新余市无偿献血者HBsAg检测结果分析

李丽平，彭小华，杨　，吴青莲(、新余市中心血站，江西新余338000；、新余市渝水区珠珊卫生院，江西新余338033)



新余市无偿献血者HBsAg检测结果分析

李丽平1，彭小华1，杨1，吴青莲2
(1、新余市中心血站，江西新余338000；2、新余市渝水区珠珊卫生院，江西新余338033)

摘要：目的对新余市无偿献血者HBsAg检测结果进行分析。方法取新余市中心血站2012年4月1日至2015年9 月30日无偿献血者血液标本31356例，用两种ELISA二步法试剂进行HBsAg检测，对HBsAg单试剂阳性标本和阴性标本进行核酸（定性）检测，核酸检测为阳性的标本及阳性血浆送卫生部临检中心进行确证试验。结果HBsAg双试剂阳性358例，单试剂阳性27例，核酸HBV-DNA阳性49例，其中44例HBV-DNA阳性为两遍ELISA法阴性标本，5例HBV-DNA阳性为ELISA法单试剂阳性标本。结论单纯采用两遍ELIS法检测HBsAg仍存在一定的漏检，ELISA法检测结合核酸HBVDNA检测可提高HBsAg检出率，缩短HBsAg的“窗口期”，最大限度降低输血风险，提高输血安全。

关键词：HBsAg；核酸；ELISA；无偿献血

当前，国内血液筛查以传统血清学方法酶联免疫吸附试验（ELISA）检测为主，通过ELISA法检测血液中的病毒特异性抗原和/或抗体，从而间接确定其是否感染相应病原体，但ELISA法尚不能检测出处于血清转换前的“窗口期”（即机体感染某病原体到检测到相关指标之间的时间）病毒感染，存在经输血传播疾病的风险。与ELISA相比，核酸检测作为对病毒的核酸进行扩增，直接检测病原体，具有更高的灵敏度和特异性。核酸检测能将乙肝（HBV）的“窗口期”从原来血清学检测的56d缩短至36d，极大地降低了“窗口期”的感染风险。2012年4月1日至2015年9月30日共筛查血液标本31356例，HBsAg双试剂阳性358例，单试剂阳性27例，核酸阳性49例，现报告如下。

1　材料与方法

1.1标本来源与处理2012年4月至2015年9月本站共采集血液标本31356例，留取2管标本，其中一管（带分离胶EDTA-K2抗凝）用于核酸检测，另一管（EDTA-K2抗凝）用于血清学检测。在2℃～8℃冰箱保存，4h内离心。

1.2仪器Uranus-AE-100全自动酶免分析仪(深圳爱康电子公司)；上海浩源血液核酸筛查平台：Hamilton STAR全自动混样仪(瑞士哈美顿公司)、Ezbead System-32提取仪(美国Texas BioGene公司)、7500型实时荧光定量PCR扩增仪(美国ABI公司)。

1.3试剂HBsAg检测试剂由厦门新创、北京万泰用两个厂家提供的ELISA二步法试剂，核酸检测试剂由上海浩源生物科技有限公司提供三合一血液筛查试剂，在1个反应管中同时检测3种病毒。

1.4方法用两种ELISA法试剂进行HBsAg检测，结果判断标准：S/CO≥1为阳性，0.8≤S/CO<1为灰区，S/CO<0.8为阴性，对双试剂阳性标本、单试剂阳性标本取相对应的血液辫子和试管标本进行平行检测，再检血液辫子和试管标本结果S/ CO≥0.8时该标本判为阳性，S/CO<0.8判断为阴性。同时对HBsAg单试剂阳性标本和阴性标本进行核酸（定性）检测，核酸结果判定：Ct>45为阴性，Ct≤45为阳性。

2　结果

2.1 HBsAg检测情况2012年4月至2015年9月本站共采集无偿献血者血液标本31356例，HBsAg阳性358例，单试剂阳性27例，HBV-DNA阳性49例。结果见表1。

表1　HBs Ag检测情况

2.2两种酶免试剂检测结果及核酸检测结果2012年4月至2015年9月共检测HBsAg酶免阴性30971例，其中HBV-DNA阳性44例，单试剂阳性再检阳性27例，其中厦门新创试剂初次反应性标本40例，再检阳性15例，北京万泰试剂初次反应性标本73例，再检阳性12例，其中5例单试剂阳性标本HBV-DNA阳性均为万泰试剂阳性。结果见表2。

