蒜和大血藤等四种中药合剂对2株多重耐药鲍曼不动杆菌的体外抑菌研究

张怡敏　陈红英　西北农林科技大学生命科学学院(咸阳 712100 )



蒜和大血藤等四种中药合剂对2株多重耐药鲍曼不动杆菌的体外抑菌研究

张怡敏△陈红英▲西北农林科技大学生命科学学院(咸阳 712100 )

摘要目的：探讨大蒜和大血藤、五味子、五倍子、石榴皮四种中药合剂对2株多重耐药鲍曼不动杆菌体外抑菌效果。方法：制备大血藤、五味子、五倍子、石榴皮、蒜药液，采用牛津杯法和微量稀释法，分别测定它们对2株多重耐药鲍曼不动杆菌体外抑菌圈、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)。结果：大蒜、五味子、五倍子、石榴皮四种中药合剂对2株多重耐药鲍曼不动杆菌体外有不同程度的抑菌效果，大血藤和蒜>蒜和石榴皮、蒜和五味子>蒜和大血藤+石榴皮+五味子+五倍子，蒜和五倍子效果最差。结论：蒜和这几种中药联合效果不如纯蒜汁在体外的抑菌效果。

主题词 大蒜大血藤抗菌药鲍氏不动杆菌

鲍曼不动杆菌是临床上主要常见耐药菌之一，仅次于铜绿假单胞菌，为条件致病菌，主要通过接触和呼吸道传播，由于耐药性的出现，给临床带来很大困难，中医目前对鲍曼不动杆菌体外抑菌的研究大概有十多种中药，都停留在单味药对MDRAB的研究，从效果来看,陈泽慧[1]等通过对五味子、石榴皮等23味中药研究，筛选出五味子、石榴皮、黄芩、黄连、连翘、血藤和金钱草7种抑菌效果较好的中药进行体外抑菌试验，结果显示，7种中药对产MBL(金属13．内酰胺酶)菌株和不产MBL菌株均有不同程度的抑菌作用，以五味子和石榴皮的抑菌效果最好，黄连和黄芩次之，连翘、血藤和金钱草的抑菌效果较弱。冷会勇等[2]通过肉汤二倍稀释法检测18种中药水体液对AB多重耐药株的MIC，结果显示五味子、五倍子、黄芩等中药对MDRAB具有良好的抗菌作用。张景皓等[3]采用试管二倍稀释法对中药药液进行体外抑菌试验，研究发现黄芩、黄连、五味子对不同的耐药菌有不同程度的抑菌作用，对于AB的抑菌作用五味子大于黄连、黄芩。何祖光[4]采用K-B 纸片法，对大蒜提取液临床体外抗鲍曼不动杆菌的实验研究，结果发现大蒜提取液抗鲍曼不动杆菌无论单独还是与抗菌药物联合均产生明显效果。很多学者建议大蒜和其他中药制成合剂对MDRAB体外抑菌可能有很好的抑菌效果，所以作者将目前抑菌效果相对好的4种中药和蒜配成合剂看看它们的体外抑菌效果。

1材料1.1 实验中药药材制备1.5g/mL 生蒜提取液， 取优质白皮蒜籽15g，去皮、洗净、烘干榨汁，反复 2 次，放在无菌量筒中，加10mL无菌蒸馏水，配成相当于 1.5g/mL 蒜子浓度， 然后取上清液即 1.5g/mL，装无菌管备用；五味子10g，反复2次加100mL水加热浓缩10mL,装无菌管备用；石榴皮10g，反复2次加100mL水加热浓缩10mL,装无菌管备用；五倍子10g，反复2次加100mL水加热浓缩10mL,装无菌管备用；大血藤30g，反复2次加200mL水加热浓缩30mL,装无菌管备用。

1.2 实验菌株(鲍曼不动杆菌)分离于本院 2014年 7 月 2例患者2株痰分泌物中。所分离试验菌株均按 《全国临床检验操作规程》的程序进行鉴定而确认的鲍曼不动杆菌，且耐药特性均符合，对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、 头孢他啶 、美罗培南、妥布霉素、阿米卡星均耐药，无抑菌圈。

