二氧化钛马来酸氯苯那敏乳膏剂的制备和抗过敏作用初探

初　阳,李　蕾,丁一航，姜明燕*

1.中国医科大学附属第一医院药学部,沈阳 1100-01;2.中国医科大学药学院,沈阳 110001;3.沈阳药科大学药学院,沈阳 110016;4.大连医科大学药学院,大连 116044



二氧化钛马来酸氯苯那敏乳膏剂的制备和抗过敏作用初探

初阳1,2,李蕾3,丁一航4，姜明燕1,2*

1.中国医科大学附属第一医院药学部,沈阳 1100-01;2.中国医科大学药学院,沈阳 110001;3.沈阳药科大学药学院,沈阳 110016;4.大连医科大学药学院,大连 116044

[摘要]目的优选二氧化钛马来酸氯苯那敏乳膏剂的最优处方，并初步考察其抗过敏作用。方法以乳膏剂色泽光泽度考察、稳定性考察及显微镜法观察作为考察指标，采用单因素考察和正交试验优选最优处方。并将该制剂涂抹于被紫外线照射的小鼠皮肤上。结果制备40 g乳膏中二氧化钛的投药量为3 g、扑尔敏的投药量为0.2 g、乳化时间为30 min、乳化温度为70 ℃时，乳膏效果较好。小鼠背部皮肤HE染色观察显示其有明显的抗过敏作用。结论二氧化钛马来酸氯苯那敏乳膏可有效抗紫外线过敏。

[关键词]马来酸氯苯那敏；二氧化钛；正交试验；乳膏；HE染色

0引言

目前，全球臭氧层以每年3.5%递减，使地面紫外线水平大幅度增加，导致过敏反应甚至各种皮肤疾病，如：红斑狼疮、白癜风、毛细血管扩张症的发生[1-3]。紫外线过敏影响患者的生活质量，临床治疗一般采用口服马来酸氯苯那敏片，并外涂防晒剂(严重时加涂激素类药膏)。本实验拟将马来酸氯苯那敏和二氧化钛组成复方制剂，通过优化处方，工艺研制可隔离紫外线且抗过敏的马来酸氯苯那敏乳膏，发挥治疗与防止复发的双重功效。

1材料

1.1仪器恒温加热磁力搅拌器(DF-101S，巩义市予华仪器有限责任公司)；分析天平[Mettler AE200，梅特勒-托利多国际贸易(上海)有限公司]；高速台式离心机(TGL-16B，上海安亭)；恒温水浴锅(BCFCO，余姚电讯仪表实业公司)；生物显微镜(XSP-10C，上海光学仪器厂)。

1.2试剂马来酸氯苯那敏(河南九势制药有限公司，批号：131214)；二氧化钛(上海晶纯生化科技股份有限公司，批号：T104937)；液体石蜡(南昌白云医药化工有限公司，批号：20140201)；蓖麻油(湖北科田药业有限公司，批号：Z42020991)；硬脂酸(湖南尔康制药有限公司，批号：1018201209)；甘油(沈阳红旗制药有限公司，批号：140421)；三乙醇胺(江西阿尔法高科技有限公司，批号：20131102)；羟苯甲酯(西安惠安纤维素化工有限公司，批号：20130301)；羟苯乙酯(湖南尔康制药有限公司，批号：1036201304)。

1.3动物昆明种小鼠，雄性，健康适龄，体重18~22 g，购自辽宁长生生物科技有限公司，合格证号：SCXK(辽)2010-0001。

2方法

2.1马来酸氯苯那敏乳膏基础处方工艺分别称取油相(硬脂酸4.96 g、蓖麻油5.24 mL、液体石蜡5.62 mL)、水相(马来酸氯苯那敏0.2 g、三乙醇胺0.38 mL、甘油1.96 mL、羟苯甲酯0.04 g、羟苯乙酯0.04 g、水适量)，使油相、水相达70 ℃，充分搅拌使其融化，再将水相缓缓加入油相中进行乳化，乳化时保持一定温度并不断搅拌成乳膏状。

2.2考察指标

2.2.1色泽、光泽度考察[4]挑取乳膏1 g，在下衬白纸的玻璃板上用软膏刀铺开，目测观察。

2.2.2稳定性考察采用耐热试验、耐寒试验、离心试验作为考察指标。耐热试验[4]：将乳膏置于具塞试管中(约1/3高度)，放置40 ℃恒温箱中6 h，观察有无油水分离、变色等异常现象。耐寒试验[4]：将乳膏置于具塞试管中(约1/3高度)，放置-15 ℃冰箱中24 h，观察有无油水分离、膏体变粗、出水等异常现象。离心试验[5]：将乳剂置10 cm离心管中，以3 750 r/min速度离心5 h，相当于放置1年的自然分层效果，此法可用于对乳剂的稳定性考察。

