急性胰腺炎miR-216a的临床表达及其在胰腺炎诊断中的临床意义

李 毅

(汉江水利水电(集团)有限责任公司汉江医院，武汉 442799)



·临床研究·

急性胰腺炎miR-216a的临床表达及其在胰腺炎诊断中的临床意义

李 毅

(汉江水利水电(集团)有限责任公司汉江医院，武汉 442799)

目的 探讨急性胰腺炎miR-216a的表达与其在胰腺炎诊断中的临床意义。方法 选取2014年5月至2015年10月该院收治的急性胰腺炎患者30例作为A组，30例伴有血淀粉酶升高的非急性胰腺炎患者作为B组，选取同期到该院体检的健康者30例作为C组，RNA抽提各组研究对象的血浆标本，并采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对所有标本的miR-216a进行检测分析。结果 A组患者的外周血细胞miR-216a 表达明显高于C组(P<0.05)。而B组患的miR-216a和C组相比则差异无统计学意义(P>0.05)。结论 急性胰腺炎患者的外周血细胞miR-216a表达水平升高，可以作为急性胰腺炎临床诊断的一项重要生物标志物，在急性胰腺炎患者的临床治疗中具有较高的临床价值。

急性胰腺炎; miR-216a; 临床诊断

急性胰腺炎(AP)主要是因为患者体内的胰酶被多种病因于胰腺内激活，进而导致患者的胰腺局部出炎性反应，常伴随或者不伴随其他器官功能变化疾病，该疾病病发后如果得不到及时有效的治疗，很可能会发展为重症胰腺炎，给患者的生命带来威胁[1-2]。当前，临床上诊断AP主要有腹膜炎的具体体征、麻痹性肠梗阻的实际表现、血性腹水情况、腹水淀粉酶上升情况及影像学检测等，但是这些诊断效果并不显著[3-4]。近年来，经过临床医学深入研究AP发病机制后，发现胰腺炎患者胰腺组织中的蛋白表达会发生变化，而且在蛋白表达调节时，miRNA又起着至关重要的作用，并且认为miR-216持续升高是胰腺高特异性miRNA之一[5-6]。本文主要就AP miR-216a的表达与其在胰腺炎诊断中的临床意义进行分析，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年5月至2015年10月本院收治的AP患者30例作为A 组，男17例，女13例，平均年龄(36.20±8.53)岁；30例伴有血淀粉酶升高的非AP患者作为B组，男20例，女10例，平均年龄(38.10±6.61)岁；选取同期到本院健康体检者30例作为C组，其中男15例，女15例，平均年龄(37.30±6.28)岁。3组研究对象在年龄、性别等一般资料方面，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 仪器与试剂 抽提试剂选用血清RNA，实时使用的荧光定量PCR试剂盒由TaKaRa公司制造；U6与miR-216a 特异性检测的引物由上海英俊公司提供；7500的实时荧光定量PCR 仪由ABI公司制造，DU800 型分光光度计由Beckman公司生产。

1.3 方法 (1)采用实时定量荧光PCR检测所有人员的外周血细胞miR-216a的表达，采集其抗凝外周静脉血2 mL，进行12 000 r/min离心，离心时间10 min，把细胞组织成分内的血浆分离。每个血浆标本提取200 μL，然后加入到5 pmol/L的cel-miR-39 5 μL中，再加20 μL的醋酸5 mol/L和750 μL的抽提TRI Regent RNA，依据TRI Regent的标准步骤开始，待抽取的RNA以40 μL无核酸酶水溶解之后，将其置放在-80 ℃的环境中。2 μL抽提得到的RNA运用TaqMan miRNA Reverse Transcription Kit以反转方式进行记录，使用miR-216a和U6自身的特异性开始引物反转录，U6则可以作为内参基因。(2)提取反转产物2 μL，并当作模板，使用TaqMan Universal Master MixⅡ试剂盒，检测实时定量荧光PCR的实际水平，反应条件为：95 ℃ 1 min、95 ℃ 10 s及58 ℃30 s，总共有45次循环。对不同类型的标本，使用2-△△Ct值对比分析，当△Ct等于作为目的Ct值再减掉内参基因的Ct值，△△Ct则等于标本△Ct再减掉正常△Ct。2-△△Ct的数值是胰腺炎血浆内miRNA正常血浆倍数的主要反映。(3)测量出脂肪酶和淀粉酶，血淀粉酶浓度应用自动分析仪进行检测，脂肪酶的浓度则采用罗氏公司生产的Cobas-mira检测。

