不同病因慢性肝病患者肝组织中IL-10的表达及意义

吴鸿雁，黄　睿，熊亚莉，陈　锦，孙珍花，王贵阳，吴　超



·论著·

不同病因慢性肝病患者肝组织中IL-10的表达及意义

吴鸿雁1，黄睿2，熊亚莉2，陈锦1，孙珍花2，王贵阳2，吴超2

210008江苏南京，南京大学医学院附属鼓楼医院,1. 病理科,2. 感染科

[摘要]目的探讨不同病因的慢性肝病(CLD)患者肝组织中白细胞介素-10(IL-10)的表达及其与肝组织炎症和纤维化的关系。方法收集93例CLD患者及23例正常对照肝组织石蜡标本，免疫组织化学方法检测肝组织中IL-10的表达。结果不同病因的CLD患者肝组织中肝小叶及汇管区IL-10的表达均较正常对照明显增高(P<0.01)。随着肝脏炎症分级(G)的增高，CLD患者肝组织内肝小叶及汇管区IL-10的表达逐渐增强，差异有统计学意义。随着肝脏纤维化程度分期(S)的增高，CLD患者肝组织内肝小叶及汇管区IL-10的表达亦逐渐增高，差异有统计学意义。结论IL-10可能参与CLD患者肝脏的炎症和纤维化的发生。

[关键词]慢性肝病；白细胞介素-10；炎症；肝纤维化

慢性肝病(chronic liver diseases, CLD)包括病毒性肝炎、自身免疫性肝病、酒精性肝病等，常可进展为肝纤维化、肝硬化、肝癌，甚至死亡，严重影响健康。研究证实，免疫系统在介导CLD的肝损伤及纤维化中发挥重要的作用[1]。白细胞介素-10(interleukin-10, IL-10)是T淋巴细胞、活化的巨噬细胞、辅助性T 淋巴细胞2(Th2)等分泌的重要抗炎细胞因子。但其是否参与CLD患者肝组织炎症和纤维化的发生尚不完全清楚。本研究拟检测不同病因CLD患者肝组织中IL-10的表达，探讨各种CLD患者肝组织的IL-10表达与其肝组织炎症和纤维化的关系。

1对象与方法

1.1病例选择研究对象为2008年5月-2013年12月在南京大学医学院附属鼓楼医院接受肝穿刺活检或者肝脏手术的CLD患者肝组织石蜡标本。共入组93例CLD患者，其中男49例，女44例，中位年龄48(21～70)岁。其中慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)65例，原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis，PBC)7例，自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)14例，酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)7例，同时纳入23例肝移植的供肝标本作为正常对照(healthy control, HC)。

1.2纳入标准患者年龄大于18岁，性别不限。所有患者均在我院明确诊断为CLD，其中CHB诊断符合中华医学会肝病学分会和中华医学会感染病学分会制定的《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》的诊断标准[2]。ALD及AIH、PBC的诊断标准分别符合中华医学会肝病学分学的《酒精性肝病诊疗指南》[3]和中华医学会风湿病学分会的《自身免疫性肝病诊断和治疗指南》[4]。

1.3CLD患者肝组织炎症分级和纤维化分期CLD患者肝组织石蜡标本进行切片，常规HE染色，根据CLD患者肝组织HE染色结果，由南京鼓楼医院病理科有经验的医师参照Scheuer提出的标准对CLD患者肝组织进行炎症分级和纤维化分期[5]。

1.4IL-10表达的检测采用Envision 免疫组化法检测CLD患者肝组织中IL-10的表达部位及水平。将肝组织蜡块切片，常规脱蜡至水，滴加3% H2O2阻断内源性过氧化物酶，将切片置于EDTA(pH9.0)中行高压热修复，自然冷却，PBS冲洗2次，滴加抗IL-10抗体(美国Abcam公司)，4 ℃冰箱孵育过夜。PBS冲洗2次，滴加二抗(美国Invitrogen公司)后室温孵育20 min，DAB显色，苏木精复染、脱水、透明、封固。

1.5结果判读标准由南京鼓楼医院病理科有经验的医师盲法对CLD患者肝组织中肝小叶及汇管区IL-10的表达分别进行评分，采用染色强度乘以阳性细胞数量的方法综合评分法，阳性数量评分：< 5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分；着色强度评分：无着色为0分，浅黄着色为1分，黄色为2分，棕黄着色为3分。两者相乘即为该样本的IL-10得分[6]。

2结果

2.1不同病因CLD患者肝组织IL-10表达对不同病因所致CLD患者肝组织内IL-10的表达进行免疫组织化学检测。结果发现正常对照肝组织中仅有少量的IL-10的表达，而CLD患者肝组织中肝小叶及汇管区均有大量的IL-10的表达(图1)。统计分析表明，CLD患者肝组织中肝小叶及汇管区IL-10的表达均较正常对照明显增高(P<0.001，图2)。对不同病因的CLD患者肝组织中IL-10的表达进行比较，发现CHB、PBC、AIH及ALD患者肝组织内肝小叶及汇管区IL-10表达均较正常对照肝组织明显增多，差异有统计学意义(P<0.01)。而不同病因的CLD患者IL-10表达无明显的统计学差异(P>0.05，图3)。

