不同炮制方法对手掌参抗疲劳和抗氧化活性的影响

何侃亮

陕西省中医医院 (西安 710003)



不同炮制方法对手掌参抗疲劳和抗氧化活性的影响

何侃亮

陕西省中医医院 (西安 710003)

摘要目的：探讨不同炮制方法对手掌参抗疲劳和抗氧化活性的影响。方法：利用羊奶炮制法、冷浸炮制法和蜜制炮制法来制备手掌参样品。通过小鼠的游泳实验和吊网实验来考察三种炮制品不同剂量的抗疲劳作用。利用药物对DPPH自由基和ABTS自由基的清除作用来考察三种炮制品不同浓度的抗氧化活性。结果：与空白对照组相比，服用三种炮制品不同剂量的小鼠，其游泳时间和悬网时间均明显延长，且呈现出剂量依赖性。服用三种炮制品不同浓度的小鼠，其对DPPH自由基和ABTS自由基均有清除作用，且呈现出浓度依赖性。同时无论是延长作用还是清除作用，其作用效果均稍有不同，顺序为羊奶炮制品大于蜜制炮制品大于冷浸炮制品。除了冷浸泡制品以外，羊奶泡制品和蜜制炮制品的作用效果与空白对照组比均具有显著的差异。结论：手掌参有良好的抗疲劳和抗氧化活性，且羊奶炮制法可以很好的保留手掌参的药效成分。

主题词中药炮制学@手掌参

手掌参，又名手参，佛手参，阴阳参等，为兰科地生草本植物手掌参Gymnadenia conopsea (L.) R.Br的干燥块茎。具有补肾益精、滋补强壮和生津止渴等功效，用于病后体弱、虚劳消瘦、肺虚咳喘和神经衰弱等病症，具有抗疲劳、抗氧化及抗衰老等多种生物活性，在民间，手掌参为常用的蒙药、藏药[1]。目前，手掌参多奶制后应用，以提高其补益作用[2]。本文首次尝试使用其它方法来炮制手掌参，并进行抗氧化和抗疲劳的药效学的比较研究，通过比较几种炮制方法的药效学效果差异，进而评价炮制方法的适用性。

1材料1.1动物昆明种小鼠，体重20±2g，雌雄兼用，购于第四军医大学实验动物中心，合格证号为陕动准字第01号。

1.2仪器旋转蒸发仪(上海申胜生物技术有限公司)；AY220 电子分析天平(日本岛津分析仪器公司)；HH-4数显恒温热板水浴锅(国华电器有限公司)。

1.3实验试药手掌参药材采自陕西秦岭山区；1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH，美国Sigma公司)；2 ,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS，美国Sigma公司)；红景天胶囊(四川宇妥藏药药业有限责任公司)；羧甲基纤维素钠(CMC-Na，上海精析化工试剂有限公司，钠含量6.5～8.5%)；无水乙醇(天津市科密欧化学试剂有限公司)；鲜羊奶购于郊区农场；栀子购自于宝芝林大药房。

2方法2.1样品制备2.1.1羊奶炮制法：取100g手掌参，加250mL鲜羊奶，浸泡1h，文火煎煮至羊奶全部渗到药材不留液体为标准。取出，晒干，在60℃干燥，粉碎过120目筛备用。

2.1.2水制法:取100g手掌参，加250mL水，浸泡1h，文火煎煮至水全部渗到药材不留液体为标准。取出，晒干，在60℃干燥，粉碎过120目筛备用。

2.1.3蜜制炮制法[3]：取100g手掌参，加250mL 5%栀子液，浸泡至药汁吸尽。余同2.1.2。

2.2小鼠的抗疲劳研究[4]2.2.1游泳试验：取20±2g的小鼠110只，按体重随机分成11组，每组10只，分别为空白对照组、阳性对照组和给药组(羊奶炮制法组、冷浸炮制法组和蜜制炮制法组)。空白对照组给予0.5%CMC-Na溶液，阳性对照组给予红景天(1g/kg)，给药组分别设高、中、低剂量组(4、2、1g/kg相应药物的混悬液)，口服灌胃给药,1d1次，连续给药7d，末次给药1h后，将小鼠分别投入装有水(水温25℃，水深40cm)的玻璃缸内。分别记录每组小鼠的游泳时间，并利用t检验来比较空白对照组和各给药组小鼠游泳时间的差异。

2.2.2吊网试验：按“2.2.1”项下要求进行分组，给药。末次给药40min后，将小鼠倒悬于水平的粗钢丝上，分别记录每组小鼠的悬网活动时间，并利用t检验来比较空白对照组和各给药组小鼠吊网活动能力的差异。

