与脑膜炎奈瑟菌血清交叉的落菲不动杆菌的鉴定

李曲文，陈爱平，谢芳钦，林震宇

(1、福建省疾病预防控制中心，福建350001；2、福建省人兽共患病研究重点实验室，福建350001)



·病例报告·

与脑膜炎奈瑟菌血清交叉的落菲不动杆菌的鉴定

李曲文，陈爱平，谢芳钦，林震宇

(1、福建省疾病预防控制中心，福建350001；2、福建省人兽共患病研究重点实验室，福建350001)

关键词：脑膜炎奈瑟菌；洛菲不动杆菌；血清交叉

不动杆菌属（Acinetobacter）归于奈瑟菌科，不动杆菌属为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、硝酸盐还原阴性、不能运动的革兰阴性杆菌。菌体多为球杆状，常成双排列，看似双球菌[1]。有时临床易于脑膜炎奈瑟菌混淆。本文对一株与脑膜炎奈瑟菌有血清交叉的洛菲不动杆菌的鉴定报告如下。

1　材料与方法

1.1菌株来源医院从一个8个月幼儿脑脊液培养分离到一株疑似脑膜炎奈瑟菌。（上机VITEK 2奈瑟菌（NH）鉴定卡：鉴定编码：3237400000，提示脑膜炎奈瑟菌，鉴定率93%）。

1.2实验材料血平板、巧克力平板购自环凯有限公司；乳胶凝集试剂购自英国OXOID公司；流脑诊断血清购自天津生物芯片公司，PCR反应试剂、DL 2000 Marker、购自Takara公司；琼脂糖、溴化乙锭(10mg/m1)等购自上海生工公司。Gel Doc XR+凝胶成像系统，Basic电泳仪，PCR扩增仪为G-Storm（英国GeneTech公司）。

1.3基因引物本研究所用的基因引物（参考文献[2]），全长16S RNA基因（参考文献[3])，寡核苷酸和测序均由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

1.4模板的制备分纯的细菌菌落，直接刮取适量于300μl的纯水制备成菌悬液，100℃煮沸裂解10min，10000r/min离心5min，取上清做为PCR检测的DNA模板。

1.5PCR反应条件PCR反应均采用20μl的反应体系，各组成成分的终浓度分别为：rTaq DNA聚合酶0.5U，dNTP 200μmol/L，上游引物0.4μmol/L，下游引物0.4μmol/L，DNA模板3μl。

1.6测序按照按天根技术有限公司细菌基因组提取说明书进行，常规PCR后，由上海生工生物工

2　结果

⑴革兰染色：革兰阴性球杆菌。

⑵氧化酶：阴性。

⑶生化鉴定情况：①上机VITEK-2革兰阴性（GN）鉴定卡：鉴定编码：0040000100100003，提示洛菲不动杆菌，鉴定率98%。②API20 NE编码为0000002提示洛菲不动杆菌，鉴定率98.9%。

⑷流脑乳胶凝集：A群（+++）、B群（+++）、C群（-）、W135群（-）。

⑸流脑血清凝集：A群（+++）、B群（-）、C群（-）、W135群（-）。

（6)实时荧光PCR：流行性脑膜炎双球菌核酸测定为阴性。

⑺常规PCR检测结果：CrgA-，Orf-2(A)-，SiaD (B)-，SiaD(C)-，SiaD(D)-，SiaD(W135)-，排除流脑。

⑻全长16S RNA基因测序结果：为不动杆菌属，鉴定率99.9%

3　讨论

不动杆菌属为一类非发酵糖革兰阴性杆菌，临床主要以鲍曼不动杆菌和洛菲不动杆菌为主，其广泛分布于自然界、医院、人体体表以及人体的上呼吸道内，是一种引起的机会性感染包括皮肤伤口感染，泌尿生殖道感染，肺炎，肺脓肿，还可引起败血症，心内膜炎，脑膜炎，脑脓肿等[4-6]。洛菲不动杆菌，专性需氧菌，营养要求不高，普通培养基上生长良好。在血平板平板上经35℃~37℃培养18h~24h后，可形成圆形、灰白色、光滑、湿润、边缘整齐、直径2~3mm的菌落，无色素形成；菌落较小，直径为1~1.5mm；菌体多为球杆状，常成双排列，看似双球菌，有时不易脱色，可单个存在，无芽胞、无鞭毛，黏液型菌株有荚膜。

而脑膜炎奈瑟菌专性需氧，5% CO2条件下生长更佳。35℃培养18~24h后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径1~2mm的小菌落。镜检一般为肾形或豆形革兰阴性双球菌，两菌接触面平坦或略向内陷，直径0.6~0.8μm。该菌鉴定主要通过氧化酶、糖类发酵和血清学等试验以及培养生长特点进行[7，8]。奈瑟菌为氧化酶阳性，葡萄糖、麦芽糖阳性。

两者鉴别要点，培养物经涂片、染色，如为革兰阴性成双排列的球杆菌，形态似奈瑟菌；KIA底层及斜面均不变色、无动力；氧化酶阴性，硝酸盐还原试验阴性，可初步确定为不动杆菌[9，10]。

本文中的洛菲不动杆菌，与流脑乳胶凝集：A群（+++）、B群（+++）和流脑A群（+++）血清凝集，但经实时荧光PCR、常规PCR、全长16S RNA基因排除脑膜炎奈瑟菌，这提醒我们在今后的检验工作中应该注意不动杆菌属与奈瑟菌属的鉴别。

参考文献

[1]Turton JF，Shah J，Ozongwu C，et al．Incidence of Acinetobacter species other than A. baumannii among clinical isolates of Acine-

中图分类号：R446.5，R378.1+5

文献标识码：A

文章编号：1674-1129(2016)03-0402-02

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.049

基金项目：福建省卫生和计划生育委员会青年科研课题（2014-1-26）程技术服务有限公司进行测序后在NCBI网站进行Blast。