12种中药饮片耐热菌污染状况调查及风险评估*

杨晓莉　李　辉　绳金房

陕西省食品药品检验所(西安 710065)



12种中药饮片耐热菌污染状况调查及风险评估*

杨晓莉李辉绳金房△

陕西省食品药品检验所(西安 710065)

摘要目的：调查陕西省12种常见中药饮片的耐热菌污染状况，评估安全风险，为中药饮片的用药安全及微生物质量控制提供支持。方法：按照《中国药典》2015年版需氧菌总数(TAMC)检验方法，100℃水浴30min热处理后，对金银花等12种中药饮片进行耐热菌数测定及分离、鉴别。结果:热处理后，中药饮片耐热菌平均较TAMC下降低2.6个对数单位。耐热菌数>10cfu/g的(97/120)为80.84%，分别检出缓慢葡萄球菌、地衣芽孢杆菌、放射根瘤菌、少动鞘氨醇杆菌、阪崎肠杆菌、泛菌属、巴斯德菌属等多种耐热菌。结论:中药饮片耐热菌污染情况严重，应结合耐热菌的污染种类和数量，建立合理的耐热菌质控标准，保障中药饮片的用药安全。

主题词饮片耐热菌安全

中药饮片是中医药的重要特色和优势之一，目前其质量控制是中药质量控制的薄弱环节，在每年国家食品药品监管局组织的药品质量抽查中，中药饮片的合格率都是最低的[1-2]。中药饮片常经过煎煮或泡服而用于患者，某些污染微生物经过高温处理后可能依然能够存活，会对用药安全性造成威胁。目前中国药典2015年版，美国药典(USP38)、欧洲药典(EP8.0)、日本药局方(JP16)等标准虽收载了中药饮片的微生物质量控制标准[3-6]，但对中药饮片耐热菌尚未做出规定，中药饮片耐热菌污染状况鲜有报道。本文对金银花、百合、龙骨、合欢皮、白术、煅牡蛎、夏枯草、鸦胆子、重楼、姜黄、穿心莲、海螵蛸等12种常用口服兼外用的品种，包括花类、根茎类、皮类、种子类、动物类等120批中药饮片进行耐热菌污染状况的调查研究，评估安全风险，为中药饮片的用药安全及微生物质量控制提供支持。

1仪器和材料1.1试验菌株金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26 003]；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 501]；大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B) 44 102]；白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98 001]；黑曲霉( Aspergillus niger)[CMCC(F) 98 003]均来自中国食品药品检定研究院，工作用菌株为第3代。

1.2样品信息为使样品更具代表性，样品采集覆盖陕西省区域内的西安、榆林、商洛、铜川、汉中等5地，涉及生产企业、零售药店、医院药房和药材批发市场，每个品种10批，共120批。

1.3培养基胰酪大豆胨液体培养基(TSB)，胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)，沙氏葡萄糖液体培养基(SDB)，沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)，以上培养基,均购自北京陆桥技术有限责任公司，批号依次为1302222、140505、130806、130821，培养基适用性检查均符合《中国药典》2015年版和《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》的规定[3,7]。

1.4仪器设备HFsafe-1200LC型生物安全柜，上海力申科学仪器有限公司；SHA-C型水浴恒温振荡器，天津鑫博得有限公司；LRH-250F生化培养箱，上海一恒科学仪器有限公司；LRH-250F霉菌培养箱，上海一恒科学仪器有限公司；LRH-150B生化培养箱，广东省医疗器械厂；DK-98-1恒温水浴锅，天津奉斯特仪器公司；VITEK2全自动微生物鉴定系统，法国梅里埃有限公司；OLYMPUS.CH型三目显微镜，日本奥林巴斯公司；涡旋混合器，德国IKA公司。

2实验方法2.1供试液制备称取25g样品加入pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液225mL，振荡10min，制成1∶10供试液。

2.2需氧菌总数(TAMC)和耐热菌测定方法取1∶10供试液及连续5个10倍稀释级以TSA倾注法(1mL/皿)测定TAMC，另取1∶10供试液经100℃水浴30min处理后，取1∶10供试液及连续3个10倍稀释级，以TSA倾注法(1mL/皿)测定耐热菌数。

2.3菌落鉴定对2.2中分离到的典型菌落、疑似菌落，接种于TSA平板上，于55℃培养24h分离纯化、革兰染色镜捡，并进行VITEK2全自动微生物系统的分析、鉴定，以确证污染菌的种属。

2.4分析方法实验原始数据对数转换，规定计数实验中TAMC或耐热菌 >107cfu/g对数值计为7.0，TAMC或耐热菌数<10cfu/g对数值计为0.5，定量结果采用SPSS19.0软件对数据统计分析，对定性结果归纳分析。

3实验结果3.1耐热菌计数耐热菌>10cfu/g的样本(97/120)为80.8%，耐热菌数>105cfu/g的样本(8/120)为6.7%，耐热菌>102cfu/g的样本(59/120)为49.2%，12种中药饮片平均染菌量对数转换结果见表1，耐热菌平均染菌量鸦胆子最高，金银花最低。耐热菌数较TAMC平均下降低2.6个对数单位。鸦胆子、穿心莲、海螵蛸、夏枯草等品种耐热菌检出率仍较高，在102～103CFU/g。

3.2聚类分析按品种计算出转换数据的各检测指标的均值，然后以品种对指标进行聚类分析，结果见图1，TAMC、耐热菌聚类分析结果表明花类的金银花、百合等，根茎类的白术、姜黄等因其抑菌作用，微生物负荷相对较低，而其他根茎类、全草类、种子类及动物药的微生物负荷较高。从性状角度看，微生物的种类和数量的分布具有不均一性，不同品种差异较大。