2.3抗氧化活性研究2.3.1对DPPH自由基的消除作用[5]：采用DPPH方法来评价羊奶炮制品、冷浸炮制品和蜜制炮制品的体外抗氧化活性。将2mL0.25mmol/L DPPH 的乙醇溶液与3种炮制品的高、中、低浓度溶液分别等体积混合均匀，室温避光静置30min，于517nm处检测吸光度值(AS)；用无水乙醇作为空白对照，于517nm处测定A0；不同浓度的羊奶炮制品、冷浸炮制品和蜜制炮制品与无水乙醇等体积混合均匀后，在517nm出测得AX。将维生素C作为阳性对照，同法操作，进行平行实验。按公式(1)计算清除率。

DPPH清除率=[1-(AS-AX)/A0]×100% (1)

2.3.2药物对ABTS自由基的清除作用[6]：配制好一定浓度的ABTS自由基储备液，不断稀释，使其在734nm处的吸光度值为0.7±0.02。测定时，在比色皿中加入10μL的药物溶液(不同浓度的羊奶炮制品、冷浸炮制品和蜜制炮制品溶液)，之后加入490μL的ABTS+工作液，混合均匀后，于30℃静置10min，在734nm处测定吸光度值AS。将无水甲醇作为空白，以490μL ABTS·+溶液和10μL无水甲醇混合后测定吸光度值A0。将维生素C作为阳性对照，按照同样操作步骤，进行平行实验。按公式(2)计算清除率。

ABTS清除率=(1-AS/A0)×100% (2)

3结果3.1小鼠的抗疲劳实验由表1可知，三者对小鼠游泳时间和悬网活动时间延长顺序为：羊奶炮制品>蜜制炮制品>冷浸炮制品，同时除了冷浸炮制品，其它两组与空白对照组结果相比具有显著差异(P<0.05)。

3.2抗氧化活性研究从表2可见，蜜制炮制品和冷浸炮制品并不十分适用于手掌参的炮制，且羊奶炮制法可以有效的保留抗氧化成分。

4结论本文使用3种方法对手掌参进行了炮制，发现3种炮制品均有抗疲劳和抗氧化活性，且抗疲劳和抗氧化活性均呈现出剂量(浓度)依赖性。冷浸炮制法和蜜制炮制法并不能很好的保留手掌参的药效成分，因此相对于羊奶炮制法来说，冷浸炮制法和蜜制炮制法并不适用于手掌参的炮制。同时也证实了手掌参有良好的抗疲劳和抗氧化活性，具有一定的开发价值，且羊奶炮制法可以很好的保留手掌参的药效成分，是炮制手掌参的有效方法。

参考文献

[1] 格格日勒,包勒朝鲁,那生桑.蒙药材手参研究概况[J].亚太传统医药,2013, 9(10):22-23.

[2] 海平,苏雅乐,王秀兰.手参及其炮制品盐酸小檗碱含量的测定[J].中国民族医药杂志, 2009, 15(3):62-64.

[3] 王丽娜.蜜制平性人参炮制工艺研究[D].沈阳：辽宁中医药大学,2006.

[4] 范少敏,郭琳,冯改利,等.秦巴山区人参属中药抗应激和抗疲劳作用的研究[J].陕西中医, 2014,35(6):756-757.

[5] 冯改利,宋小妹,邓翀,等.DPPH法筛选大血藤抗氧化活性有效部位[J].陕西中医,2011, 32(9):1233-1235.

[6] 张爱莲,于敏,徐宏化,等.齿瓣石斛的化学成分及其抗氧化活性[J].中国中药杂志, 2013, 38(6).

(收稿2016-01-07；修回2016-03-04)

Influence of different processing methods on Gymnadenia R.Br anti-fatigue effect and antioxidant activity

Shaanxi Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine(Xi’an 710003)

He Kanliang

KEY WORDSScience of Processing (TCD)@GymnadeniaR.Br.

ABSTRACTObjective：To investigate the effect of different processing methods on Gymnadenia R. Br anti-fatigue and anti-oxidant activity. Methods：Gymnadenia R. Br samples were prepared by milk processing method, cold soak processing method and honey processing method. The different dose of three processing products anti-fatigue effect were examined by swimming and hanging net mice experiments. The different concentrations of three processing products antioxidant activity were examined by drug on DPPH radical and ABTS radical scavenging effect. Results： Compared with the control group, taking different doses of three processing products of the mouse, and its time of swimming and hanging nets were significantly prolonged time, and in a dose-dependent manner; taking different concentrations of three processing products of the mouse, and its DPPH free radical and ABTS radical scavenging effect, and exhibits a concentration-dependent manner. At the same time, whether to prolong the effect or scavenging effect, its effects are slightly different, in order of milk processing products over honey processing products over maceration processing products. In addition to cold soak products, milk products and honey products effect than the control group have significant difference. Conclusion：Gymnadenia R.Br has a development value with obviously anti-fatigue and antioxidant activity. The milk processing method was an effective method for processing Gymnadenia R.Br.

【中图分类号】R282

【文献标识码】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.06.051