实时荧光定量PCR法鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌效果观察

杨晓云，刘蕊，穆小燕

(1 天津医科大学，天津300070；2天津市人民医院)



实时荧光定量PCR法鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌效果观察

杨晓云1，2，刘蕊2，穆小燕2

(1 天津医科大学，天津300070；2天津市人民医院)

摘要：目的探讨实时荧光定量PCR法鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的效果。方法 采用实时荧光定量PCR法检测131例金黄色葡萄球菌感染患者送检标本中nuc基因和mecA基因的表达情况。nuc基因阴性且mecA基因阳性者判定为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)，nuc基因阳性且mecA基因阴性者判定为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)，nuc、mecA基因共同阳性者判定为MRSA。药敏试验检测结果MRCNS感染25例、MSSA感染66例、MRSA感染40例。结果131例患者送检标本中nuc基因阳性106例、mecA基因阳性85例，其中MRSA 60例、MRCNS 25例、MSSA 46例。20例药敏试验检测为MSSA患者的送检标本中检出mecA基因，将其判定为MRSA。结论 实时荧光定量PCR法检测MRSA的效果优于药敏试验。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；nuc基因；mecA基因

耐甲氧西林金黄色葡萄球(MRSA)已成为导致医院和社区感染的重要病原菌，快速、准确地检出MRSA有极其重要的临床意义[1，2]。nuc基因为金黄色葡萄球菌的标志性基因。MRSA的耐药机制主要由mecA基因决定，此基因负责编码特异性青霉素结合蛋白(PBP2a)，从而使MRSA对所有β-内酰胺类抗菌药物具有耐药性。美国临床试验室标准化委员会(NCCLS)建议，凡检出mecA基因的金黄色葡萄球菌即可判定为MRSA[3]。2013年7月～2014年9月，我们采用实时荧光定量PCR法检测了131例金黄色葡萄球菌感染患者送检标本中的nuc、mecA基因表达情况，观察其诊断MRSA的效果。现报告如下。

1资料与方法

1.1临床资料纳入标本来自131例患者，其中男71例、女60例，年龄3个月～92岁。送检科室包括ICU、儿科、外科、神经外科、血管外科、肛肠科、骨科、妇科、泌尿科、耳鼻喉科、皮肤科。标本类型包括痰、鼻咽拭子、伤口或泌尿生殖道分泌物、尿液。

1.2药敏试验鉴定 采用VITEK-Ⅱ全自动微生物分析系统鉴定131例患者送检标本，操作按说明书进行。用实验室标准化协会(CLSI)2013和欧洲抗菌药敏试验委员会(EUCAST)药敏标准判定细菌类别。用ATCC29213为敏感株。

1.3实时荧光定量PCR法鉴定采用Taqman探针和实时荧光定量PCR法检测131例患者送检标本金黄色葡萄球菌中nuc基因和mecA基因,操作严格按试剂盒说明书进行。nuc基因阴性且mecA基因阳性者为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)，nuc基因阳性且mecA基因阴性者为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)，nuc、mecA基因共同阳性者为MRSA。

2结果

131例患者送检标本中，经细菌培养和药敏试验鉴定MRCNS 25例、MSSA 66例、MRSA 40例。实时荧光定量PCR法检测nuc基因阳性106例，mecA基因阳性85例；其中MRSA 60例，MRCNS 25例，MSSA 46例。20例药敏试验检测为MSSA患者的送检标本中检出mecA基因，将其列为MRSA。

3讨论

目前，MRSA已成为国内外院内感染的首要致病菌，与HBV、HIV并列为世界范围的三大难题[4~7]。MRSA 的耐药机制主要为耐药岛，其中MRSA 对甲氧西林耐药的编码基因mecA位于金黄色葡萄球菌mec基因盒上，mecA基因表达的PBP2a蛋白在细菌耐药中起关键作用。mecI和mecR1是一对在转录水平上调控mecA基因转录的调节基因，位于mecA基因的启动子上游。在无抗生素刺激的情况下，mecI 所编码产生的mecI蛋白结合在mecA基因的启动子部位，使得mecA 基因表达处于抑制状态。但是，当环境中存在相应抗生素(如青霉素、苯唑西林等)时，抗生素一方面攻击正常PBPs的转肽酶功能域，使其失去活性而丧失合成细菌细胞壁的功能，另一方面可以作为诱导剂，与分布在细菌胞膜上的由mecR1 基因编码的mecR1蛋白相结合，使其发生自裂解而发挥肽酶活性，分解结合在mecA 启动子上的阻遏蛋白mecI,从而启动mecA的表达，产生PBP2a，代替PBP2 的转肽酶活性，继续金黄色葡萄球菌肽聚糖的合成，维持MRSA 耐药性[8]。

本研究结果显示，实时荧光定量PCR法在20例药敏试验为MSSA感染者的基因中检测到mecA 基因，并将其判定为MRSA感染，这提示实时荧光定量PCR法诊断MRSA的能力要高于药敏试验。MRSA因其传播途径广、致病性强、多重耐药性等特点，成为临床治疗的难点[9,10]。本研究证实，应用实时荧光定量PCR法可快速鉴定金黄色葡萄球菌及MRSA，检测简便，敏感性强，准确性高，能够在疾病早期及时发现MRSA的感染或潜在的mecA耐药基因，为临床合理使用抗生素提供可靠依据，防止病情恶化，有效避免院内感染，有推广价值。

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(收稿日期：2015-05-12)

中图分类号：R631

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2016)06-0080-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.06.031

通信作者：刘蕊(E-mail: lr3595@163.com)