宫颈脱落细胞HPVL1蛋白监测在高危型HPV阳性妇女分流中的应用

黄平，张雪，陈光元，金瑛

(深圳市宝安区松岗人民医院妇科1、检验科2，广东 深圳 518105)

宫颈脱落细胞HPVL1蛋白监测在高危型HPV阳性妇女分流中的应用

黄平1，张雪2，陈光元1，金瑛2

(深圳市宝安区松岗人民医院妇科1、检验科2，广东 深圳 518105)

目的 探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)阳性的妇女采用宫颈脱落细胞HPV L1蛋白检测的临床实际意义。方法选择2014年10月至2015年10月期间我院妇科收治的386例高危型HPV阳性患者，收集患者的宫颈脱落细胞，采用液基薄层细胞学检查(TCT)、免疫组化两种方法检测HPV L1蛋白，同时对所有患者进行阴道镜检测，可疑部分取活检进行病理检查。对比HPV L1蛋白在正常妇女及不同的病理组织学病变患者中的表达情况。以此评估宫颈脱落细胞HPVL1蛋白检测对筛查子宫病变的临床实际价值。结果386例高危型HPV阳性患者中，发现正常子宫颈162例，低度鳞状上皮内病变94例，高度鳞状上皮内病变128例，而子宫颈鳞癌2例，统计后发现高度内皮病变者、宫颈鳞癌者的HPV L1蛋白阳性率明显低于正常者和低度内皮病变者。此外，宫颈脱落细胞的HPV L1蛋白检测中的组织学诊断关于高度内皮病变者、宫颈鳞癌者两种类型的敏感度、阴性预测值均明显高于TCT检查，但是在特异度一项中，组织学诊断则明显低于TCT检查，差异均有统计学意义(P＜0.05)，而两项检查中对于阳性预测结果差异无统计学意义(P＞0.05)；高危型HPV阳性患者中，HSIL、SCC患者的HPV L1蛋白阳性比例为19.2%，而正常以及LSIL者的蛋白阳性比例高达66.4%，差异均有统计学意义(P＜0.05)；宫颈脱落细胞额HPV L1蛋白检测中的组织学诊断关于高度内皮病变者、宫颈鳞癌者两种类型的敏感度、阴性预测值均明显高于TCT检查，但是在特异度一项中，组织学诊断则明显低于TCT检查，差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论对高危型HPV阳性的妇女患者而言，子宫颈脱落细胞HPV L1蛋白检测具有一定的筛查意义，能够为临床提供多一种且适宜的分流方案。

宫颈脱落细胞；人乳头瘤病毒 L1；蛋白监测；高危；妇女

高危型人乳头瘤病毒(HPV)是子宫癌发病的一项重要预测因素，和传统的细胞学检查进行对比，可以发现高危型HPV的检测具有更高的敏感性，更容易检测和筛查出宫颈病变[1]。甚至有学者建议可以采用HPV检测来对宫颈癌进行初级筛选以提高筛查率。考虑到HPV检测特异度较低，因此对初筛结果中HPV阳性妇女进行分流就显得尤为重要。HPV L1蛋白为HPV感染过程中的一种结构蛋白，该蛋白的表达能够精准地反映宫颈细胞中HPV病毒处于何种状态。本文通过分析HPV L1蛋白的监测在高危型HPV阳性妇女分流中的价值，以探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2014年10月至2015年10月期间我院妇科收治的高危型HPV阳性患者386例。纳入标准：(1)年龄30～65岁；(2)非妊娠女性；(3)患者或患者家属自愿参与并签署知情同意书。排除标准：(1)伴有严重的心肝肾等慢性疾病；(2)有神经系统疾病或精神系统疾病；(3)既往宫颈癌或其他子宫病变。

1.2 方法 对所有患者进行阴道镜检测，必要时对可疑的病变进行阴道活检。(1)高危型HPV的DNA检测方法：收集受检患者宫颈脱落细胞，应用第二代的杂交捕获方案进行检测，对所有的13种亚型进行检测。(2)细胞学检查方法：同样先是收集宫颈脱落细胞，然后再制作两张液基薄层细胞片，一张进行TCT的检查，而另一张则是行HPV L1检测。最后是根据Bethesda系统作出准确的诊断。(3)病理活检：病理活检采用阴道镜检查，全面对阴道、宫颈内进行检查，对于考虑为病变部位要取组织进行病理检查，若未发现可疑病变，即诊断为正常子宫。(4) HPV L1蛋白的检测：将事先做好的液基薄层细胞片用无水乙醇进行固定，固定时间20 min左右，随后用专用的蛋白染色试剂盒进行染色，再行免疫组化检测蛋白的表达情况。

