杏鲍菇还原型液体菌种应用技术研究

徐兵，吴轲轩，郑丽雪，冀宏（常熟理工学院生物与食品工程学院，江苏常熟215500）



杏鲍菇还原型液体菌种应用技术研究

徐兵，吴轲轩，郑丽雪，冀宏*
（常熟理工学院生物与食品工程学院，江苏常熟215500）

摘要：以残留在筛网上的菌丝密集度为指标，确定了菌丝的最佳打碎时间为2 min。然后以杏鲍菇菌丝生长深度为指标，分别研究了打碎后的纯菌种稀释倍数和接种量对杏鲍菇菌丝生长的影响。结果表明：纯菌种最佳稀释倍数为500倍，最佳接种量为20mL/袋。此研究为筛选适用工厂化生产的液体菌种技术提供了理论依据。

关键词：杏鲍菇；菌种打碎时间；菌种稀释倍数；接种量

杏鲍菇又名刺芹侧耳、鲍鱼菇。其营养丰富，富含蛋白质，碳水化合物以及人体必须的8种氨基酸、维生素等微量元素[1]。另外，杏鲍菇具有提高人体免疫功能并有抗癌、降血脂、润肠胃、降胆固醇、促进胃肠消化、防止心血管病[2]等功效，是集天然、营养、保健于一体的珍稀食用菌，深受消费者欢迎[3-4]。

20世纪90年代以来，杏鲍菇的产量逐年上升，其栽培大多利用固体菌种，但由于固体菌种存在劳动强度大、工艺繁琐、杂菌污染率高、生长周期长、菌龄不一致等种种弊端，大大的制约了杏鲍菇产业的发展[5-6]。杏鲍菇液体菌种具有菌龄一致、生产周期短且成本低等优点。所以，深层发酵法生产的液体菌种已成为当下人们研究的热点，在此基础上，对于还原型液体菌种的研究也日见端倪[7]。还原型液体菌种不同于通常的发酵液体菌种，它将深层发酵生产得到的菌丝进行粉碎、稀释后做成菌种。其特点：一是使用方便，由专业企业生产菌种块，菇厂只要把菌种稀释搅拌即可使用。二是可以任意选择菌丝浓度，发菌快，培养时间短。三是菇厂所需设备少，初期投资成本低。四是低污染。

本文对杏鲍菇还原型液体菌种应用进行了初步研究，分别考查了菌丝打碎时间、菌种稀释倍数及接种量对杏鲍菇菌丝生长的影响，为食用菌还原型液体菌种的应用研究奠定基础。

1材料与方法

1.1菌种

杏鲍菇1号：昆山市正兴食用菌有限公司分离保存。

1.2培养基

1.2.1 PDA固体培养基

马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g、水1 000 mL，pH自然。

1.2.2液体培养基

葡萄糖20 g、黄豆粉10 g、玉米粉2 g、磷酸二氢钾1 g、硫酸镁0.5g、VB15片（10 mg/片）、水1 000 mL、pH自然。

1.2.3杏鲍菇工厂化菌包配方

棉籽壳1.8 %、玉米芯3.6 %、杂木屑46 %、麸皮3.6 %、玉米粉3.6 %、生石灰2.0 %、碳酸钙1.0 %。

制备方法：将料液混合后放到专用搅拌机里搅拌，控制培养料含水量在60 %~65 %，调节pH为7.2~ 7.5，搅匀后分装到食用菌袋中，每袋1 kg，121℃灭菌2 h，结束后放到无菌室冷却待用。

1.3方法

1.3.1杏鲍菇菌种活化

将杏鲍菇母种接种到PDA斜面培养基中，25℃培养10 d。

1.3.2杏鲍菇的液体培养

取0.5 cm×0.5 cm的活化好的菌种块接于液体培养基中。每瓶接种2块~3块。25℃静置培养24 h后置于25℃，180 r/min摇床中振荡培养12 d。

1.3.3菌种最佳打碎时间的确定

取菌丝球50 g，倒入匀浆机中打碎，打碎时间分别为0.5、1、2、3、4、5 min，然后过80目筛网，以菌丝残留在筛网上的密集程度为指标，确定最佳的打碎时间。

1.3.4杏鲍菇液体菌种的稀释

将打碎好的纯菌种分别稀释10、50、100、200、300、400、500、1 000、5 000倍。分别将稀释好的菌种接种到菌包中，接种量为20 mL，于25℃，湿度为60 %~65 %条件下恒温培养30 d。以菌丝吃料深度为指标，确定最佳的稀释倍数。

1.3.5接种量的确定

将最佳稀释倍数的菌种分别接种10、20、30、40 mL于菌种袋中，于25℃，湿度为60 %~65 %条件下恒温培养30 d。以菌丝吃料深度为指标，确定最佳的接种量。1.3.6菌丝吃料深度的测定

用直尺测量菌丝的吃料深度。吃料深度采用五点法取平均值，即：选取吃料最多的和最少的以及另外3个随机的点，取平均值作为该组的菌丝吃料深度。

2结果与分析

2.1杏鲍菇液体菌种打碎时间的确定

杏鲍菇液体菌种打碎时间的筛选结果见表1。

从表1可以看出，以菌丝残留在筛网上的密集程度为指标，2 min~5 min菌丝残留密集程度相对很低，但打碎时间延长会影响菌丝的活力，因此为保留活力强的菌丝，选择最佳打碎时间为2 min。

