天麻多糖对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠体液免疫功能的影响

李晓冰　展俊平　张月腾　谢忠礼　朱艳琴　陈玉龙　程　凯　王君明　李瑞琴

(河南中医学院,河南　郑州　450008)



天麻多糖对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠体液免疫功能的影响

李晓冰展俊平1张月腾2谢忠礼朱艳琴陈玉龙程凯王君明李瑞琴

(河南中医学院,河南郑州450008)

〔摘要〕目的探讨天麻多糖对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠体液免疫功能的影响。方法环磷酰胺制造免疫功能低下小鼠模型。实验设盐酸左旋咪唑对照组、模型组、天麻多糖高剂量组、天麻多糖中剂量组、天麻多糖低剂量组。造模后给予天麻多糖治疗10 d。实验结束处死小鼠，比较各组小鼠胸腺指数、脾指数、血清IgA、IgG和IgM及溶血素水平。结果与模型组比较，天麻多糖中、高剂量组显著升高血清IgA、IgG及血清溶血素水平(P<0.01)，多糖高剂量组升高脾指数和胸腺指数，多糖中剂量组明显升高血清IgM水平(P<0.05)。结论天麻多糖可以缓解环磷酰胺对小鼠体液免疫功能的抑制作用。

〔关键词〕天麻；多糖；体液免疫

现代药理试验表明,天麻具有镇静、镇痛、抗惊厥、降压、抗炎、抗氧化、延缓衰老等作用〔1〕。天麻中含有天麻素、赤箭苷、胡萝卜苷、天麻多糖、腺嘌呤、腺嘌呤核苷、多种氨基酸等活性成分〔2〕。目前国内外对天麻化学成分报道较多的是酚类中的天麻素和多糖类中的天麻多糖，两者是目前已知的天麻中主要活性成分。研究表明，天麻多糖具有免疫调节、延缓衰老、降低血压、抑制病毒、抗抑郁等作用〔3〕。本研究旨在观察天麻多糖对环磷酰胺(CTX)所致免疫功能低下小鼠血清免疫球蛋白(Ig)A、IgG和IgM及血清溶血素水平的影响，探讨天麻多糖对免疫功能低下小鼠体液免疫的作用机制。

1材料与方法

1.1动物昆明种(KM)小鼠，雄性，SPF 级，体质量18～22 g，河南省实验动物中心提供，合格证号SCXK(豫) 2010-0002。

1.2主要试剂及仪器天麻多糖，西安慧科生物公司提供，批号20120620，纯度96.5%；环磷酰胺(CTX)，上海华联制药有限公司生产，批号120706；盐酸左旋咪唑(LH)片购自四川奇力同心制药有限公司(国药准H51022852)。IgA、IgG和IgM ELISA 试剂盒购自上海易利生物科技有限公司。RT-6000酶标分析仪、TD24-WS低速离心机等。

1.3方法

1.3.1动物分组与造模实验1，用随机分组方法将50只小鼠分为生理盐水模型组、LH阳性对照组、天麻多糖低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组10只。于实验第3、5、7天皮下注射CTX 30 mg/kg，制造免疫功能低下小鼠模型。各组从分组开始，分别灌胃生理盐水、LH(用生理盐水稀释浓度为5 g/L),100、200、400 mg/kg天麻多糖，1次/d，各组动物灌胃体积均为0.2 ml，持续10 d。实验2，分组及给药方案同实验1，于实验第6天每只小鼠腹腔注射20%的兔红细胞0.2 ml，用于血清溶血素水平测定。

1.3.2取材小鼠处死前1 d禁食不禁水24 h，动物摘眼球取血，取胸腺和脾脏。

1.3.3指标测定用ELISA 法测定各组小鼠血清IgA、IgG 和 IgM 含量。血清溶血素水平参照文献方法〔4〕，采用分光光度法测定。断颈法处死小鼠，称量体重，解剖摘取脾脏及胸腺，计算脾脏和胸腺指数。脾脏指数=脾脏质量/体质量，胸腺指数=胸腺质量/体质量〔5〕。

1.4统计学方法应用SPSS15.0软件，采用单因素方差分析，组间两两比较采用最小显著差法。

2结果

2.1天麻多糖对小鼠血清IgA、IgG和IgM合成的影响与模型组比较，多糖各剂量组IgA，多糖中、高剂量组IgG，多糖高剂量组IgM水平显著上升(P<0.01)，LH对照组血清IgA、IgG，多糖低剂量组IgG及多糖中剂量组IgM明显升高(P<0.05)；与LH对照组比较，多糖高剂量组IgA、IgG和IgM水平上升(P<0.05)。见表1。

表1　天麻多糖对小鼠血清IgA、IgG和

与LH对照组比较:1)P<0.05；与模型组比较:2)P<0.05，3)P<0.01；下表同

2.2天麻多糖对小鼠血清溶血素水平和脾指数、胸腺指数的影响与模型组比较，多糖中、高剂量组溶血素水平显著升高(P<0.01)，多糖低剂量组溶血素，多糖高剂量组脾指数、胸腺指数及LH对照组溶血素、脾指数水平均上升(P<0.05)，与LH对照组比较，多糖高剂量组胸腺指数明显升高(P<0.05)。见表2。

