EZ-tape在皮肤接触性检材DNA检验中的应用

成　静，廖长青，刘　维（湘潭市公安局刑事科学技术研究所，湖南湘潭411100）



EZ-tape在皮肤接触性检材DNA检验中的应用

成静，廖长青，刘维
（湘潭市公安局刑事科学技术研究所，湖南湘潭411100）

关键词：法医遗传学；DNA；皮肤；接触性；EZ-tape

学研究；E-mail：cmulcq@163.com

接触性检材在法医DNA检验中所占比例日益增大，其中皮肤接触性检材的检验更是其中的热点与难点之一。本研究使用EZ-tape脱落细胞粘取器转移皮肤接触性检材脱落细胞，获得了良好的效果，现总结如下。

1材料与方法

本实验室日常检案中受理的皮肤接触性检材共164份，其中工具手柄类15份，手印痕迹类72份，绳索类9份，面罩帽子类9份，衣物类18份，手套19份，鞋袜类14份，发夹首饰等其他检材8份。

上述检材均采用EZ-tape脱落细胞粘取器（公安部物证鉴定中心）富集并转移脱落细胞。取整个粘胶片（或吸附膜、擦拭子、剪取物），置于0.5mL离心管中，加入ATL 300μL和PK 20 μL［QIAamp DNA Investigator试剂盒（德国QIAGEN公司）］，BMJ0808型恒温摇匀孵育仪（珠海博迈杰生物科技有限公司）上56℃孵育1.5h，再使用硅胶膜纯化柱在QIAcube全自动核酸纯化仪（德国QIAGEN公司）上纯化提取DNA，洗脱体积30μL，取洗脱液适量扩增。使用Identifiler® PlusPCR扩增试剂盒（美国AB公司）在9700型PCR扩增仪（美国AB公司）上扩增，反应体系10μL，循环次数30个。扩增产物在3130XL型遗传分析仪（美国AB公司）上进行电泳检测，使用GeneMapper ID 3.2分析数据，图谱峰高识别阈值为50 RFU。

根据检出等位基因个数的不同，按未检出有效分型（检出有效峰形的基因座＜9个）、单一来源分型（检出有效峰形的基因座≥9个且3峰以上的基因座＜2个）、混合分型（检出有效峰形的基因座≥9个且3峰以上的基因座≥2个）对上述检验图谱进行统计。

2结　果

所检样本中，手印痕迹类检材所占比例最大，占43.90%（表1），反映基层公安机关对微量物证的应用意识不断加强。但此类检材检出有效单一来源分型的成功率较低，可能与接触时间短暂、脱落细胞残留量较少且手部皮肤角质化严重、完整的DNA拷贝数较少等原因有关[1]。短暂接触性检材（如手印痕迹）的有效检出率明显低于长时间接触性检材（如衣物），说明脱落细胞的遗留需要一定时间的积累；工具手柄、绳索类检材有效检出率明显大于手印痕迹类检材，说明脱落细胞的遗留与接触力度有关[2]。长时间接触性检材中，面罩的口鼻部、帽子内侧的边缘、衣服的衣领内侧以及裤子裤腰处内侧检出混合分型的概率明显低于手套及鞋子的内侧，分析认为前四种物品使用的人员相对单一且外源脱落细胞侵入的概率较低，而手套存在多人多次使用，由手部转移外源性脱落细胞的概率较大，故出现混合分型的次数较多。鞋子内侧出现较复杂的DNA分型，推测与脚或袜子附着的外源脱落细胞发生二次转移有关[3]。同时，在衣服、裤子、鞋、袜的内侧检出混合分型的概率低于外侧，分析与这些检材的内侧相对封闭，保护条件较好，而外侧长期暴露在外，与外界发生细胞交换的可能性更大有关。在工具手柄类检材的检验中，其有效检出率通常与使用时间呈正相关，值得注意的是使用时间长的工具手柄检出混合分型的概率也随之增高，给比对应用带来一定困难。