3.3耐热菌鉴定结果参照《中国药典》2015年版9204微生物鉴定指导原则，结合部分生化反应及VITEK2全自动微生物鉴定系统，对样本中的疑似菌落进行鉴定，结果见表2。结果表明，12种中药饮片普遍存在耐热菌污染，以革兰阴性芽孢杆菌为主，检出放射根瘤菌等10种耐热菌，以缓慢葡萄球菌、放射根瘤菌，少动鞘氨醇杆菌较为常见。

注：G+表示革兰阳性菌，G-表示革兰阴性菌

3.4风险评估结果对检出的10种耐热菌进行分析发现，检出条件致病菌8种，致病菌和益生菌各1种。其中缓慢葡萄球菌是人类或许多动物不可忽视的致病菌，可引起人类疾病并在医院感染中占据重要地位，尤其对于新生幼儿及存在严重基础疾病或长期接受医院治疗的病人等免疫力低下的人群更容易导致严重的后果[8]。铅黄肠球菌在临床上不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等[9]。放射根瘤菌是促使植物异常增生的一类革兰阴性需氧杆菌，此菌作为一种条件致病菌主要感染对象均存在导致机体免疫功能下降的因素，可引起菌血症等[10]。少动鞘氨醇单胞菌可引起术后慢性蜂窝组织炎、败血症等少动是医院感染条件致病菌[11]。巴斯德菌属可以寄生在家禽或猫、狗等哺乳动物口腔及上呼吸道中的共生菌，可引起呼吸道感染，败血症极为少见但是最为严重[12]。莫拉菌属人体呼吸道常见病原菌，可引起人体上下呼吸道感染[13-14]。泛菌属亦为条件致病菌，枯草芽孢杆菌，解淀粉芽孢杆菌，深褐芽孢杆菌同属枯草芽孢杆菌的近缘种群[15]。解淀粉芽孢杆菌是特殊人群的潜在致病菌[16]。阪崎肠杆菌可以引起新生儿脑膜炎、坏死性结肠炎和菌血症, 甚至导致死亡或伴随严重的神经系统后遗症、发育障碍，是常见致病菌[17-18]。地衣芽孢杆菌是我国农业部 2003年 318 号公告批准使用的饲料级菌株之一，治疗下痢和腹泻效果很好, 是制造微生态制剂的理想菌株[19]。地衣芽孢杆菌短期内治疗具有潜在保护肝硬化患者肠黏膜屏障的作用，从而降低循环血中的内毒素和氨水平[20]。综上所述，中药饮片耐热菌污染状况不容乐观，经过煎煮、炮制等热处理方式尚不足以杀灭其中的耐热菌，使用中药饮片的人群免疫力低，更倾向于成为致病菌和条件致病菌的易感人群。因此，加强中药饮片的质量控制，制定合理的标准是中药饮片产业健康发展的必由之路。

4讨论中药饮片经加热处理后污染微生物数量显著降低，但耐热菌仍普遍检出，说明即使经过煎煮处理的中药饮片仍然存在微生物污染的风险，特别是检出阪崎肠杆菌等致病菌和条件致病菌，威胁患者用药安全。益生菌对患者不造成危害，反而有利于平衡菌群，可区别对待。同时，中药饮片从种植、采集、储存、加工炮制、运输等环节与土壤、水等环境和人员之间存在密切联系[21]。这些环节都可能导致中药饮片的微生物污染，耐热菌因其对高温有特殊的耐受性，煎煮等常规的炮制手段不足以将其杀灭，因此应特别重视。应结合中药饮片耐热菌的污染现状和特点，对饮片用药安全进行风险评估，制定有针对性的微生物学质量控制标准，逐步规范中药饮片的生产各环节，降低微生物负荷，降低中药饮片安全风险，促进中药饮片产业的健康发展。

参考文献

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(收稿2016-02-22；修回2016-03-15)

12 kinds of Chinese herbal medicine thermoduric bacteria contamination investigation and risk assessment

Shaanxi Institute for Food and Drug Control(Xi’an 710065)

Yang XiaoliLi HuiSheng Jinfang

KEY WORDSHerbal pieces for decoctionHeat resistant bacteriaSafety

ABSTRACTObjective: To investigate 12 kinds of Chinese herbal medicine thermoduric bacteria contamination and assess potential risk, in order to provide support for medication safety and microbial quality control. Methods: According to the methods of the determination of total aerobic microbial count (TAMC) of Chinese pharmacopoeia 2015 edition, after 100℃ water bath 30min heat treatment, checked lonicerae japonicre flos etc.12 kinds of Chinese herbal medicine total thermoduric bacteria count (TTBC), and then separated and identified. Results: After heat treatment ,Chinese herbal medicine TTBC compared to TAMC average reduce 2.6 logarithm units. TTBC> 10 cfu/g was 80.84% (97/120),such as Staphylococcus lentus , bacillus licheniformis，rhizobium radiobacter，sphingomonas paucimobilis，enterobacter sakazakii，pantoea agglomerans，pantoea spp a variety of thermoduric bacteria had been checked out. Conclusion: Thermoduric bacteria contamination situation of Chinese herbal medicine was serious, it is necessary to improve the sanitary conditions shall establish reasonable thermoduric bacteria quality control standards which based on the pollution type and quantity ,in order to Chinese herbal medicine medical security.

通讯作者△

【中图分类号】R282

【文献标识码】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.06.045

*陕西省中药饮片微生物污染状况调查及微生物限度标准的研究(S2013SF3711)