乙肝血清学标志物与HBV-DNA含量检测的临床意义

丁雪晴, 徐红珍, 刘俊慧

(江苏省泰州市第二人民医院 检验科, 江苏 泰州, 225500)



乙肝血清学标志物与HBV-DNA含量检测的临床意义

丁雪晴, 徐红珍, 刘俊慧

(江苏省泰州市第二人民医院 检验科, 江苏 泰州, 225500)

关键词:乙肝病毒; 乙肝血清学标志物; 酶联免疫吸附法; 时间分辨荧光免疫分析; HBV-DNA含量

乙肝血清学标志物检测已从酶联免疫吸附法定性试验发展到时间分辨荧光免疫分析定量分析，为临床判断患者的病情、传染性和疗效提供重要的依据。本研究采用酶联免疫吸附法(ELISA)、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)、荧光定量法PCR(FQ-PCR)分别检测492例乙肝患者血清学标志物与HBV- DNA含量，探讨三者的关系和临床意义，现报告如下。

1资料与方法

1.1临床资料

采集本院感染科2014年5月—2015年4月收治的492例乙肝患者的静脉血样本，其中男316例，女176例。于当日分离血清，-70℃保存，并于1周内检测。

1.2研究方法

1.2.1HBVm检测方法：采用酶联免疫吸附法( ELISA)和时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)检测HBVm，包括乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒表面抗体(HBsAb)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒核心抗体(HBcAb)。TRFIA乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的检测范围0.030～150 IU/mL，乙肝病毒e抗原(HBeAg)检测范围0.02～120 PEIU/mL。

1.2.2HBV-DNA检测：HBV-DNA采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)浓缩提纯裂解法。循环参数：37℃5 min，94℃ 1 min，95℃ 5 s，60℃ 30 s，共42个循环。荧光信号收集在反应体系温度60℃，由仪器软件自动分析出结果。线性范围为1×(102～108)copies/mL，小于102copies/mL为阴性。

1.2.3仪器和试剂：上海新波EFFICUTA 全自动时间分辨仪及其配套试剂，上海新波ANYTEST全自动荧光仪。ELISA法诊断试剂盒购自北京万泰生。Rotor-Gene Q荧光PCR仪；凯杰生物工程(深圳)有限公司 HBV DNAv3核酸扩增检测试剂盒(PCR-荧光探针法)及标准品，试剂批号：20141202。

1.3分组方法

分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)对492例血清进行HBVm的检测，为表述方便，设定乙肝病毒五项血清学标志物第1～5项的排列顺序为[2]: ① 乙肝表面抗原(HBsAg); ② 乙肝表面抗体(抗-HBs); ③ 乙肝e抗原(HBeAg); ④ 乙肝e抗体(抗-HBe); ⑤ 乙肝核心抗体(抗-HBe)。本次检测共有7种乙肝病毒五项血清学标志物组合模式，分别是①③⑤，①④⑤，②④⑤，①⑤，①②④⑤，①②③⑤，①。依据HVB-DNA载量将患者分为5个级别：小于102copies/mL，102～103copies/mL，104～105copies/mL，106～107copies/mL，108copies/mL。

2结果

ELISA和TRFIA共检出HBVm的7种不同模式。两种方法检测①③⑤，①④⑤，①⑤，②④⑤，①的结果比较无显著差异(P>0.05)，检测①②④⑤，①③④⑤的结果比较有显著差异(P<0.05)。见表1。TRFIA 7种不同的血清HBVm模式HBV-DNA检测的阳性率具有显著差异，其中①④⑤，①⑤，②④⑤，①这4种模式与①③⑤比较有显著差异(P<0.05)，①②④⑤，①③④⑤这2种模式与①③⑤比较无显著差异。见表2。

对时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)检测HBsAg和HBeAg为反应性的142例患者进行了HBsAg和HBeAg含量与HBV-DNA载量之间的关系分析。随着HBsAg、HBeAg含量的增高，HBV-DNA载量也增高，说明二者存在一定的相关性。但同数量级HBV-DNA载量HBsAg、HBeAg含量个体差异较大，表现为异常高于或低于相同数量级标本的平均水平。见表3。

与TRFIA法比较, *P<0.05。

与①③⑤模式比较, *P<0.05。

3讨论

乙型肝炎是一种严重危害人类健康的疾病，血清学标志物乙肝两对半的检测为临床医师提供了可靠的依据[1]。ELISA法对乙肝两对半血清标志物定性测定是传统的方法，其只能提供“阴”、“阳”性的定性结果，并不能给临床诊断和治疗提供更多的信息。TRFIA是一种能定量检测HBV标志物的检测方法，它的灵敏度高于ELISA法，且具有较宽的线性范围[2]。通过对492例血清样本采用两种方法对比研究发现，两种方法检测①③⑤，①④⑤，①⑤，②④⑤，①时无显著差异(P>0.05)，检测①②④⑤，①③④⑤时差异有统计学意义(P<0.05)。TRFIA法高于ELISA法。①②④⑤的模式可能是新的亚型再感染，或病毒发生变异后。表达量低也有可能是①④⑤向②④⑤的转变过程，①③④⑤模式可能是新的亚型感染病毒发生变异后表达；或者急性HBV感染趋向恢复慢性携带者，①③⑤模式向①④⑤模式的转换过程，ELISA法不能检出低浓度的HbeAg、HBeAb。ELISA法灵敏度低，存在前滞现象，易受环境、操作等多种因素的影响。TRFIA法能较为准确地反映其血清中HBV抗原抗体的含量。并且能检出低水平复制的标本，避免漏检，可以诊断出隐源性肝炎[3-4]。

