血清RANTES在子宫内膜异位症临床诊断中的价值

杨　光　　李　建佳木斯大学附属第一医院妇产科，黑龙江佳木斯　154000



血清RANTES在子宫内膜异位症临床诊断中的价值

杨光李建▲
佳木斯大学附属第一医院妇产科，黑龙江佳木斯154000

[摘要]目的检测子宫内膜异位症患者血清中RANTES的水平，探讨其在子宫内膜异位症临床诊断中的价值。方法选取2015年3～9月于我院行手术治疗的卵巢巧克力囊肿和卵巢囊肿患者各30例，应用酶联免疫吸附试验（ELISA）和放射免疫分析法分别检测血清中RANTES及CA125的含量。结果卵巢巧克力囊肿患者血清中RANTES和CA-125水平显著高于卵巢囊肿患者（P＜0.05），CA125比较血清中RANTES诊断卵巢巧克力囊肿的敏感性和特异性分别为60.0％和100.0％。RANTES和CA125联合诊断卵巢巧克力囊肿的敏感性和特异性均为86.7％。结论卵巢巧克力囊肿患者血清中RANTES水平显著升高，血清中RANTES具有子宫内膜异位症诊断标记物的潜能，与CA125联合检测可提高子宫内膜异位症临床无创诊断的敏感性和特异性。

[关键词]RANTES；CA125；血清；子宫内膜异位症

子宫内膜异位症（endometriosis，EM）是育龄期女性常见的妇科疾病之一，发病率约6％～10％[1]，近年呈上升趋势，其病变特征是具有生长功能的子宫内膜组织（腺体和间质）出现在子宫腔以外的其他部位。主要症状为痛经、盆腔痛、性交痛、排便困难等，患者出现盆腔痛、不孕或二者并存的机率高可达35％～50％。EM病因尚未阐明，目前被广泛接受的一种学说是经血逆流学说。免疫炎性因素，孕激素及其受体，COX[2]等成为近年来子宫内膜异位研究领域的热点。由于EM患者的症状缺乏特异性，需行腹腔镜检查才能确诊，使得患者自出现症状到获得明确诊断的时间平均延迟6.7年，使得患者生活质量明显下降[3]。因此，早期损伤小，敏感性和特异性高，可行性强的诊断方法可使患者极大受益。

调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子（regulated upon activation normal T cell expressed and se creted，RANTES）是由T细胞等多种细胞产生的全能趋化因子，子宫内膜间质细胞也可分泌RANTES[4]。RANTES基因定位17q11.2-q12染色体，启动子区包含两个典型的NF-κB结合位点，其蛋白是一种分子量为8 ku的小分子蛋白[5]。既往研究发现：子宫内膜异位症患者腹腔液、在位内膜、异位内膜组织中的RANTES的浓度均显著增加[6，7]，RANTES可趋化巨噬细胞、T细胞等多种炎细胞于炎症部位，后者可分泌IL-1、TNF-a、IFN-γ等多种细胞因子，这些细胞因子又可促进RANTES的表达[8]，共同参与和调节机体的免疫应答，导致局部炎症反应，小血管新生，促进异位内膜细胞的存活和种植，为子宫内膜异位症的形成提供适宜的微环境。本研究通过测定卵巢巧克力囊肿血清中RANTES和CA125的水平，初步探讨RANTES是否具备子宫内膜异位症血清诊断标记物的潜能，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

选取2015年3～9月于我院行手术治疗的卵巢巧克力囊肿和卵巢囊肿患者各30例（对照组），均经术后病理结果证实，年龄20～48岁，平均年龄分别为（32.4±9.5）岁和（35.1±9.7）岁，所有患者无妇科内分泌疾病、生殖系统炎症、免疫系统疾病、恶性肿瘤病史，术前3个月无甾体类激素、抗生素、免疫功能抑制剂等用药史。两组患者平均年龄差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2标本采集