1.3 诊断标准 TCT诊断标准[2]：采用2001年TBS阴道/宫颈细胞学分类报告系统。HPV L1蛋白检测诊断标准：阳性：显微镜下有1个被红染的细胞核即诊断阳性，阳性者被认为宫颈病变发生率低。病理结果≥C1N1确诊为宫颈病变，以病理结果为金标准评价HPV L1蛋白检测在筛检宫颈病变中的价值。

1.4 统计学方法 应用SPSS16.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 组织学和细胞学诊断结果 386例高危型HPV阳性患者中，组织学诊断发现正常子宫颈者162例，低度鳞状上皮内病变(LSIL)94例；高度鳞状上皮内病变(HSIL)128例；鳞状细胞癌(SCC)2例。而细胞学检查中无病变272例，未明确诊断27例，低度鳞状上皮内病变45例，而无法排除高度鳞状上皮内病变11例，明确为高度鳞状上皮内病变21例，无诊断为宫颈鳞癌患者，见表1。

表1 组织学和细胞学诊断结果(例)

2.2 不同组织学诊断HPV L1蛋白表达 高危型HPV阳性患者中，HSIL、SCC中HPV L1蛋白阳性率为19.2%(25/130)，而正常及LSIL者的蛋白阳性率达66.4%(170/256)，差异有统计学意义(χ2=5.392，P＜0.05)，见表2。

表2 不同组织学诊断HPV L1蛋白表达对比

2.3 宫颈脱落细胞HPV L1蛋白检测和细胞学检查比较 宫颈脱落细胞额HPV L1蛋白检测中的组织学诊断关于高度内皮病变者、宫颈鳞癌者两种类型的敏感度、阴性预测值均明显高于TCT检查，差异均有统计学意义(P＜0.05)；但在特异度一项中，组织学诊断则明显低于TCT检查，差异有统计学意义(P＜0.05)，而两项检查对阳性预测结果比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表3。

表3 宫颈脱落细胞HPV L1蛋白检测和细胞学检查比较(例)

2.4 不同细胞学检查中HPV L1蛋白检测情况 对于TCT检查正常的患者，HPV L1蛋白预测组织学诊断在高度内皮病变者、宫颈鳞癌者两种类型中敏感度为87.5%、阴性预测值94.12%、特异度为61.54%、阳性预测值41.18%，见表4。

表4 不同细胞学检查结果中HPV L1蛋白检测情况(例)

3 讨 论

HPV L1蛋白可以准确地反映出HPV复制处于何种状态。一方面，HPV整合到宿主基因会引起L1蛋白的表达发生缺失，而当表达缺失严重时，HPV感染人体正常细胞后就无法被免疫系统所识别，因此清除率大大降低，长期以往则会导致上皮细胞发生恶变。因此HPV L1蛋白和宫颈病变有密切的联系。研究发现，部分HPV L1蛋白阳性的患者宫颈病变具有自愈能力[3-4]，相反部分原本为阴性表达的患者则有可能向阳性转变。同时当宫颈病变的程度越高，阳性率也就越低。由此可见，HPV L1蛋白的筛查可以用于对宫颈病变的预测，并且对细胞学诊断结果有一定的借鉴和参考价值，以帮助提高诊断率。宫颈脱落细胞的L1蛋白检测是对高危型HPV初筛阳性妇女分流的一项重要措施。鉴于细胞学检查的低敏感性，HPV L1蛋白检测就承担了提高诊断率的任务，临床应用价值较高[5]。值得注意的是，部分基因的检测相对复杂，在推广方面受到了一定的阻碍[6]。有学者报道称，当对病理诊断为HSIL以上级别的宫颈病变，HPV L1蛋白检测的特异度要低于细胞学检查[7-8]，但其敏感性和阴性预测值仍有很高的临床实用价值。两种方法相互协同，互补不足。此外，细胞学方法诊断为ASCUS的患者会发生过度治疗或者治疗不足的情况[9-10]，而HPV L1蛋白检测则能很好地弥补这一劣势。在细胞学正常的患者中，尽管HPV L1蛋白检测为阳性，仍旧以随访为主，无需治疗。

通过上述研究结果可知，宫颈脱落细胞HPV L1蛋白检测相比于细胞学检查在很多方面具有明显的优势，例如在高度内皮病变者、宫颈鳞癌者的检查中，HPV L1蛋白检测的敏感性以及阴性预测值明显优于细胞学检查，差异有统计学意义(P＜0.05)，而对于阳性预测值，则差异无统计学意义(P＞0.05)。这也说明了两种检查方法各有所长，可相互补长取短以提高诊断率。

综上所述，宫颈脱落细胞HPV L1蛋白检测有效弥补了细胞学的劣势，对分流高危HPV阳性妇女的筛查工作提供了更多的参考。为了进一步研究该检测方法的临床使用价值，可以再次扩大样本量，以获得更多可靠的信息。

[1]李美琴,李春宏,裴圣林,等.宫颈脱落细胞HPVL1蛋白及HPV DNA载量对宫颈病变的预测价值[J].重庆医学,2015,44(13): 1804-1806.