2.2CLD患者肝组织中IL-10表达与肝组织炎症和纤维化的关系为分析IL-10表达与CLD患者肝组织炎症和纤维化程度的关系，对不同炎症分级(G)和纤维化分期(S)的CLD患者肝组织内IL-10表达进行了分析。如图4所示，不论肝小叶或是汇管区，随着G分级的增高，CLD患者肝组织内肝小叶及汇管区IL-10的表达逐渐增高，差异有统计学意义。G4期的患者IL-10评分略低于G3期，考虑与G4期患者样本较少有关。随着S分期的增高，CLD患者肝组织肝组织内肝小叶及汇管区IL-10的表达亦呈逐渐增高的趋势(图5)。

3讨论

IL-10是最早由Mosmann等发现的由T淋巴细胞、活化的巨噬细胞、Th2等细胞产生的重要免疫抑制因子[7]。IL-10有广泛的免疫抑制活性，可抑制T细胞增殖、抑制抗原提呈，抑制巨噬细胞活化等[7]，能够限制过度的免疫反应对组织器官造成的损害[8]。

在肝脏中许多细胞都能分泌IL-10，包括肝细胞、Kupffer细胞、窦内皮细胞、肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)以及淋巴细胞等[9-10]。既往的动物实验及临床数据表明，IL-10可能参与肝损伤和纤维化的发生。Poovorawan等[11]研究发现HBeAg阴性的CHB患者血清中IL-10的水平与其肝组织炎症坏死程度及纤维化程度呈明显的正相关。Lian等[12]研究也发现CHB患者血清IL-10水平较正常对照明显增高，且与患者血清丙氨酸氨基转移酶(alanine amiotransferase, ALT)水平呈明显的正相关，提示IL-10参与CHB患者肝损伤。Wang等[13]研究发现，HBV相关慢加急性肝衰竭患者血清IL-10明显增高，且与血清ALT正相关。对于IL-10在CLD患者肝组织中的表达情况及其与肝组织炎症程度和纤维化程度的关系报道较少。本研究对不同病因的CLD患者肝组织中IL-10表达检测，发现不同病因的CLD患者肝组织中IL-10表达较正常对照明显增高。CLD患者肝组织中IL-10表达与肝组织炎症及纤维化程度均呈明显的正相关，提示IL-10参与CLD患者的肝组织炎症和纤维化。

CLD患者肝组织中IL-10增高的原因尚不完全清楚。动物实验研究发现四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl4)诱导的肝损伤和肝纤维化小鼠肝组织中IL-10的表达明显增高，提示IL-10参与肝损伤及肝纤维化的发生[14]。然而IL-10缺陷的小鼠CCl4诱导的肝损伤及纤维化的程度却较野生型明显严重[15-16]。此外，有研究发现给予外源性IL-10能够明显减轻CCl4诱导的大鼠肝组织炎症程度和肝纤维化程度[17]，同时能减轻肝星状细胞的活化，促进活化的肝星状细胞凋亡[18]。因此，推测CLD患者肝组织中IL-10的增高，可能是机体为了限制过强的免疫导致的肝组织炎症和纤维化的发生。

总之，本研究提示IL-10参与CLD患者的肝脏炎症和纤维化，但其肝组织中IL-10具体来源及调控机制尚不完全明确[19-20]。因此，进一步明确IL-10在CLD肝组织中的来源及其具体的调控机制，将有利于明确CLD的发病机制，从而寻找有效的治疗CLD的新方法。

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(本文编辑：齐名；英文编辑：王建东)

Expression of interleukin-10 in the liver tissues of patients with chronic liver diseases of different etiologies

WU Hong-yan1, HUANG Rui2, XIONG Ya-li2,CHENJin1,SUNZhen-hua2,WANGGui-yang2,WUChao2.

1.DepartmentofPathology, 2.DepartmentofInfectiousDiseases,NanjingDrumTowerHospital,NanjingUniversityMedicalSchool,Nanjing,Jiangsu210008,China

[Key words]chronic liver disease; interleukin-10; inflammation; liver fibrosis

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression of interleukin-10 (IL-10) in the liver tissues of patients with chronic liver diseases (CLD) and determine its association with liver inflammation and liver fibrosis. MethodsA total of 93 patients with different types of CLD were enrolled in our study. Twenty-three normal liver tissues were included as control. The expression of IL-10 was determined by immunohistochemistry in the formalin-fixed, paraffin-embedded liver tissues of CLD patients and healthy controls. ResultsThe expression of IL-10 was significantly increased in both hepatic lobule and portal area of liver tissues of CLD patients with different etiologies as compared with normal controls (P<0.01). CLD patients with high inflammation grades (G) had higher IL-10 expression in hepatic lobule and portal area of liver tissues compared to those with lower grades. Significantly higher IL-10 expression was found in hepatic lobule and portal area of liver tissues of CLD patients with high fibrotic stages (S) compared to those with lower stages. ConclusionIL-10 may play a pathological role in chronic liver inflammation and fibrosis in CLD.

基金项目：南京市医学科技发展项目(YKK13065)

通讯作者：熊亚莉，E-mail: yaya-mei@sohu.com

[中图分类号]R575

[文献标志码]A

doi：10.3969/j.issn.1672-271X.2016.02.004

(收稿日期：2015-07-10;修回日期：2015-10-19)

引用格式：吴鸿雁，黄睿，熊亚莉,等.不同病因慢性肝病患者肝组织中IL-10的表达及意义[J].东南国防医药，2016,18(2):122-124,141.