两种反转录荧光定量聚合酶链反应检测HCV RNA的对比分析

唐章平

(四川省德阳市罗江县人民医院检验科　618500)

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两种反转录荧光定量聚合酶链反应检测HCV RNA的对比分析

唐章平

(四川省德阳市罗江县人民医院检验科618500)

目的探讨常规反转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)与高精度RT-qPCR检测丙型肝炎病毒(HCV)RNA的差异，为医院开展院内感染监控提供参考。方法对2014年1月至2015年12月的459例住院受血者，采用两种RT-qPCR检测HCV RNA，比较两种检测方法RNA阳性率的表达差异。结果高精度RT-qPCR和常规RT-qPCR检测HCV RNA的阳性率分别为3.70%(17例)、1.74%(8例)，高精度RT-qPCR检测HCV RNA阳性表达明显高于常规RT-qPCR检测，差异有统计学意义(χ2=11.326，P<0.05)。结论合理应用高精度RT-qPCR对输血前患者进行HCV RNA检测，可以提高对HCV RNA的检出率，减少了医源性感染，提高了对受血患者健康状况的判断能力。

丙型肝炎病毒；高精度实时荧光定量聚合酶链法；医源性感染

丙型肝炎病毒(HCV)是单股正链RNA病毒，近年来，我国丙型肝炎患者逐渐增多，一般人群HCV阳性率为3.2%，可引起急性肝炎，或发展成慢性肝炎，严重者可发展成肝硬化，甚至肝癌[1]。实验室检查主要包括免疫学及分子生物学检测，反转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)是目前采用较多的检测HCV RNA方法，是表示传染性及复制病毒最可靠的指标，也是显示HCV感染状态及治疗效果的重要指标[2-3]。本研究采用两种RT-qPCR检测HCV RNA，比较两种检测方法RNA阳性率的表达差异。

1资料与方法

1.1一般资料本院2014年1月至2015年12月的459例住院受血者，其中男203例，女256例，年龄5～87岁，平均(33.6±15.1)岁。

1.2仪器与试剂荧光定量PCR法均采用罗氏LightCycler*480Ⅱ实时荧光定量PCR仪，常规RT-qPCR采用上海科华生物工程股份有限公司生产的HCV核酸定量试剂盒(PCR-荧光探针法)，检测的线性范围：103～107IU/mL，高精度RT-qPCR采用罗氏诊断产品(上海)有限公司生产的丙型肝炎病毒核酸定量试剂盒(PCR-荧光探针法)，检测的线性范围：1～15×108IU/mL，均严格按照说明书进行操作。每份阳性标本均重复检测2次。

1.3检测方法均在输血前抽取受血着静脉血，同时进行高精度RT-qPCR检测及常规RT-qPCR检测。

1.4统计学处理采用SPSS15.0软件进行数据处理及统计学分析，组间比较采用方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

高精度RT-qPCR和常规RT-qPCR检测HCV RNA的阳性率分别为3.70%(17例)、1.74%(8例)，高精度RT-qPCR检测HCV RNA阳性表达明显高于常规RT-qPCR检测，差异有统计学意义(χ2=11.326，P<0.05)。

3讨论

丙型肝炎是由HCV感染引起的一种主要经血液传播的传染性疾病，呈世界流行趋势，其感染途径可能有输血感染、密切接触、不良性行为和吸毒等。随着《输血法》的完善，供血中心已严格监测血制品传染性指标，保障受血者的用血安全是各个血站的一项重要工作[4]。但是，近年来人们发现经血液传播的HCV传染病越来越多见于非输血人群，医务人员对患者进行各项诊治工作时必须提高警惕，加强自身安全防护措施，而提高检测技术对HCV监测的灵敏度和特异度是最行之有效的解决医院交叉感染和避免医患矛盾的途径之一。

自1989年科学家发现HCV以来，已建立了针对HCV抗体、HCV RNA和HCV抗原的各种检测方法，可定性和定量检测HCV RNA，常见的方法有RT-PCR定性法、bDNA检测技术、RT-qPCR定量法等，其中RT-qPCR的基本原理是通过引物扩增并检测特异性mRNA 来证实HCV的存在，具有高效率、高灵敏度、高特异度的优点，且操作简便，是检测HCV RNA 比较有效的方法，也是预测和观察抗病毒效果的重要指标[5]。常规RT-qPCR检测HCV RNA的线性范围为103～107IU/mL，而高精度RT-qPCR是(1～15)×108IU/mL[6]，后者灵敏度明显高于前者，这是因为高精度RT-qPCR是采用COBAS HCV RNA二代定量试剂，增加了针对HCV基因型4 的探针和引物，即用靶基因特异的裂解双重标记寡核苷酸检测探针检测HCV RNA，提高了检测灵敏度[7]。高精度RT-qPCR还采用一已知数量的HCV定量标准(QS)RNA分子，是一种非传染性体外转录RNA(aRNA)，组成并含有与HCV靶RNA完全相同引物结合位点的HCV序列片段，是一种独特的探针结合区，使HCV QS扩增子与HCV靶扩增子区分开，还有弥补抑制作用并控制制备和扩增过程，使每个标本中HCV RNA的定量更加准确[8]。

本研究采用两种RT-qPCR检测HCV RNA，比较了高精度RT-qPCR与常规RT-qPCR检测本院459例住院受血者HCV RNA阳性率的表达差异，结果发现，高精度RT-qPCR与常规RT-qPCR检测HCV抗体的阳性例数分别为17例(3.70%)、8例(1.74%)。高精度RT-qPCR对HCV抗体RNA阳性表达率明显高于常规RT-qPCR，其检测精度高，差异有统计学意义(P<0.05)。因此，采用高精度RT-qPCR对输血前患者进行HCV RNA检测，可以提高对HCV RNA的检测率，但是，高精度RT-qPCR的试剂盒价格昂贵，导致检测费用大大高于常规RT-qPCR，因此，笔者认为在临床应用中，监测HCV RNA定量时，可以先用常规RT-qPCR定量试剂检测，当 HCV RNA浓度下降到103以下时，再用高精度RT-qPCR定量检测，是比较合理适用的检测流程。

本研究资料表明，为了预防输血引起的医疗纠纷，明确输血事故的责任，杜绝和减少医疗机构的损失，首先应严格控制血液制品的质量，同时认真检测患者输血前血液传染性指标。合理应用常规和高精度RT-qPCR，可明显提高对HCV RNA的检出率，有助于为医疗纠纷提高可靠举证和防止院内感染。

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2016-01-10修回日期：2016-03-15)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.064

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1673-4130(2016)12-1737-02