FQ-PCR与RT-PCR检测丙肝患者HCV RNA的敏感性及特异性比较

宋予娟

FQ-PCR与RT-PCR检测丙肝患者HCV RNA的敏感性及特异性比较

宋予娟

目的比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)与逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测丙型肝炎(丙肝)患者丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)的敏感性及特异性。方法67例丙肝患者和同期50例肝正常人, 均行FQ-PCR和RT-PCR检测HCV RNA。观察两种检测的敏感性和特异性。结果丙肝患者FQ-PCR检测HCV RNA阳性率为64.18%, 较RT-PCR的46.27%明显较高, 差异具有统计学意义(P＜0.05)；肝正常人HCV RNA检测中RT-PCR检测有3例阳性, FQ-PCR存在一定的漏诊可能。结论FQ-PCR检测丙肝患者HCV RNA敏感性和特异性均较高, 但极少数FQ-PCR检测为阴性不排除HCV RNA为阳性的可能, 临床诊断中可参考两种检测结果, 尽量避免漏诊和误诊。

丙型肝炎；荧光定量聚合酶链反应；逆转录-聚合酶链反应；丙型肝炎病毒核糖核酸

丙型病毒性肝炎(HC)主要由HCV引起, 患者临床多表现发热、消化道症状及肝功能异常, 严重时易发展为肝硬化、肝癌［1］。医学上诊断HCV感染主要是检测血清HCV RNA且检测方法较多［2］。本次研究选取本院2013年2月～2014年5月收治的67例丙肝患者和同期50例肝正常人分别行FQ-PCR和RT-PCR检测, 旨在比较FQ-PCR与RT-PCR检测丙肝患者HCV RNA的敏感性及特异性。现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2013年2月～2014年5月收治的67例丙肝患者和同期50例肝正常人。丙肝患者中男45例,女22例, 年龄24～76岁, 平均年龄(45.2±10.7)岁；肝正常人中男38例, 女12例, 年龄22～71岁, 平均年龄(41.5±10.6)岁。

1.2方法 67例丙肝患者和50例肝正常人均行FQ-PCR和RT-PCR检测HCV RNA。①FQ-PCR检测：取空腹静脉血4 ml, 分离血清后低温保存, 采用HCV RNA提取液提取HCV RNA后逆转录、不对称扩增、信号扩增, 采用荧光免疫分量分析仪(江苏南京基蛋生物科技股份有限公司, 型号Getein1100)检测扩增后产物, 设置阴性、阳性及强阳性对照,以＜1.2×102copies/ml为阴性界线。②RT-PCR检测：提取HCV RNA后核酸扩增、逆转录, 经2次PCR反应, 取10 μl PCR反应物在酶标仪紫外线灯下检测, 根据OD值判定阳性、阴性, OD≤0.3判定为阴性, ＞0.3判定为阳性。

1.3统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对数据进行统计分析。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

丙肝患者FQ-PCR检测HCV RNA阳性率较RT-PCR检测显著较高, 差异具有统计学意义(P＜0.05)；RT-PCR检测肝正常人HCV RNA出现3例阳性, 而FQ-PCR检测0例阳性, FQ-PCR存在一定的漏诊可能。见表1。

表1 FQ-PCR和RT-PCR检测HCV RNA结果比较(n, %)

3 讨论

HCV感染是各种慢性肝病、肝硬化以及肝癌的常见病因,其中丙型病毒性肝炎较为典型［3］。据统计近年来因HCV感染造成的发病和死亡人数均呈上升趋势, 我国丙型病毒性肝炎感染率高达3.2%, 因此加强病毒HCV RNA早期筛查检测对尽早确定病情、指导治疗尤为重要［4］。随着医学技术的进步和研究的不断深入, HCV RNA检测技术得到重大进展, 在传统定性RT-PCR基础上出现了多种定量检测方法并广泛用于临床中, 其中以荧光定量FQ-PCR较为常见［5］。本院本次研究通过选取丙肝患者和肝正常人分别行两种检测, 进一步研究FQ-PCR与RT-PCR检测丙肝患者HCV RNA的敏感性及特异性。

医学临床证实, 传统RT-PCR检测较为繁琐, 易出现检验样本交叉污染、灵敏度较低等弊端, 且PCR产物必须经电泳或杂交检测, 仅能做定性分析；荧光定量FQ-PCR是在逆转录后的非对称PCR产物中添加荧光基团, 利用荧光信号实时监测整个PCR进程, 能准确定量待检模板的拷贝数, 最大程度降低PCR产物交叉感染而引起的假阳性, 在早期监测中应用较为普遍［6］。本次研究结果显示, 67例丙肝患者行HCV RNA检测, FQ-PCR阳性检出率为64.18%, 而RTPCR检测阳性率仅为46.27%, 可知FQ-PCR检测HCV RNA的敏感性相较RT-PCR检测明显较高, 差异具有统计学意义(P＜0.05), 说明FQ-PCR检测具有减少PCR产物污染、准确定量进而提高检出水平的优点, 这和丁雪莲［7］的研究结果基本吻合；50例肝正常人HCV RNA检测中两种检测的特异性均较高, FQ-PCR检测均为阴性, 但RT-PCR检测结果中出现了3例显示为阳性, 本研究分析认为这可能和定性PCR循环检测的范围存在不足有关导致假阳性出现, 也有研究［8］认为FQ-PCR检测为阴性时不能排除该患者病毒血症水平低于检测极限的可能性, 检测结果与病毒感染的潜伏和活跃期有关, 因此临床检测中可多次检测, 尽量避免漏诊、误诊。

综上所述, FQ-PCR检测丙肝患者HCV RNA具有较高的敏感性和特异性, 临床检测中结合RT-PCR检测结果对避免漏诊误诊具有较大临床价值。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.03.014

2015-09-28］

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