1.3培养基为血琼脂平皿、营养琼脂平皿，培养基由上海研生实业有限公司提供，牛津杯由东台市吉泰不锈钢制品厂提供(0误差)，药敏片由广州纳特生物科技提供，用质控菌株验证药敏片有效性，证实药敏片均有效。

2方法2.1药敏实验的方法按操作规程标准涂布鲍曼不动杆菌的4个药敏血平皿(直径 90mm)上贴上如下几种药敏片：亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、 头孢他啶 、美罗培南、妥布霉素、阿米卡星，每种药敏片贴上1片，每片为单独抗菌药物，培养均为 24h观察结果，单独药敏纸片判断标准按 NCCLS2002 标准，结果符合临与方法床鉴定结果。

2.2牛津杯测抑菌效果取10个营养琼脂平皿分别上面铺满鲍曼不动杆菌(每5个平皿上种同1株鲍曼)，每个上面放2个牛津杯，分别是蒜汁，蒜汁+五

味子；蒜汁，蒜汁+五倍子；蒜汁，蒜汁+血藤；蒜汁，蒜汁+五味子+五倍子+石榴皮。溶液浓度1g/mL,装入牛津杯，37℃，培养18h后，抑菌效果为：蒜汁>蒜汁+血藤>蒜汁+五味子=蒜汁+石榴皮>蒜汁+五倍子+五味子+石榴皮>蒜汁+五倍子。

2.3 MIC测定给96孔板第一行每孔加100μL浓度为1g/mL(蒜汁+血藤)药液，2孔开始加液体培养基100μL和100μL浓度为1g/mL(蒜汁+血藤)药液，3孔～12孔各加液体培养基100μL，再从2孔的混合液里取100μL加3孔一次到10孔，然后给第一行所有孔加10μL鲍曼不动杆菌的菌液。同上第二行加蒜汁+五味子，第三行加蒜汁+五倍子，第四行加蒜汁+石榴皮，第五行加蒜汁+五味子+五倍子+石榴皮。37℃，培养18h第一行7、8、9孔可能没菌生长；第二行和第四行变化相同，6、7孔可能没菌生长，8孔可能有菌生长；第三行可能2、3、4孔，第五行可能5、6孔。

2.4MBC测定取3个平皿，用无菌接种环在每个平皿取四个孔画四个区，37℃，培养18h后，蒜+血藤8孔没菌；二、四行7孔无菌；三行2孔没菌；五行5孔没菌。

3结果大蒜和大血藤、五味子、五倍子、石榴皮四种中药合剂对2株多重耐药鲍曼不动杆菌体外有不同程度的抑菌效果，体外抑菌效：蒜>大血藤和蒜>蒜和石榴皮、蒜和五味子>蒜+石榴皮+五味子+五倍子，蒜和五倍子效果最差。蒜合剂反而影响了纯蒜的效果，所以不建议体外蒜和这几味中药联合使用。

4讨论蒜汁和这几位中药联合体外抑菌效果来看，就大血藤和蒜效果最好，但也没有纯蒜汁好，蒜合剂反而影响了纯蒜的效果，所以不建议体外蒜和这几味中药联合使用。但是由于中药种类繁多，不排除可能存在某种中药和蒜联合使用效果强于纯蒜汁。还有体内抑菌牵扯代谢问题和联合调理作用，那么就有可能体外抑菌弱的药物在体内抑菌效果还会很好，所以这些问题还需进一步研究。

参考文献

[1]陈泽慧,田应彪,李丹丹,等.五味子、石榴皮等中药对鲍曼不动杆菌体外的抑菌作用[J].中国医院药学杂志,2011,15(31):1248-1251.

[2]冷会勇,闫志勇,王斌,等.十八种中药制剂对多重耐药鲍曼不动杆菌体外抗菌作用的研究[J].中外医疗,2010，17:132.

[3]张景皓,肖明霞,季萍.黄芩、黄连、五味子对5种多重耐药菌抑菌作用的实验研究[J].新疆医学,2012,42:4-7.

[4]何祖光,柳枝,袁晓兵,等.大蒜提取液临床体外抗鲍曼不动杆菌的实验研究[J].实验与检验医学,2009，5(27):503-504.

(收稿2015-09-27;修回2015-10-29)

【中图分类号】R285

【文献标识码】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.02.046

通讯作者▲

△陕西中医药大学病原微生物及检验学教研室 (咸阳 712046 )

·方药纵横·