2 结 果

2.1 3组研究对象的外周血淀粉酶与酯酶的变化比较 A组血浆中的酯酶水平为(43.62±1.26)U/L、B组为(40.13±1.96)U/L、C组为(10.62±1.52)U/L，A组血浆中的淀粉酶为(31.26±2.95)U/L、B组为(27.65±2.95)U/L、C组为(9.65±1.37)U/L；A组淀粉酶和酯酶水平明显高于B组与C组，差异有统计学意义(P<0.05)，而B组与C组的外周血淀粉酶与酯酶水平则无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 3组研究对象的外周血miR-216a变化 A组患者的外周血miR-216a值为5.054明显高于B组的2.761与C组的2.648，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.3 运用ROC曲线对miR-216a 在胰腺炎诊断的价值进行统计和分析 ROC曲线证实miR-216a 能够作为该疾病诊断的一个重要指标，区分出胰腺炎患者与健康者，当中效果最为明显的截断值，可以由MedCalc软件自行生成，miR-216a最终的曲线下面积确认为0.892，最佳的截断值则可确认为1.832 5，敏感性为85.25%，特异性为87.08%。

3 讨 论

AP在临床上非常多见，是一种危急重症，患者发病之后，很快便会出现休克、代谢性酸中毒及多器官功能衰竭等多种临床，病死率极高。目前，这种疾病的主要发病原因还未得到明确。临床上对AP患者进行诊断，多数是观察AP患者的临床症状或者对其血液进行检测，再对其腹膜炎体征进行比较，观察其是否有显著的麻痹性肠梗阻现象；血性腹水、腹水淀粉酶是否呈现上升状态及B超和CT检查胰腺是否肿胀[7-8]。近年来，经过相关人员的深入研究，miR-216a表达成为了AP诊断中的另一个诊断指标。

miRNA属于内源性质的非编码调控单链分子RNA，长度多在18～25个核苷酸。miRNA表达异常是导致人类疾病的一个重要因素，主要是因为miRNA在不同的组织中，其特异性miRNA的表达谱也会存在一定的差异，这就表示miRNA 能够作为人体疾病诊断的一个重要指标。AP患者发病时，其胰腺组织蛋白表达谱会出现较大的变化，而miRNA 正是基因表达调控中最常用的一种方法，在人体基因表达调控中有着至关重要的作用。相关研究显示，miR-216a在人体胰腺组织内，属于一个高特异性表达的miRNA物质[9]。研究显示，AP患者血浆中的脂肪酶和淀粉酶水平均会有不同程度的增加，而血浆miR-216a在胰腺炎血浆内的表达量也会持续上升。证明了miR-216a可以作为AP患者临床诊断的一项重要生物标志物。王一飞等[10]对miR-216a 在AP血浆中特异性高表达情况进行了研究，该项研究选取了18例血浆淀粉酶增高的急性阑尾炎患者血液进行检测，结果发现脂肪酶与淀粉酶明显高于健康者，而miR-216a则无明显著差异。

相关研究结果显示，经过血浆miR-216a 的检测，并将其作为AP患者的临床诊断工具，其敏感性与特异性都比较高[11]。虽然可以将其作为临床诊断的重要标志，但是想要让生物标记物也真正意义上应用到临床诊断中，还需要实现以下几个方面的目标：扩大标本数量，深入研究miR-216a 有关的表达特性；通过前瞻性的实验研究和发现更多的血浆miRNA标志物等，均是提高AP诊断水平的重要内容[12-13]。

本研究结果显示，A组患者的miR-216a表达明显高于B组与C组(P<0.05)，但是B组与C组差异无统计学意义(P>0.05)。由此可见，AP患者的外周血细胞miR-216a水平升高，可以作为AP临床诊断的一项重要生物标志物，在AP的临床诊断中具有较高的应用价值。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.046

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