患者血清中 HBV-DNA的存在是HBV 感染最为直接、灵敏和特异的指标，是判定体内HBV感染、复制及传染性强弱的金标准。本研究中，患者为①③⑤模式时HBV-DNA的阳性率为80.3%，明显高于其他组合模式，说明e抗原是乙肝病毒在体内复制的标志，e抗原含量的增高也提示乙肝病毒复制的活跃程度，患者为①③⑤模式时具有较强的传染性[5-6]。作者发现这一数据较以往的研究报道低，可能是由于患者经抗病毒药物治疗后，体内HBV被抑制，而体内之前产生的HBeAg未被完全降解；亦可能患者体内的HBV-DNA载量已经很低，超出本研究的检测范围。①④⑤模式时HBV-DNA的阳性率为55.4%，这与张代春[7]报道的54%相符，HBeAb的出现不能说明无传染性，病毒复制终止。作者注意到有患者的HBV-DNA的载量较高，说明患者的传染性还很强。以HBeAg转换为HBeAb作为判断病毒复制、有无传染性的标准不可靠。②④⑤模式时HBV-DNA的阳性率为18.7%，这组模式中HBV-DNA阳性的患者多为慢性乙肝患者、肝硬化、原发性肝癌患者，HBV-DNA的载量多为102～103，说明患者仍有低水平的病毒复制，应引起医生和患者的重视。①②④⑤和①③④⑤这两种模式HBV-DNA阳性率分别为70%和80%，虽然这两种模式只占乙肝的少数，但HBV-DNA阳性率高，且HBV-DNA的载量也较高。可能是病毒发生变异，多种亚型并存。ELISA法因试剂方法的局限性，对这两种模式检出率低，需做TRFIA法定量检测，评价HBV- DNA病毒载量。

探讨HBV-DNA载量与HBsAg、HBeAg含量的关系。作者发现随着HBsAg、HBeAg含量的增高，HBV-DNA载量也增高，说明二者存在一定的相关性。但同数量级HBV-DNA载量HBsAg、HBeAg含量个体差异较大，表现为异常高于或低于相同数量级标本的平均水平，与岳峰等[8]报道相符。作者跟踪检测①③⑤和①③④⑤这两种模式患者各1例，①③⑤患者的HBV-DNA载量从106降到102，HBsAg含量从177 IU/mL降至3.06 IU/mL，HBeAg含量从171 IU/mL降至7.17 IU/mL。①③④⑤患者的HBV-DNA载量从106降到102，HBsAg、HBeAg含量未出现明显下降。HBV-DNA载量与HBsAg、HBeAg含量之间的关系仍需进一步探讨。

参考文献

[1]刘磊, 刘新启. HBsAg携带者乙肝血清学标志物模式分析[J]. 当代医学, 2011, 17(6): 28-29.

[2]徐红珍, 王露. 两种方法检测乙肝血清学标志物的比较分析[J]. 当代医学, 2011, 7(17): 29-31.

[3]肖清华, 陈华卿, 程进明. α-2b干扰素联合胸腺肽治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的疗效[J]. 黑龙江医药科学, 2016, 39(1): 145-146.

[4]李佳楠, 代丽娟, 韩有文. 健脾疏肝汤对慢性乙型肝炎患者血清 MMP-2和TIMP-2的影响[J]. 黑龙江医药科学, 2015, 38(1): 111-112.

[5]贾薇, 胡立华, 张沛怡. Germlin1与NT-proBNP在肝硬化进展过程中的表达[J]. 黑龙江医药科学, 2015, 38(2): 128-130.

[6]张权, 邹艳. 三种药物治疗拉米夫定耐药慢性乙肝患者的疗效观察[J]. 黑龙江医药科学, 2015, 38(3): 132-133.

[7]张代春. 乙型肝炎病毒血清学标志物与乙肝DNA相关性探讨[J]. 临床和试验医学杂志, 2008, 7(11): 82-83.

[8]岳峰, 刘婕, 沈敦. 荧光定量PCR检测HBVDNA与血清HBV标志物的关系[J]. 中国误诊学杂志, 2002, 11(2): 1628-1630.

收稿日期:2016-03-20

中图分类号:R 512.6

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2016)11-209-03

DOI:10.7619/jcmp.201611079