所以患者均于术前采集空腹静脉血5 mL置于无菌管中，在1000×g重力下离心20 min，上清液保存于-80℃冰箱中以备检测。

1.3方法

采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清中RANTES蛋白的水平，ELISA试剂盒购自Cloud-Clone公司，操作严格按试剂盒说明书进行。血清CA125水平由我院检验科采用放射免疫分析法测定。

1.4数据处理

两组患者血清RANTES和CA-125水平的若呈非正态分布，各组均数采用中位数（M）和四分位距（Ql～Qu）表示，独立样本比较采用秩和检验，若为正态分布，统计描述采用（±s）表示，独立样本比较采用t检验。ROC曲线（receiver operating characteristic curve）描述RANTES和RANTES联合CA-125诊断卵巢巧克力囊肿的特性。采用SPSS17.0软件对结果进行分析，检验水准为α=0.05，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组患者血清RANTES和CA-125的水平比较血清中RANTES和CA-125的测定结果经正态性检验后符合正态性分布，结果采用±s表示。与卵巢囊肿患者相比，卵巢巧克力囊肿患者血清RANTES 和CA-125的水平显著升高，差异有统计学意义（t= 2.7572，P＜0.010；t=3.2669，P＜0.005）。见表1。

表1　两组患者血清RANTES和CA－125的水平比较（±s）

表1　两组患者血清RANTES和CA－125的水平比较（±s）

RANTES（pg/mL）CA-125（U/mL）巧囊组囊肿组巧囊组囊肿组30 30 30 30 4.11±1.24 3.14±0.54 46.80±29.93 22.25±14.13 2.7572 3.2669 ＜0.010 ＜0.005因子　　分组　n　±s t值　P

2.2RANTES单独或联合CA125预测EM的临床价值

运用ROC曲线描述血清RANTES对卵巢巧克力囊肿临床诊断的价值，曲线结果显示血清中RANTES诊断卵巢巧克力囊肿的敏感性60.0％，特异性100.0％，AUC为0.787（95％CI：0.61～0.96），通过AUC筛选出血清中用于预测卵巢巧克力囊肿的RANTES最佳临界值是3.91 pg/mL，阳性预测值78.0％，阴性预测值71.4％。见表2。

2.3RANTES与CA125联合预测卵巢巧克力囊肿的价值

血清中RANTES与CA125联合预测卵巢巧克力囊肿的敏感性和特异性均为86.7％，阳性预测值80.0％，阴性预测值86.7％。见表2。

表2　RANTES与CA125联合预测卵巢巧克力囊肿的价值

3　讨论

子宫内膜异位症形成的病理生理过程中涉及三个关键步骤：粘附、侵袭、血管形成，这三个过程均伴有免疫炎性因子的参与，故近年来免疫炎性因素成为子宫内膜异位症研究领域的热点之一。RANTES受体为CCR家族，T细胞、单核-巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、血管内皮细胞等均可表达CCR受体，通过与其相应受体结合，RANTES趋化免疫炎性细胞至炎症病灶并活化T细胞，在炎症反应中扮演着重要角色。既往部分研究表明子宫内膜异位症患者在内膜、异位内膜、腹腔液、血清中RANTES的水平显著高于非子宫内膜异位症患者并与疾病的严重程度相关，差异具有统计学意义[6，9，10，11，12]。部分研究结果却显示子宫内膜异位症患者腹腔液、血清中RANTES的水平与对照组相比并无明显变化，差异无统计学意义[13，14]，因此，对于RANTES是否具备子宫内膜异位症血清诊断生物标记物的潜能，目前尚缺乏相关临床证据[15，16]。本研究结果显示卵巢巧克力囊肿患者血清RANTES和CA-125的水平显著升高，差异有统计学意义，与Khorram等的研究结果一致。RANTES的AUC为0.787（95％CI：0.61～0.96），故RANTES有望成为子宫内膜异位症临床诊断的一种血清生物标记物。RANTES与CA125联合预测卵巢巧克力囊肿的敏感性和特异性为86.7％，提高了子宫内膜异位症临床无创诊断的敏感性和特异性。但本研究中纳入的样本数量小，且研究对象仅为卵巢巧克力囊肿患者，未设置健康对照组，因此所获得的数据存在一定局限性。RANTES单独或与其他生物标记物联合诊断子宫内膜异位症的临床价值，仍需要更多设计严谨，样本量大，多中心协作的临床研究进一步验证。

