗科，福建福州350005)

〔摘要〕目的研究乳腺癌组织中扭曲基因(TWIST)和雌激素受体(ERα)的表达及其临床意义。方法随机选取2009年1月至2010年9月在该院接受手术治疗的35例乳腺癌患者的癌组织与癌旁组织标本进行研究，采用免疫组织化学法检测乳腺癌组织及癌旁组织中的TWIST与ERα表达情况，分析两者对乳腺癌患者1年及5年复发率及生存率的影响，采用Cox多因素统计学方法分析乳腺癌患者生存预后的影响因素。结果TWIST在乳腺癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁组织，ERα在乳腺癌组织中的阳性表达率显著低于癌旁组织(P<0.05)。TWIST(+)ERα(-)的5年复发率显著高于其他各组，5年生存率显著低于其他各组(P<0.05)。低分化、有淋巴结转移的乳腺癌患者TWIST阳性及ERα阴性的比例明显高于中高分化及无淋巴结转移者(P<0.05)。Cox多因素分析显示，病理分级为低分化、有淋巴结转移以及TWIST(+)ERα(-)均为乳腺癌患者预后生存的影响因素。结论TWIST的高表达及ERα的低表达对乳腺癌患者的预后生存具有不利影响，临床监测二者的表达情况，可评估患者的预后。

〔关键词〕乳腺癌组织；TWIST；ERα

近年来，乳腺癌发病率不断升高，相关报道指出〔1，2〕，扭曲基因(TWIST)和雌激素受体(ERα)在乳腺癌的发生侵袭以及转移等活动中起到关键作用,本文旨在深入研究两者在乳腺癌发生、发展过程中所起到的作用。

1资料与方法

1.1临床资料随机选取2009年1月至2010年9月在我院接受手术治疗的35例女性乳腺癌患者，年龄36～69岁，平均(48.2±2.6)岁。纳入标准：(1)患者在术前未接受过放化疗治疗；(2)术后病理学确诊为乳腺癌；(3)单侧乳腺癌。排除标准：(1)其他种类的癌症病史；(2)双侧乳腺癌。手术切除患者癌组织与癌旁组织(与癌组织距离≥3 cm)，所有标本蜡块均存于液氮内。

1.2研究方法对实验标本实施常规脱蜡和水化，制成切片，使用3%的过氧水在室温下孵育约10 min，利用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3次，5 min/次。使用10%的山羊血清进行封闭，在室温下孵育约10 min，清除血清并滴加一抗(产自美国Billegend公司)，在4℃下过夜。给予PBS冲洗，滴入生物素标记二抗(产自美国Billegend公司)，在37℃下孵育约10 min，给予PBS冲洗，滴入由碱性磷酸酶标记后的链霉卵白素，在37℃下孵育约20 min，给予PBS冲洗。再滴入配制好的DAB显色液，6 min显色后使用蒸馏水冲洗，由苏木精复染，最后树脂封片。

1.3效果评价〔3，4〕显微镜下取每张切片的5个视野进行评价，TWIST染色结果通过染色强度和阳性细胞在肿瘤细胞总数中所占的比例进行评分。染色强度：无色计0分；淡黄色计1分；棕黄色计2分，黄褐色计3分。阳性细胞比例：≤10%计0分，11%~25%计1分，26%~50%计2分，51%~100%计3分。将上述两项评分结果相乘，乘积为0～3分计阴性，4分计以上计阳性。ERα的染色结果以细胞核中发现棕色颗粒记为阳性。

1.4观察指标观察并比较TWIST与ERα在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达情况，患者随访5年，记录来院复诊患者的病情变化，分析TWIST与ERα表达对乳腺癌患者近远期复发率及生存率的影响。收集患者病理资料(包括年龄、TNM分期、肿瘤直径、病理分级以及淋巴结转移)，分析其与TWIST及ERα表达的关系，利用 Cox法对乳腺癌患者生存预后的影响因素进行分析。

1.5统计学方法 使用SPSS15.0分析软件进行χ2检验和Cox分析。

2结果

2.1TWIST与ERα在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达情况比较TWIST在乳腺癌组织中的阳性表达率为77.14%(22例)，显著高于癌旁组织的8.57%(3例)；ERα在乳腺癌组织中的阳性表达率为31.43%(11例)，显著低于癌旁组织的74.29%(26例)(均P<0.05)。

2.2TWIST与ERα的表达对乳腺癌患者近远期复发率及生存率的比较由于 TWIST(-)ERα(-)例数过少，无代表性，因此未列入比较。TWIST(+)ERα(-)的5年复发率显著高于其他各组，5年生存率显著低于其他各组(P<0.05)。各组1年复发率及生存率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.3患者病理资料与TWIST及ERα表达的关系分析低分化、有淋巴结转移的乳腺癌患者TWIST(+)ERα(-)的比例明显高于中高分化及无淋巴结转移者(χ2=3.902，5.844,9.135,12.696；P=0.048，0.016，0.003，0.000)。不同年龄、TNM分期的乳腺癌患者TWIST与ERα的表达比例比较，无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.4Cox法对乳腺癌患者生存预后的影响因素分析病理分级为低分化、有淋巴结转移以及TWIST(+)ERα(-)均为乳腺癌患者预后生存的影响因素。见表3。