表2　天麻多糖对小鼠血清溶血素水平、脾指数和

3讨论

胸腺是T细胞分化和发育的场所，是机体重要中枢免疫器官。脾脏是最大的淋巴器官，也是对血源性抗原产生免疫应答的场所，因此，胸腺指数、脾脏指数间接反映了机体的免疫状况〔5〕。本研究结果说明天麻多糖可能对体液免疫存在一定调节作用。血清免疫球蛋白可反映机体的体液免疫功能。IgG是血清中Ig主要成分，约占血清中Ig总含量的75%；IgM抗体一般为保护性抗体，具有免疫性，二者均对防止感染起重大作用。本研究显示，与模型组比较，天麻多糖中、高剂量组可显著提高免疫低下机体的IgA、IgG和IgM水平。血清溶血素可以反映机体内抗体量,反映体液免疫功能〔6〕。本研究进一步检测了天麻多糖对溶血素水平的影响，结果表明，与模型组比较，天麻多糖各剂量组均明显升高血清溶血素水平，进一步支持了天麻多糖可强化免疫低下机体体液免疫功能的推测。LH是目前国内外使用最广的免疫调节剂之一，可增强细胞功能，刺激前体T淋巴细胞分化成熟，增强中性粒细胞的活性，增强吞噬功能〔7〕。本研究表明，与LH比较，天麻多糖高剂量组可显著提高免疫低下小鼠胸腺指数及血清IgA、IgG和IgM水平。且天麻多糖作为天然食品，不存在LH在发挥药效时伴生的头晕、恶心、呕吐、腹痛、发热、嗜睡、乏力、皮疹、发痒等不良反应，说明天麻多糖具有极高的市场推广价值。

4参考文献

1沈映君.中药药理学〔M〕.北京:人民卫生出版社,2000:797-801.

2范玉奇,李文兰,王艳萍,等.天麻化学成分及药理性质研究的进展〔J〕.药品评价,2005;2(4):309-12.

3陈芳，杜娟，张秉华.天麻多糖的理化性质和药理活性研究〔J〕.现代中医药，2009;29(6):71-3.

4仇成凤，雷林生，吴玉英,等.以兔红细胞作为抗原建立小鼠体液免疫反应动物模型〔J〕.南方医科大学学报,2009;29(12):2473-6.

5李晓冰，陈玉龙，展俊平，等.枸杞多糖对糖尿病大鼠血糖水平及机体免疫功能的影响〔J〕.中国全科医学,2013;16(27)：3208-10.

6段博文,李运,刘昕,等.柳茶多糖对小鼠免疫功能的影响〔J〕.中国中药杂志,2010;35(11)：1466-9.

7李向东,王莹,苏培,等.盐酸左旋咪唑栓免疫调节作用的临床观察〔J〕.天津医药,2000;12(2):44-5.

〔2015-10-09修回〕

(编辑袁左鸣)

Effect of polysaccharide from Gastrodia Elata B1 on humoral immune function in immunosuppressed mice induced by cyclophosphamide

LI Xiao-Bing,ZHAN Jun-Ping,ZHANG Yue-Teng，etal.

Henan University of Traditional Chinese Medicine,Zhengzhou 450008,Henan,China

【Abstract】ObjectiveTo observe the effects of Polysaccharide from Gastrodia Elata B1 on humoral immune function in immunosuppressed mice induced by cyclophosphamide，and explore its mechanisms.MethodsMice were randomly divided into hydrochloride levamisole control,model,Gastrodia Elata B1 Polysaccharide high,middle,and low groups.Mice in the Polysaccharide group were orally treated by gavage with Gastrodia Elata B1 Polysaccharide at different doses respectively.10 days later,Spleen index,thymus index,serum hemolysin level,as well as serum levels of IgA,IgG and IgM were inspected respectively.ResultsCompared with those of model group,spleen index ,thymus index were increased in Polysaccharide high group,serum IgM level was increased in Polysaccharide middle group (P<0.05), serum IgA,IgG and hemolysin levels were greatly increased in Polysaccharide middle and high groups(P<0.01).ConclusionsPolysaccharide from Gastrodia Elata B1 could alleviate cyclophosphamide-induced suppression of humoral immune function in mice．

【Key words】Gastrodia Elata B1;Polysaccharide;Humoral immune

〔中图分类号〕R285

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)05-1027-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.002

通讯作者：李瑞琴(1963-),女，教授，主要从事免疫药理学研究。

基金项目：国家自然科学基金资助项目(81173177)；河南省教育厅自然科学研究计划资助项目(2010B360015)；郑州市科技创新团队资助项目(121PCXTD520)；河南中医学院基本科研业务费(2014KYYWF-QN10)

1河南省中医院2广州中医药大学

第一作者：李晓冰(1980-),女,副教授,博士,主要从事多糖免疫药理学研究。