无论是肿瘤的侵袭、转移还是异位内膜病灶的种植，微血管的新生都至关重要[17]。研究表明RANTES可直接作用于肿瘤细胞，促进肿瘤组织微血管生成和转移，RANTES的促血管新生活性可能与其诱导MMP-9高表达相关[18]。EM患者腹腔液中高水平的RANTES通过其促血管形成活性，有助于子宫内膜异位种植病灶血供的形成。我们知道VEGF在血管的新生中扮演着重要角色，在EM对异位内膜细胞的吞噬及清除作用减弱，而分泌功能增强，活化的巨噬细胞可分泌VEGF促进微血管新生，此外，RANTES可能通过NF-kβ或PI3K/Akt信号通路[19]促进VEGF依赖性血管生成，因此，RANTES在异位内膜种植病灶的血管形成中也起着重要作用。

RANTES作为多种细胞趋化因子，也是巨噬细胞的特异激活因子，RANTES可趋化大量的巨噬细胞于腹腔异位种植病灶周围，活化的巨噬细胞分泌多种细胞因子（TNF-α、IL-1、IL-8、VEGF等），TNF-α、IL-1活化NF-kβ信号通路后可促进内膜间质细胞分泌RANTES，在异位病灶处形成一个正反馈通路。此外腹腔液中高水平的RANTES还可抑制巨噬细胞对异位内膜细胞的吞噬和清除作用，促进异位内膜细胞的存活[20]，因此RANTES在子宫内膜异位症的发生、发展过程中发挥着重要作用。腹腔液中高水平的RANTES循环入血，引起血液中RANTES的水平升高。

综上所述，卵巢巧克力囊肿患者血清中RANTES的水平显著升高，在子宫内膜异位的临床诊断中具有一定的价值，与CA125联合检测可提高子宫内膜异位症临床诊断的敏感性和特异性，具备子宫内膜异位症诊断生物标记物的特性，或许可作为子宫内膜异位症临床诊断的血清生物标记物之一。

[参考文献]

[1] Burney RO，Giudice LC. Pathogenesis and pathophysiology of endometriosis[J]. Fertil Steril，2012，98（3）：511-519.

[2]侯克刚. Cox-2、VEGF在子宫内膜异位症中的表达及临床意义[J].中国现代医生，2012，50（23）：23-24.

[3] Nnoaham KE，Hummelshoj L，Webster P，et al. Impact of endometriosis on quality of life and work productivity：a multicenter study across ten countries[J]. Fertil Steril，2011，96（2）：366-373.

[4] Hornung D，Klingel K，Dohrn K，et al. Regulated on activation，normal T-cell-expressed and-secreted mRNA expression in normal endometrium and endometriotic implants：Assessment of autocrine/paracrine regulation by in situ hybridization[J]. Am J Pathol，2001，158（6）：1949-1954.

[5]王春平，林青.调节活化正常T细胞表达与分泌趋化因子与子宫内膜异位症[J].中国实用妇科与产科杂志，2012，7：558-560.

[6]范小斌，曹引丽，蔺小贤，等. RANTES在子宫内膜异位症在位内膜及异位内膜的表达及其意义[J].实用妇产科杂志，2012，12：1035-1038.

[7] Yang Y，Zhang X，Zhou C，et al. Elevated immunoreactivity of RANTES and CCR1 correlate with the severity of stages and dysmenorrhea in women with deep infiltrating endometriosis[J]. Acta Histochem，2013，115（5）：434-439.

[8] Gruber HE，Hoelscher GL，Ingram JA，et al. Production and expression of RANTES（CCL5）by human disc cells and modulation by IL-1-β and TNF-α in 3D culture[J]. Exp Mol Pathol，2014，96（2）：133-138.