表2　酶免阴性和单试剂阳性标本核酸检测情况（n）

2.3卫生部临检中心检测结果49例核酸阳性中28例为二次以上献血者，占57.1%，第一次献血者21例，占42.9%，HBV-DNA阳性标本自2012年5月至2015年9月共送45例到卫生部临检中心检测，其中共反馈结果39例，见表3。

2.4随访结果49例核酸阳性献血者中成功追踪随访5例，其中1例HBsAg由阴性转阳性，其余4例追踪检测结果。见表4。

3　讨论

2012年4月至2015年9月共检测无偿献血者血液标本31356例，其中HBsAg阳性358例（1.1%），单试剂阳性27例（0.08%），HBV-DNA阳性49例（0.15%），阳性率高于其他地区[1-3]。影响ELISA检测结果的因素很多[4]，厦门新创试剂初次反应性标本40例，再检阳性15例，北京万泰试剂初次反应性标本73例，再检阳性12例，单试剂反应性再检阳性27例中有5例核酸阳性，均为北京万泰再检阳性标本，说明北京万泰HBsAg试剂检测灵敏度高，其余22例再检阳性核酸测定结果为阴性，核酸检测也存在检测灵敏度、病毒的不规则分别和核酸检测病毒的随机性等问题，有文献显示单试剂阳性而核酸阴性，中和试验阳性的情况[5]。本研究结果显示，HBV-DNA阳性标本49例中28例为2次及2次以上献血，占57.1%，其余21例为初次献血，占42.9%，其中5例单试剂阳性标本HBV-DNA阳性为二次及二次以上献血。从以上数据表明单纯采用两遍ELISA法检测HBV病毒，仍然存在一定的漏检风险，而核酸检测的灵敏度高，可有效弥补ELISA法检测HBsAg的不足[6，7]，最大限度的降低输血风险，提高输血安全。

核酸阳性的39例标本送卫生部临床检验中心确认，结果显示，HBeAb和HBcAb均为阳性，HBcAb是HBV感染后最早出现的特异性抗体，是既往感染的标志，说明这39名献血者既往有乙肝病毒接触史。表4中追踪随访的5例，其中1例HBsAg由阴性转为阳性，其余4例虽在跟踪期间没有转为阳性，但HBeAb和HBcAb均为阳性。据文献报道，输注HBsAg阴性的血液后仍有感染的风险[8]。

表3　HBV-DNA阳性标本送卫生部临检中心检测结果

输血安全面临的主要风险之一就是被筛查病毒的“窗口期”，HBsAg免疫学检测窗口期为56d，而核酸HBV-DNA检测窗口期缩短为36d[9]，在对核酸阳性的献血者进行追踪随访的5例中，其中有1例在随访期间HBsAg ELISA法检测为阳性，说明该献血者前面处在ELISA法检测的“窗口期”，其他4例的随访结果都是HBeAg定性阴性，HBeAb定性和HBcAb定性为阳性。一年后的结果显示，1号、2号和4号献血者乙肝处于慢性转归过程，3号献血者为慢性乙肝携带者，均不适宜再献血。有研究发现，隐匿性HBV感染与HBV血清转换前窗口期献血者是造成HBsAg筛查后输血传播感染HBV的主要原因[10]。HBV血清转换前窗口期献血者HBsAg会随着时间推移转为阳性，而隐匿性HBV感染献血者的HBsAg一般不会转换为阳性[11]。

由于ELISA检测病毒抗原或抗体，其“窗口期”、病毒变异、非典型性血清转阳过程等因素造成漏检[12]，这就给输血安全带来较大的隐患。为了缩短血液感染病毒的检测“窗口期”，降低经输血途径传播病毒的风险[13，14]，卫生部要求在2013-2015年全面推进血站核酸检测工作，到2015年血液筛查核酸检测基本覆盖全国[15]，为降低经输血传播疾病的风险，提高血液安全，提供了保障。

表4　NAT阳性献血者追踪检测情况表

参考文献

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(收稿日期2015-10-30；修回日期2015-12-03)

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.01.046

中图分类号：R193.3，R512.6+2

文献标识码：A

文章编号：1674-1129(2016)01-0118-03