固相萃取-高效液相色谱法用于牛奶和蛋白类饮料防腐剂测定中的效果

□张丰芸 黄远景 曾剑锋 惠州市食品药品检验所

固相萃取-高效液相色谱法用于牛奶和蛋白类饮料防腐剂测定中的效果

□张丰芸 黄远景 曾剑锋 惠州市食品药品检验所

现阶段固相萃取-高效液相色谱法在分析饮料过程中较为常用，这种分析方式主要优势是比较快捷与高效。在长时间发展过程中，固相萃取-高效液相色谱法在操作的自动化、分析速度、检测的灵敏度以及分离效能方面均得到较好的发展，同时还保留经典的液相色谱法中：方便色谱制备、样品的适用范围比较广以及流动相比较多等优势，广泛应用在石油化工、生物工程、食品工业以及制药工业等领域中。在科学技术不断发展的背景下，渐渐用于饮料检验之中，并且作用也日渐彰显，在大多数饮料检验中都应用这种检验的方式。本文分析了在饮料检验过程中应用固相萃取-高效液相色谱法的检验效果。

试剂及仪器

主要试剂、饮料

样品为市场上销售的液体乳、乳制饮料、蛋白饮料；试剂主要包括有乙腈、磷酸、色谱纯和磷酸二氢钾，DR公司提供苯甲酸、山梨酸；fluka公司提供的脱氢乙酸，TCI-GR公司提供的羟基苯甲酸酯。

仪器

高效液相色谱的仪器SP8800泵，生产于美国光谱的物理公司；54400型的积分仪、ChromDe的脱气机，Spheri-5RP-18（5 μm）的色谱柱（220 mm 4.6 mm），配10 μL定量管的进样器。

检验的方法

将牛奶和蛋白类饮料中提取的防腐剂当作研究对象，分成研究组与常规组，称取0.2 g的样品量，常规组通过薄层的色谱（TLC）方式来检测，研究组通过固相萃取-高效液相色谱法检测，对比分析两种检验方法，产品的回收率。

制备样品

称提取物10 mL，然后加入比色管25 mL，再加入乙腈直至刻度，20 min超声，提取样品并沉淀蛋白，进行过滤。过滤之后将5 mL的滤液放置于鸡心瓶之中，不停旋转，蒸发直至近干。而后加入5 mL的甲酸水，进行超声洗涤，之后将液体上已活化的PEPSPE6cc固相萃取柱，进行5 mL水净化和5 mL10%甲醇净化，甲醇脱洗之后定容到5 mL，氮吹至2 mL过0.45 μm滤膜上机，分析色谱。

高效液相色谱方法（HPLC）的条件

流动相：0.4%磷酸溶液与甲醇比为45∶55；流速：每分钟流动的量为1 mL；柱温为25 ℃；进样的体积为10 μL；波长为360 nm。

统计的方法

应用SPSS22．0统计软件来分析与处理数据，用均数±的标准差(false ±s)来表示计数资料，并用χ2来检验计数资料，用P＜0.05表示差异存在统计学方面的意义。

结果

常规组中牛奶分离率为89.8%、纯度为89.2%，蛋白饮料的分离率为92%、纯度为89.0%，乳饮品的分离率为88%、纯度为89.1%；研究组牛奶的分离率为99.2%、纯度为99.8%，蛋白饮料的分离率为99.1%、纯度为99.9%，乳饮品的分离率为98.9%、纯度为99.9%。研究组牛奶、蛋白、乳饮品的分离率、纯度明显高于常规组，对比差异显著（P＜0.05）。常规组回收率为85.0%，研究组回收率99.5%，对比差异显著（P＜0.05）。

讨论

高效液相色谱法主要将液体当作流动相，同时应用高压输液的系统进行检测，是色谱方法中的一个重要分支。就原理方面来讲，固相萃取-高效液相色谱法与经典的液相色谱法相比，并没有本质区别，但是固相萃取-高效液相色谱法使用了高效微粒的固定相、新型高压的输液泵以及高灵敏度的检测器。固相萃取-高效液相色谱法使用了极细小高效液相色谱的填料以及小口径柱，应用高压的输液泵让溶剂高速流过色谱柱，与经典柱的色谱法相比，速度比较快，并且有高灵敏度、高压、高效以及高速的特点。

近年来，固相萃取-高效液相色谱法逐渐应用在食品、饮料等监测的工作中。尤其近年来一些保健品以及饮料中会添加违禁饮料，严重影响了患者生命安全，因此，需要使用固相萃取-高效液相色谱法对这些饮料进行监测，有效保障饮料的安全性。而本文主要通过固相萃取-高效液相色谱法来分析牛奶、蛋白饮料中防腐剂的含量，清楚了饮料中的各个组成部分。经研究发现，研究组中牛奶、乳饮料、蛋白饮料的回收率明显高于常规组，对比差异显著（P＜0.05）；常规组回收率为85.0%，研究组回收率99.5%，对比差异显著（P＜0.05）。综上所言，固相萃取-高效液相色谱法可以高效率、有效与准确的测定饮料含量，同时可以检查饮料中的相关物质，严格监测抗生素以及饮料中的违禁成分；并且在饮料回收率、精准度以及纯度方面的检测效果比较好，值得进一步在临床上推广与应用。

张丰芸（1990-），女，本科，食品检验助理工程师，研究方向：食品检验。