[9] Bersinger NA，von Roten S，Wunder DM，et al. PAPP-A and osteoprotegerin，together with interleukin-8 and RANTES，are elevated in the peritoneal fluid of women with endometriosis[J]. Am J Obstet Gynecol，2006，195（1）：103-108.

[10] Hornung D，Bentzien F，Wallwiener D，et al. Chemokine bioactivity of RANTES in endometriotic and normal endometrial stromal cells and peritoneal fluid[J]. Mol Hum Reprod，2001，7（2）：163-168.

[11] Vodolazkaia A，El-Aalamat Y，Popovic D，et al. Evaluation of a panel of 28 biomarkers for the non-invasive diagnosis of endometriosis[J]. Hum Reprod，2012，27（9）：2698-2711.

[12] Reis FM，Petraglia F，Taylor RN. Endometriosis：Hormone regulation and clinical consequences of chemotaxis and apoptosis[J]. Hum Reprod Update，2013，19（4）：406-418.

[13] Kalu E，Sumar N，Giannopoulos T，et al. Cytokine profiles in serum and peritoneal fluid from infertile women with and without endometriosis[J]. J Obstet Gynaecol Res，2007，33（4）：490-495.

[14] Margari KM，Zafiropoulos A，Hatzidaki E，et al. Peritoneal fluid concentrations of β-chemokines in endometriosis[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2013，169（1）：103－107．[15] Borrelli GM，Abr o MS，Mechsner S. Can chemokines be used as biomarkers for endometriosis? A systematic review[J]. Hum Reprod，2014，29（2）：253－266．

[16] Lanis T. Diagnostic potential of peritoneal fluid biomarkers of endometriosis[J]. Expert Review of Molecular Diagnostics，2015，15（4）：557－580．

[17] Asante A，Taylor RN. Endometriosis：The role of neuroangiogenesis[J]. Annu Rev Physiol，2011，73：163-182.

[18]向志刚，杨竹林，黄建军.原发性肝癌组织中RANTES的表达与微血管密度的关系[J].上海交通大学学报（医学版），2010，2：222-224.

[19] Liu G，Chen H，Tsou H，et al. CCL5 promotes VEGF-dependent angiogenesis by down -regulating miR -200b through PI3K/Akt signaling pathway in human chondrosarcoma cells[J]. Oncotarget，2014，5（21）：10718-10731.

[20] Wang XQ，Yu J，Luo XZ，et al. The high level of RANTES in the ectopic milieu recruits macrophages and induces their tolerance in progression of endometriosis[J]. J Mol Endocrinol，2010，45（5）：291－299．

The clinical diagnosis value of serum RANTES on endometriosis

YANG Guang LI Jian
Department of Gynecology and Obstetrics, the First Affiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154000, China

[Abstract]Objective To measurement the level of RANTES in serum of patients with endometriosis and investigate its clinical diagnosis value in endometriosis. Methods The enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）and radioimmunoassay were used to quantity the concentration of RANTES and CA125 in serum of patients with ovarian chocolate cyst（30 cases）and ovarian cyst（30 cases）, the data from the patients underwent surgery treatment from March to September 2015 in our hospital. Results The serum levels of CA-125 and RANTES were significantly higher than those of ovarian cysts in patients with ovarian chocolate cyst（P＜0.05）, the sensitivity and specificity of diagnosis of chocolate cyst were 60.0％and 100.0％. When RANTES combined with CA125, the sensitivity and specificity of diagnosis of ovarian chocolate cyst were 86.7％. Conclusion The level of RANTES in serum of patients with endometriosis is markedly increased, RANTES has the potential ability of diagnosis of endometriosis, as combined with CA125 could improve the sensitivity and specificity of clinical noninvasive diagnosis of endometriosis.

[Key words]RANTES; CA125; Serum; Endometriosis

收稿日期：（2015-10-08）

通讯作者▲

[中图分类号]R711.7

[文献标识码]A

[文章编号]1673-9701（2016）01-0019-04