[2]班振英,雷冬梅,智艳芳,等.HPVL1壳蛋白在宫颈脱落细胞及宫颈组织中的表达及意义[J].中国妇幼保健,2014,29(14): 2245-2247.

[3]亚力坤·穆罕默德,赵丽霞,朱开春,等.维、汉族HPV阳性妇女宫颈脱落细胞中L1蛋白的表达差异研究[J].中国肿瘤,2013,22(10): 841-844.

[4]刘缨,张建芳,蔡浩昱,等.17500例子宫颈液基细胞学诊断结果分析[J].海南医学,2012,23(12):100-101.

[5]张哲雄,徐承来,曹永涛,等.高危型人乳头状病毒和IL-17在宫颈病变患者宫颈脱落细胞中表达的相关性和临床意义[J].中国实验诊断学,2012,16(2):252-254.

[6]王家建,田其芳,张甦,等.高危型HPV阳性妇女子宫颈脱落细胞HPV L1蛋白检测的临床意义[J].中华妇产科杂志,2015,34(4): 253-257.

[7]王力.高危型HPV宫颈癌宫颈活检及宫颈脱落细胞病理检查结果分析[J].检验医学与临床,2015,9(23):3591-3592.

[8]Powell SE,S Hariri S,Steinau M,et al.Impact of human papillomavirus(HPV)vaccination on HPV 16/18-related prevalence in precancerous cervical lesions[J].Vaccine,2012,31(1):109-113.

[9]何涛,蔡晓磊,孙宗立,等.高危型HPV阳性患者解脲支原体感染与宫颈癌发生的相关性[J].山东医药,2013,53(32):38-40.

[10]Alhamany Z,El Mzibri M,Kharbach A,et al.Prevalence of human papillomavirus genotype among Moroccan women during a local screening program[J].Journal of Infection in Developing Countries, 2010,4(11):732-739.

Application of HPV L1 protein monitoring of cervical exfoliated cells in high-risk HPV-positive women.

HUANG Ping1,ZHANG Xue2,CHEN Guang-yuan1,JIN Ying2.Department of Gynecology1,Department of Clinical Laboratory2, Songgang People's Hospital of Bao'an District of Shenzhen,Shenzhen 518105,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo discuss the clinical significance of human papillomavirus(HPV)L1 protein of cervical cells in detection of high-risk HPV-positive women.MethodsA total of 386 high-risk HPV-positive women,who admitted to our hospital from October 2014 to October 2015,were selected,and cervical exfoliated cells of these patients were collected.HPV L1 protein was detected by using liquid based cytology test(TCT)and immunohistochemistry.At the same time,patients were given vaginal examination,and suspicious part took biopsy for pathological examination. The expressions of HPV L1 protein in normal women and patients with different histopathological lesions were compared.The clinical value of HPV L1 protein monitoring of cervical exfoliated cells in screening of uterine lesions was evaluated.ResultsAmong 386 high-risk HPV-positive patients,there were 162 patients with normal cervix,94 patients with low grade squamous intraepithelial lesions,128 patients with high grade squamous intraepithelial lesions,and 2 patients with cervical squamous cell carcinoma.The positive rates of HPV L1 protein of patients with high endothelial lesion and patients with cervical squamous cell carcinoma were significantly lower than those of normal women and patients with low grade endothelial lesions.In addition,the sensitivity and the negative predictive value of patients with high endothelial lesion and patients with cervical squamous cell carcinoma in histologic diagnosis of HPV L1 protein monitoring of cervical exfoliated cells were significantly higher than those of TCT examination(P＜0.05);but in specificity,histological diagnosis was significantly lower than that of TCT examination(P＜0.05);there was no significant difference between the positive predictive results of two tests(P＞0.05).In high-risk HPV-positive patients,the proportion of positive HPV L1 protein in HSIL and SCC patients was 19.2%,while the proportion of positive HPV L1 protein in normal women and LSIL patients were up to 66.4%,with statistically significant difference(χ2=5.392,P＜0.05).The sensitivity and negative prediction value of tissue diagnosis on high endothelial lesions and squamous cell carcinoma of the uterine cervix by cervical exfoliated cell amount of HPV L1 protein were significantly higher than those of TCT (χ2=6.492 3.013,P＜0.05);but in the specificity,the histological diagnosis was significantly lower than TCT(χ2=5.286, P＜0.05).ConclusionFor high-risk HPV-positive women,HPV L1 protein monitoring of cervical exfoliated cells has a certain screening significance,which provides a suitable diversion scheme in clinic.

Cervical exfoliated cells;Human papillomavirus L1 protein;Protein monitoring;High-risk;Women

R711.74

A

1003—6350（2016）20—3322—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.20.018

2016-04-12)

黄平。E-mail：hpingdr@126.com