2.2.3显微镜法测定[5]用10×10倍数的光学显微镜观察粒子状态，考察乳剂是否均匀。

2.3单因素考察

2.3.1二氧化钛加入方式的考察所用药品量为基础处方量，二氧化钛加入方式分别为水相、油相两相，外观观察结果见表1。由表1可见，二氧化钛的加入方式对乳膏外观影响显著，且前3种加入方式得到的样品外观均较差，二氧化钛用适量甘油润湿，置乳钵中用冷却基质与之研匀，得到的乳膏膏体均匀，易于涂布且无颗粒感。

表1　二氧化钛加入方式的考察

2.3.2搅拌速度的考察所用药品量为基础处方量，搅拌速度分别定为500 r/min、1 000 r/min和变速(乳化时以1 000 r/min速度搅拌，待停止乳化时调为500 r/min)，外观观察结果见表2。由表2看出，搅拌速度对膏体的外观产生显著影响。

2.3.3乳化温度的考察所用药品量为基础处方量，搅拌速度定为变速，乳化温度分别定为60、70、80、90 ℃，外观观察结果见表3。由表3看出，乳化温度对膏体的外观产生较大影响。

表2　搅拌速度的考察

表3　乳化温度的考察

2.3.4二氧化钛加入量的考察搅拌速度定为变速，乳化温度定为70 ℃，据复方钛白防晒乳膏的制备研究表明，二氧化钛含量为5%的复方钛白防晒乳膏取得了很好的疗效，在预实验中发现当二氧化钛量达到15%时，乳膏发黄颗粒感明显，且放置后极易出现油水分离，所以将乳膏基础处方中二氧化钛量定于2、3、4、6 g，其他药品量为基础处方中药品量[6]，外观考察结果见表4。由表4看出，二氧化钛加入量的不同对乳膏的外观有较大影响。

表4　二氧化钛加入量的考察

2.3.5马来酸氯苯那敏加入量的考察搅拌速度定位变速，乳化温度为70 ℃，据复方马来酸氯苯那敏乳膏的研制及临床应用表明[7-8]，将马来酸氯苯那敏的量定至0.5%~0.8%，即基础处方中氯苯那敏量定于0.20、0.24、0.28、0.32 g，其他药品量为基础处方中药品量，外观考察结果见表5。由表5看出，氯苯那敏加入量的不同对乳膏的外观有比较大的影响。

2.3.6乳化时间的考察搅拌速度定为变速，乳化温度为70 ℃，药品量为基础处方中药品量，乳化时间分别定为10、20、30 min,外观考察结果见表6。由表6看出，乳化时间对膏体外观产生一定影响。

表5　氯苯那敏加入量的考察

表6　乳化时间的考察

2.4正交试验通过上述实验结果分析，搅拌速度对乳膏的外观产生显著影响，将搅拌速度定为变速，在正交试验中不再考察。主药的加入量、乳化时间和乳化温度对乳膏外观产生较大影响，所以将主药加入量、乳化时间和乳化温度作为正交试验的4个因素，选用L9(34)正交表进行试验，见表7、表8。

表7　正交试验因素水平表

表8　L9(34)正交试验

评分标准：①均匀程度、光泽度评价，分值由0.5分开始，按每隔0.1分升序打分。②离心实验评价，15 min为离心界限，设定15 min及以下分层均为0.5分；15 min以上分层，每增加5 min加0.5分。③耐热与耐寒评价，若不分层，则加1分。④显微镜法观察评价，10×10的倍数下，视野范围内粒子均匀度小者为1，粒子不均匀粒度较大者为0.5。

通过正交试验直观分析结果显示，影响外观和稳定性的主次因素顺序为C>A>D>B，根据正交试验结果，选择有较好的稳定性和外观的处方配比和工艺条件是A2B3C2D1。

2.5药效学研究

2.5.1实验分组与给药昆明组小鼠随机分为4组：A组(空白对照组)，B组(UVB照射组)，C组(UVB照射+二氧化钛乳膏组)，D组(UVB照射+二氧化钛马来酸氯苯那敏乳膏组)。C组、D组于致敏即日起开始给药，1次/d，A组和B组涂抹等重量的空白乳膏。

2.5.2试验方法剔除小鼠背部绒毛，进行UVB照射致敏，观察小鼠背部皮肤变化，直至出现皮肤损伤。实验结束后处死小鼠。

2.5.3试验结果取小鼠背部照射区部分皮肤组织(0.8 cm×0.8 cm)，制片后进行HE染色，在显微镜下观察小鼠皮肤组织形态学的改变及真皮内胶原纤维的变化。见图1。

从图1可见，空白对照组背部皮肤组织表皮为鳞状上皮细胞，真皮层胶原纤维分布均匀，真皮及皮下组织未见病变；紫外线照射后，小鼠背部表皮厚度不一，乳头层变平，部分脱落，表皮细胞排列紊乱，深染。真皮层胶原纤维染色变淡，排列紊乱、稀疏，部分扭曲、断裂；涂抹二氧化钛乳膏后，真皮内胶原纤维淡染，排列紊乱，扭曲、局部断裂，有大量嗜酸性粒细胞浸润，皮脂腺不规则增生；涂抹二氧化钛马来酸氯苯那敏乳膏后，胶原纤维排列稍显紊乱，但无嗜酸性粒细胞浸润，皮脂腺轻度增生。

