牛病毒性呼吸道疾病混合感染的病例诊断报告

刘阳阳 张玲玲 倪宏波 闻晓波

牛病毒性呼吸道疾病混合感染的病例诊断报告

刘阳阳 张玲玲 倪宏波 闻晓波*

（黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆 163319）

牛呼吸道疾病综合征是严重危害全球养牛业的一类重要疾病，具有高发病率和高死亡率的特点。本文对近日哈尔滨某牛场新引进牛只，几天后患病，采集鼻拭子，提取总DNA或RNA，进行牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感3型病毒、牛病毒性腹泻病毒和牛腺病毒的PCR或RT-PCR检测，确诊病牛为IBRV、BPIV和BVDV混合感染，情况较为严重，建议及时做好相关防治措施。

牛呼吸道疾病综合征；PCR；IBRV；BPIV；BVDV

牛呼吸道疾病综合征（Bovine respiratory disease complex，BRDC）是严重危害养牛业的一类重要疾病，临床症状多表现为食欲下降、精神沉郁、高热、呼吸困难和咳嗽等症状，牛自身免疫力、应激强度、饲养管理也会影响疾病的严重程度。BRDC主要危害犊牛、育肥牛和奶牛，发病率和死亡率高，发生疾病后往往会给养殖户造成重大的经济损失。BRDC的病因比较复杂，常发生于新引进的牛群，存在病毒、细菌和支原体等多种传染性病原混合感染［1，2］，其中病毒是主要的病原。目前分离到的病毒主要有牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV）、牛副流感3型病毒（Bovine parainfluenza virus type 3，BPIV-3）、牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛呼吸道合胞体病毒（Bovine respiratory syncytial virus，BRSV）和牛腺病毒（Bovine adenovirus，BAV）等［3，4］。这些病毒能够损坏牛呼吸道上皮细胞，导致牛肺炎、支气管炎等疾病，而且还可以抑制牛的免疫系统，从而更易继发其他病原感染，危害牛体健康，进一步推升发病率和死亡率，从而加重经济损失［5］。此外，潮湿阴冷的环境、脱水缺氧的状态、恶劣的天气及污浊的空气都有可能诱发BRDC的产生［6］，因此要注意改善牛舍环境，注意防寒保暖。

IBRV是引起牛急性、热性、接触性鼻气管炎的病原，是世界卫生组织（WHO）列出的B类传染病之一，其可感染牛呼吸、黏膜、神经、生殖等多个系统，并造成牛免疫力下降，从而容易继发其他感染，使病情加重，导致死亡率上升［7］；还能够影响育肥牛的生长发育、奶牛的产奶量等，对养牛业造成重大经济损失。

BPIV-3是BRDC的主要病原之一，能够引起急性、接触性的牛副流感性感冒，又称“运输热”。该病毒能侵害牛呼吸系统，引发上呼吸道黏膜发生卡他性炎症，使免疫机能下降而易继发细菌感染，导致肺炎产生，降低了牛的生产性能，孕畜感染可能会流产，治疗成本和死亡率也升高。

BVDV也是BRDC的重要病原之一，能够引起牛病毒性腹泻-黏膜病，其感染还会抑制牛机体免疫系统，导致疫苗免疫失败，也容易继发其他病原感染，造成严重的危害。怀孕期间的母牛感染BVDV可能发生死胎、流产等繁殖障碍并向外排毒、散毒，危害健康牛群，形成持续性感染［8］。临床特征为黏膜发炎、糜烂、坏死和腹泻。BVDV感染能引起黏膜病爆发，死亡率可达100%，因此要格外注意对此病的预防和控制。

本文对近日哈尔滨某牛场患BRDC牛群进行病毒分离鉴定，确诊为IBRV、BPIV-3和BVDV混合感染。现报告如下。

1 实验材料和方法

1.1病料、试剂

哈尔滨某牛场采集的病牛鼻腔棉拭子病料5份。反转录试剂盒购于Thermo公司；RNA提取试剂盒购于康为世纪公司；DNA提取试剂盒购于博凌科伟公司。

1.2引物设计

根据GenBank中已发表的IBRV、BPIV-3、BVDV、BAV基因序列，设计特异性鉴定引物。引物由华大基因科技有限公司合成。引物序列、基因名称见表一。

1.3病毒的处理和核酸的提取

将病料用800μl灭菌后的PBS溶液浸润，浸润所得溶液按照博凌科伟公司的DNA提取试剂盒和康为世纪公司的RNA提取试剂盒的操作步骤，分别提取DNA和RNA。按照Thermo公司的反转录试剂盒操作说明，将提取的RNA进行反转录获取cDNA。

2 实验结果

经对病料病毒DNA和RNA的提取及PCR扩增，PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳分析。IBRV、BPIV和BVDV检测目的片段大小分别为423bp、333bp和265bp。结果如图一所示，5份病料均检出IBRV、BPIV-3和BVDV，确诊为IBRV、BPIV-3和BVDV混合感染。

3 讨论

近年来，随着我国养牛业的快速发展，牛只的跨区域流动更加频繁，而疾病的传播和运输应激造成牛呼吸系统疾病也更加泛滥，给养牛业造成巨大损失［9］。通过对近日哈尔滨某牛场新引进牛只患病后采集鼻腔黏膜拭子，运用PCR方法检测出IBRV、BPIV-3和BVDV混合感染，病情比较严重，需要尽快采取相应处理措施，预防感染本场原有牛群，对患病牛只进行隔离和对症治疗。对于牛群呼吸道疾病的综合防治，首先应做好牛群引进的管理工作，禁止从疫区和正在发病的地区引进牛只，对引进牛只进行隔离观察和检测，做好必要的预防接种和驱虫后再与健康牛群混群；其次要加强饲养管理，确保牛群拥有清洁、充足的饮用水，适当补充维生素、矿物质元素等营养，并确保饲料新鲜；再者要重视卫生和疾病防控，做好通风、清洁和定时消毒工作，避免牛群过于拥挤，及时发现患有呼吸系统疾病牛只以早隔离、早治疗。

［1］ 马春霞，李军，覃勇，等.牛呼吸道疾病综合征病例的病原分析［J］.中国畜牧兽医，2015，42（9）：2481-6.

［2］ 范颖，张继瑜，周绪正，等.牛呼吸道疾病的病原学与防制研究进展［J］.中国畜牧兽医，2013，40（1）：157-163.