吡喹酮对雌性大鼠卵巢储备功能的影响

邵锐锋，皮洁

(长江大学第二临床医学院 荆州市中心医院生殖医学中心，湖北 荆州 434020)



吡喹酮对雌性大鼠卵巢储备功能的影响

邵锐锋，皮洁

(长江大学第二临床医学院 荆州市中心医院生殖医学中心，湖北 荆州 434020)

目的：通过研究吡喹酮对雌性大鼠卵巢储备功能的影响，探讨其临床用药的安全性。方法：成年雌性SD大鼠60只,随机分为吡喹酮组(150mg/(kg·d))和对照组(生理盐水组)，分别于用药后1、4、8周采用股动脉放血处死受试动物，取血清，放射免疫方法测定雌二醇(E2)浓度、卵泡刺激素(FSH)浓度、酶联免疫方法测定抗苗勒管激素(AMH)浓度。结果：吡喹酮组与对照组血清E2、FSH浓度无明显差异，血清AMH浓度有下降的趋势，但差异无统计学意义(P>0.05)。结论：吡喹酮对SD雌性大鼠的卵巢储备功能没有影响。

吡喹酮；卵巢储备功能；卵泡雌激素；抗苗勒管激素

现阶段治疗血吸虫病的药物中，吡喹酮因其疗效高、疗程短、不良反应少等优点，应用最为广泛。随着吡喹酮在流行区的大量长期使用，其对育龄女性生育能力的影响逐渐受到人们的关注。本研究通过观察雌性大鼠血清激素水平的变化，研究吡喹酮对卵巢储备功能的影响，为临床用药提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

成年Spragne-Dawley(SD)雌性大鼠60只，年龄60～70d，体质量(230±20)g，均来自华中科技大学同济医学院动物实验中心。

吡喹酮(PZQ)上海第六制药厂 、AMH ELISA试剂盒(Diagnostic Systems Laboratories 公司 美国)、 ELISA检测仪(Molecular Devices 公司 美国)、 FSH试剂盒(上海生物工程公司)、E2试剂盒(上海罗氏公司)。

1.2 研究方法

1)实验动物和分组 全价颗粒饲料喂养成年未孕SD大鼠，自由摄食，室温25℃，湿度45%～55%，每日光照12h，定期消毒和通风，饲养一周熟悉环境。随机分为吡喹酮组和空白对照组，每组30只。

2) 给药方法 根据大鼠与人体间的等效剂量换算[1],称取300mg吡喹酮加适量蒸馏水配置成10ml吡喹酮悬液，每日8至9时吡喹酮组给予1ml吡喹酮悬液灌胃,空白对照组给予生理盐水1mL/d灌胃，分别于用药后1、4、8周于动情期股动脉放血处死动物，分为1、4、8周三个组，每组均为10只，取血清置于0℃冰箱待测。

1.3 检测指标

放射免疫分析法测定血E2、FSH，按试剂盒操作规程进行。用AMH ELISA试剂盒检测大鼠血清中AMH浓度：取20μL标准品、对照品和血清加入96孔板中，孵育，洗板。将抗体加入板中，孵育，洗板。最后，TMB显色，酶标仪测450nm和620nm处波长。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 血清E2、FSH水平测定结果

吡喹酮组1、4、8周后 E2浓度分别为(20.60±2.47)、(21.01±2.55)、(21.89±2.64)pg/mL，FSH浓度分别为(2.00±0.20)、(2.04±0.15)、(2.15±0.13)ng/mL；对照组1、4、8周后 E2浓度分别为(19.95±2.44)、(20.79±2.25)、(21.42±2.47)pg/mL，FSH浓度分别为(2.01±0.22)、(2.03±0.13)、(2.13±0.18)ng/mL，两组间血清E2和FSH浓度比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.2 血清AMH水平测定结果

吡喹酮组1、4、8周后AMH浓度分别为(2.09±0.16)、(1.99±0.10)、(1.88±0.12) ng/mL，对照组1、4、8周后AMH浓度分别为(2.16±0.14)、(2.04±0.09)、(1.93±0.10) ng/mL,血清AMH浓度有下降的趋势，但差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

卵巢的主要功能表现为周期性的排卵和周期性变化的激素分泌，它决定着个体的生育能力。目前评价卵巢的储备功能的重要指标包括基础FSH，窦卵泡计数以及AMH的测定等。血清FSH、E2水平是临床上衡量卵巢储备功能最常用的指标，其主要是通过下丘脑—垂体—卵巢轴之间的激素的正负反馈机制调节，血清FSH水平的升高常提示卵巢储备功能的衰退[2]。AMH仅表达于女性卵巢内卵泡的颗粒细胞，其水平与卵巢内窦卵泡的数量呈正相关[3,4]，与体内的其他激素FSH、E2无关，不受下丘脑—垂体—卵巢轴和药物的影响，因此，测量血清中AMH的水平能够比基础FSH、E2更准确的反映卵巢的储备能力。梁元晶等[5]基础研究表明，随着大鼠年龄的增长，卵巢中分泌AMH的卵泡数量减少，血清AMH水平下降，提示卵巢储备功能的下降。

吡喹酮是治疗血吸虫病的首选药物。在以往的研究中发现吡喹酮用药后会对神经系统、消化系统产生不同程度的损害[6]，也有学者观察到吡喹酮用药后会对女性的月经周期产生影响[7]，但吡喹酮使用后对雌性动物的生殖功能影响的研究较少。本实验通过SD雌性大鼠吡喹酮灌胃后观察大鼠血清中AMH、FSH、E2等激素水平的变化，探讨吡喹酮对SD雌性大鼠卵巢储备功能的影响。

本研究发现，雌性大鼠在应用吡喹酮后1、4、8周后血清中FSH、E2的浓度与对照组相比均无明显差异，说明大鼠的下丘脑—垂体—卵巢轴没有受到药物的影响，这可能与吡喹酮的作用机制有关。吡喹酮口服后吸收迅速，于1h左右达到峰值，经过肝脏时绝大部分被分解为羟基代谢物，靶向作用于血吸虫细胞膜上电压门控钙通道(Voltage-gated calcium channels,VGCCs),使虫体内Ca2+上调，引起虫体挛缩和死亡，故对机体的伤害比较小[8,9]，而脑脊液中的药物浓度显著低于血药浓度，其原因除血脑屏障外，还可能与脑脊液的的引流作用有关[10]。而吡喹酮组大鼠血清AMH呈现出降低的趋势，表明大鼠卵巢内窦卵泡的数目减少，可能与药物的持续时间有关，需要更大样本量的研究。

通过本实验，我们观察到吡喹酮治疗血吸虫病效果好，对卵巢储备功能无明显影响，但长时间用药时应注意监测卵巢功能。

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[编辑] 刘阳

2016-05-16

邵锐锋(1985-)，男，主治医师，硕士，主要从事不孕不育与辅助生殖的临床工作；通信作者：皮洁，hbpijie@163.com。

R532.21

A

1673-1409(2016)30-0079-02

[引著格式]邵锐锋，皮洁. 吡喹酮对雌性大鼠卵巢储备功能的影响[J]. 长江大学学报(自科版),2016,13(30):79～80.