表1　TWIST与ERα的表达对乳腺癌患者近远期复发率及

与TWIST(+)ERα(+)比较:1)P<0.05；与 TWIST(-)ERα(+)比较:2)P<0.05

表2　患者病理资料与TWIST及ERα表达的

与中高分化比较:1)P<0.05；与无淋巴结转移比较:2)P<0.05

表3　Cox法对乳腺癌患者生存预后的影响因素分析

3讨论

近年来女性乳腺疾病发病率不断攀升，乳腺癌发病年龄也呈年轻化趋势，对女性日常生活造成影响，对其生命健康造成威胁〔5〕。乳腺癌具有极易发生转移的典型生物学特性，研究表明〔6〕，乳腺癌在发生、发展以及转移这一系列活动中，受到多种因素影响，其过程十分复杂，其中包含健康状态乳腺上皮细胞受到诱导而转化为间充质细胞，之后失控增殖形成原位癌，继而原位癌出现脱离以及外侵现象，导致乳腺癌细胞发生定向转移，最终在靶器官上进行黏附并增殖。TWIST为碱性螺旋-环-螺旋类型转录因子，其在肿瘤进展中发挥重要作用。TWIST具有促使细胞移动和组织重组功能，对胚胎发育起到关键作用，其能够诱导产生多种间充质标志物，帮助完成上皮和间质之间的转化，进而促进上皮来源的癌细胞发生转化成为间充质细胞。TWIST过度表达会导致上皮细胞中的E-cadherin表达发生缺失或者丧失，引起间质标志物出现表达上升现象，提升细胞迁徙力〔7〕。同时，TWIST还会与E-cadherin中的启动子相结合，阻止其进行转录，导致癌细胞发生转移。此外，TWIST过度表达还会导致肿瘤细胞凋亡受到抑制，促使肿瘤进一步恶化。因此，TWIST表达状况可直接反映乳腺癌进展情况，如其过度表达，则可预测出乳腺癌极可能已发生侵袭转移。

ERα属于类固醇类型激素受体，为激素调节的转录因子中十分重要的组成部分。在对雌激素具有依赖性质的乳腺癌细胞内，雌激素会对癌细胞自身的分泌功能产生刺激作用，提升对其生长有刺激作用的因子水平，降低对其生长有抑制作用的因子水平，进一步通过调节作用影响ERα等雌激素受体的水平。因此，雌激素和ERα等雌激素受体之间发生生物化学反应可能直接关系到乳腺癌的产生及发展。

本研究表明TWIST与ERα在乳腺癌组织中存在表达异常。此外，本研究与Vesuna等〔8〕报道一致，说明TWIST(+)ERα(-)可能会促进乳腺癌的进展，影响患者预后。高表达TWIST对ERα的表达产生抑制，使得患者更易对治疗方案产生不耐受，从而不利于预后生存。而病理分级为低分化及有淋巴结转移的乳腺癌患者由于癌症病情较重，易导致其生存预后不良。Ouelaa-Benslama等〔9〕针对乳腺癌癌症病理分级及淋巴结转移影响患者的生存率作出了分析，与本文研究结果大体一致，但未涉及TWIST与ERα的表达情况，本文给予了补充，完善了研究结果。但须指出，样本量较少是本次研究的短板。综上，TWIST的高表达及ERα的低表达对乳腺癌患者的生存预后具有不利影响，临床通过上检测二者的表达情况，可评估患者的预后。

4参考文献

1于丁,臧爱华,吴辉菁,等.乳腺癌干细胞通过上调Twist表达的上皮-间叶转化参与肿瘤转移〔J〕.肿瘤学杂志,2010；16(9):710-4.

2周明莉,唐石伏,张海龙,等.Twist促进乳腺癌细胞BT-549乳腺细胞小球形成及其迁移〔J〕.细胞与分子免疫学杂志,2015；31(3):321-4.

3宋一民,朱雅萍,薛金慧,等.乳腺浸润性导管癌组织中转录因子Twist和缺氧诱导因子-1α表达与上皮-间充质转化的关系〔J〕.中华实验外科杂志,2014；31(10):2284-6.

4刘瑜,孙晓红.Twist、Wnt信号传导通路与女性相关肿瘤的关系〔J〕.社区医学杂志,2014；12(8):49-52.

5周明莉,杨佳佳,唐石伏,等.高表达Twist基因促进人乳腺癌细胞MCF-7干细胞样细胞富集和迁移〔J〕.第三军医大学学报,2014；36(20):2083-6.

6Tilghman SL,Townley I,Zhong Q,etal.Proteomic signatures of acquired letrozole resistance in breast cancer:suppressed estrogen signaling and increased cell motility and invasiveness〔J〕.Mol Cell Proteomics,2013；12(9):2440-55.

7Fu J,Zhang L,He T,etal.TWIST represses estrogen receptor-alpha expression by recruiting the NuRD protein complex in breast cancer cells〔J〕.Int J Biol Sci,2012；8(4):522-32.

8Vesuna F,Lisok A,Kimble B,etal.Twist contributes to hormone resistance in breast cancer by downregulating estrogen receptor-α〔J〕.Oncogene,2012；31(27):3223-34.

9Ouelaa-Benslama R,De Wever O,Hendrix A,etal.Identification of a GαGβγ,AKT and PKCα signalome associated with invasive growth in two genetic models of human breast cancer cell epithelial-to-mesenchymal transition〔J〕.Int J Oncol,2012；41(1):189-200.

〔2015-11-23修回〕

(编辑滕欣航)

〔中图分类号〕R737.9

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)05-1128-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.049

通讯作者：张纬建(1955-)，男，硕士，主任医师，主要从事放射肿瘤治疗方面的研究。

1福建医科大学附属第一医院影像科

第一作者：何清(1978-)，女，主治医师，主要从事肿瘤放射治疗方面的研究。