表1杏鲍菇液体菌种打碎后筛网残留菌丝的密度Table 1 The mycelium density on the screen of the broken strains

2.2杏鲍菇液体菌种稀释倍数的筛选结果

杏鲍菇液体菌种经过稀释接种培养后菌丝吃料深度见图1。

图1纯菌种稀释倍数对菌丝吃料深度的影响Fig.1 The effects of diluted multiples of pure strains on the depth of hyphae

由图1可以看出同样时间内，纯菌种稀释10倍和500倍后接种，菌丝吃料深度最深，即菌丝的生长速度最快，其速度为5 mm/d。从节约成本的角度出发，纯菌种的最佳稀释倍数应为500倍。

2.3杏鲍菇液体菌种接种量的筛选结果

2.3.1稀释500倍菌种不同接种量的菌丝吃料深度

稀释500倍菌种不同接种量对菌丝吃料深度影响见图2。

图2不同接种量的菌丝吃料深度（稀释500倍的菌种）Fig.2 The depth of hyphae under different inoculum sizes（Strains of diluted 500 times）

2.3.2纯菌种不同接种量的菌丝吃料深度

纯菌种不同接种量对菌丝吃料深度影响见图3。

图3不同接种量的菌丝吃料深度（纯菌种）Fig.3 The depth of hyphae under different inoculum sizes （pure Strains）

2.3.3稀释10倍菌种不同接种量的菌丝吃料深度

稀释10倍菌种不同接种量对菌丝吃料深度影响见图4。

图4不同接种量的菌丝吃料深度（稀释10倍的菌种）Fig.4 The depth of hyphae under different inoculum sizes （Strains of diluted 10 times）

从图2、图3、图4可以看出，纯菌种在不同稀释度条件下，当接种量为10 mL/袋时，菌丝的生长速度相对较慢，当接种量为20 mL/袋和30 mL/袋时的菌丝生长速度基本一致，都在同一天长满栽培袋的，而且其菌丝生长速度都大于接种量为10 mL/袋时的生长速度。同时，这3个图也表明了稀释500倍的菌种的菌丝生长速度相对也是最快。所以综合来看，纯菌种的最佳稀释倍数为500倍，稀释500倍的菌种最佳的接种量为20 mL/袋。

3　结论

本试验对杏鲍菇还原型液体菌种应用进行了初步研究，分别考查了菌丝打碎时间、菌种稀释倍数及接种量对杏鲍菇菌丝生长的影响，旨在确定最适合的液体菌种，进一步为食用菌还原型液体菌种的应用提供理论依据。试验结果表明：液体菌种的最佳打碎时间为2 min，纯菌种的最佳稀释倍数为500倍，最佳的接种量为20 mL/袋，在此条件下，杏鲍菇菌丝长势最好，菌丝30 d长满栽培袋。

参考文献：

[1]郭美英.杏鲍菇的特性与栽培技术研究[J].食用菌, 1998, 20(5): 11-12

[2]潘国才.北方地区杏鲍菇日光温室栽培技术[J].北方园艺, 2007 (5): 235-236

[3]颜明娟,江枝和,蔡顺香.杏鲍菇营养成分的分析[J].食用菌, 2002, 24(2): 11-12

[4]陈福禄,谢宝贵,郑金贵,等.药用菌多糖的药用功能与展望[J].中国药学杂志, 2005,40(4): 244-248

[5]阮晓东,张晓黎,张惠文,等.食用菌液体菌种的发展与应用[J].辽宁农业科学, 2008(1): 32-35

[6]汪维云,朱金华.食用菌液体深层发酵技术研究进展及展望[J].中国食用菌, 1997,17(2): 11-12

[7]胡晓艳.食用菌菌种的最新技术革命还原型液体菌种[J].北京农业:实用技术,2010(12):19-20

The Application Technology Research for the Reduced Liquid Strains of Pleurotus eryngii

XU BING，WU Ke-xuan，ZHENG Li-xue，JI Hong*
（College of Biology and Food Engineering，Changshu Institute of Technology，Changshu 215500，Jiangsu，China）

Abstract：Using the mycelium density on the screen as index，the optimum broken time was two seconds. Then，using the depth of hyphae as index，the diluted multiples of broken strains and inoculum size were studied on the mycelial growth. The result showed：the optimum diluted multiples of broken pure strains was 500 times，the optimum inoculum size was 20 mL per bag. The study for screening for factory production of liquid strains technology provides a theoretical basis.

Key words：Pleurotus eryngii；the broken time of strains；diluted multiples of strains；inoculum size

收稿日期：2014-07-11

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.01.047

*通信作者：冀宏（1969—），男（汉），教授，博士，研究方向：食、药用菌工程技术研究及现代农业技术经济与管理。

作者简介：徐兵（1982—），男（汉），实验师，学士，研究方向：食用菌学。

基金项目：工厂化袋栽杏鲍菇（还原型）液体菌种选育及应用（BE2013346）；常熟理工学院毕业论文重点资助课题（LG1450）