表1不同类型检材的STR分型结果［例（%）］

3讨　论

当皮肤接触到物体表面时会留下皮肤脱落细胞称之为接触性DNA。皮肤脱落细胞具有依附载体种类多、体积小、现场遗留率高等固有优势，同时也具有量小体微、不易发现提取、易污染、易毁损灭失和检验困难的特点[4]。在接触性检材的检验中，能否尽可能地富集脱落细胞，同时避免检材的污染、损耗是决定检验成功与否的关键。目前，通常采用剪取法、负压吸附法、二步擦拭法等方法转移富集皮肤脱落细胞[5]。在实践中，笔者发现这些方法各自都有其局限性：剪取法取材的范围小，可富集的靶细胞数量少，而且破坏了检材的整体性；负压吸附法不适用于通透性较高或者接触面凹凸不平的载体，同时其吸引力度不便控制，易带入其他外源性DNA，通常检出混合基因分型；二步擦拭法是一种有效的转移富集非渗透性载体上脱落细胞的方法，但并不适用于渗透性较高的检材（如织物类）。在实际检案中，应该根据检材的特点，选择合适的脱落细胞转移富集方法。

EZ-tape是公安部物证鉴定中心研制的一种针对脱落细胞的提取装置，其原理是利用胶带直接粘取渗透性和非渗透性客体表面上的脱落细胞，具有携带方便、操作简单的优点[6-7]。其粘胶面积大小适中，既可针对重点部位进行粘取，获得足量的脱落细胞，又能有效避免过多带入背景DNA[8]。对于有明确接触部位的检材，可使用胶片的双侧面粘取，最大程度地富集脱落细胞。完成粘取后，胶片固定于密闭的容器中，有效避免了物证保存、转送过程中可能发生的二次转移或污染[9]。本研究使用EZ-tape转移富集皮肤接触性检材上的脱落细胞，并采用硅胶膜吸附法纯化、浓缩模板DNA，同时在PCR扩增中适当增加循环次数，以达到提高检测灵敏度的目的，在实际检案中获得了良好的检验效果，适用于各类接触性检材DNA的提取。综上所述，对于接触部位明确且范围局限的检材，便于剪取的可采用剪取法提取，不宜剪取的可使用EZ-tape粘取；对于接触部位不明确或范围较大的检材，可采用负压吸附法富集提取，但使用EZ-tape

或二步擦拭法（仅适用于非渗透性检材）分区域提取，更有利于获得单一来源DNA分型。

参考文献：

[1]郝金萍，邵丽芳，陈松，等.纸张上汗潜指印DNA-STR检验成功率分析[J].中国法医学杂志，2013，28（5）：418-419.

[2]张广峰，陈松，涂政，等.接触DNA检验成功率的影响因素探讨[J].刑事技术，2013，（3）：9-13.

[3]霍塞虎.低拷贝模板DNA及其在法庭科学中的应用与进展[J].中国人民公安大学学报（自然科学版），2011，（1）：12-16.

[4]李树，宁淑华，王清山.浅谈微量生物物证的发现方法[J].广东公安科技，2010，（3）：15-17.

[5]童大跃，刘超.新编法医物证检验技术[M].北京：中国医药科技出版社，2013：252.

[6]王玉健，王斌，马妍，等.应用EZ-tape胶带分离提取混合斑精细胞[J].法医学杂志，2012，28（2）：133，136.

[7]李万水，胡兰，刘海东，等.用EZ-tape胶带提取接触DNA一例[C]//第三届全国法医DNA检验技术研讨会论文集.北京：群众出版社，2008：367-368.

[8]田蕊，班茂森.鞋内底不同部位接触DNA提取初探[J].刑事技术，2013，（2）：50-52.

[9]李越，刘超，冯冬亮.凶器包装袋内面脱落细胞STR检验1例[J].中国法医学杂志，2011，26（1）：79.

（本文编辑：柳燕）

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收稿日期：（2015-08-05）

作者简介：成静（1975—），女，主检法医师，主要从事法医遗传

文章编号：1004-5619（2016）01-0061-02

中图分类号：DF795.2

文献标志码：B

doi：10.3969/j.issn.1004-5619.2016.01.014