3讨论

通过正交试验，该处方的最优配方及工艺为硬脂酸4.96 g、蓖麻油5.24 mL、液体石蜡5.62 mL，水相中马来酸氯苯那敏0.2 g、三乙醇胺0.38 mL、甘油1.96 mL、羟苯甲酯0.04 g、羟苯乙酯0.04 g、水适量，使油相、水相达70 ℃，充分搅拌使其融化，再将水相缓缓加入油相中进行乳化，乳化时间为30 min，保持乳化温度为70 ℃，乳化时以1 000 r/min的速度搅拌，待停止乳化时调为500 r/min，直至冷凝得膏体。称取二氧化钛3 g，用适量甘油润湿，将少量基质和二氧化钛在研钵中混匀，逐渐添加至全量，即得。经优化处方制备的二氧化钛马来酸氯苯那敏乳膏对于小鼠可起到有效的抗紫外线过敏作用。

图1　小鼠皮肤组织HE染色结果

二氧化钛为亲水性药物，在水中溶解度较低，如果将二氧化钛直接加入到基质中，由于颗粒间粘附性较强，易聚集成比较大的颗粒，所制得的乳膏的颗粒感较强，影响了乳膏的外观和治疗效果。因此将其粉末加甘油研磨，阻止微粒间的聚集，产生的分散度较大，得到的膏体不仅美观细腻，而且在皮肤上易于涂布，没有颗粒感[9]。

可屏蔽紫外线的马来酸氯苯那敏乳膏的优势在于：①马来酸氯苯那敏制成乳膏剂，较溶液剂在皮肤上作用时间更长，达到长效作用；②抗敏同时遮光，防止治疗过程中紫外线对皮肤的二次伤害；③降低化学防晒剂引起的接触性皮炎。后续试验中将进一步比较不同组间皮肤中超氧岐化酶(SOD)、过氧化丙二醛(MDA)的活性和含量。

参考文献：

[1]Proksch E,Brandner JM,Jensen JM.The skin:an indispensable barrier[J].Experimental Dermatology,2008,17(12):1063-1072.

[2]Shah AA,Sinha AA.Oxidative stress and autoimmune skin disease[J].European Journal of Dermatology,2013,23(1):5-13.

[3]柳燕.大气臭氧层、紫外辐射与人类健康[J].地球物理学进展,1998,13(3):103-110.

[4]王滨,满玉清,张海霞,等.正交设计法优选白斑乳膏Ⅱ号的基质处方[J].药学研究,2013,32(1):11-13.

[5]初阳,陈涛,冯婉玉.正交试验优选透明质酸钠乳膏的处方工艺[J].中国医药导报,2011,8(6):57-60.

[6]臧亚茹.复方钛白防晒乳膏的制备[J].中国医院药学杂志,2003,23(10):610.

[7]姚小梅,岳长江.马来酸氯苯那敏乳膏的研制及含量测定[J].化工劳动保护(工业卫生与职业病分册),1997,18(4):173-174.

[8]丁晓云.抗敏止痒乳膏处方优选的正交试验研究[J].中国卫生统计,2011,28(2):129-131.

[9]汤晴,姜韧,谭生建.复方二氧化钛乳膏制备工艺改进及质量标准探讨[J].总装备部医学学报,2007,9(3):128-130.

Preparation of titanium dioxide chlorphenamine cream and the preliminary study on the anti-allergic effectsCHU Yang1,2,LI Lei3,DING Yi-hang4,JIANG Ming-yan1,2*(1.Department of Pharmacy,The First Hospital of China Medical University,Shenyang 110001,China;2.School of Pharmacy,China Medical University,Shenyang 110001,China;3. College of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110016,China;4. School of Pharmacy,Dalian Medical University,Dalian 116044,China)

[Abstract]ObjectiveTo optimize the prescription of titanium dioxide chlorphenamine maleate cream,and to investigate its anti-allergic effect.MethodsThe single factor and orthogonal test was used to optimize the prescription with the cream color and gloss investigation,inspection and microscopy observation of stability as the marker.The anti-allergic effect on mice’s back skin was observed by HE staining.ResultsThe effect of the preparation was good when the dosage of titanium dioxide cream and chlorpheniramine was 3 g and 0.2 g respectively,along with the emulsification time was 30 min and emulsifying temperature was 70 ℃.ConclusionTitanium dioxide chlorphenamine cream can effectively resist ultraviolet allergy.

Key words：Chlorphenamine maleate；Titanium dioxide；Orthogonal test；Cream;Hematoxylin and eosin staining

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201601018

*通信作者

收稿日期：2015-05-27