五味降脂胶囊的质量标准研究

温瑗源++孟令琨++陈宏斌+++樊湘泽++王媛++王德友

[摘要] 目的 建立五味降脂胶囊的质量控制标准。 方法 采用薄层色谱法对五味降脂胶囊中的五味子、白术等药材进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定五味降脂胶囊中的橙黄决明素含量。 结果 薄层色谱法鉴别斑点清晰，专属性、重现性强；橙黄决明素在0.179～1.792 μg范围内具有良好的线性关系。橙黄决明素平均加样回收率为98.68%，RSD为1.91%。 结论 本研究建立的五味降脂胶囊定性鉴别与定量分析方法简便，重现性和精密度良好。

[关键词] 质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法；五味降脂胶囊

[中图分类号] R927.11 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）01（a）-0008-03

五味降脂胶囊由五味子、决明子、当归、白术、山楂等多味中药材经提取加工而成，方中决明子味苦、甘、咸，可润肠通便，降脂明目，是治疗便秘、高血脂、高血压的常用中药材[1-2]，现代药理实验显示，决明子中富含大量的橙黄决明素、大黄素、大黄酚等成分，能够有效抑制血清胆固醇的升高及主动脉粥样硬化斑块的形成[3-4]。在五味降脂胶囊的工艺中，五味子、决明子以乙醇加热回流提取，药渣与麦冬、当归等药材共同水煎。本研究在前期研究的基础上，采用薄层色谱法对制剂中的五味子、白术等药材分别进行定性鉴别，并针对醇提部分工艺中决明子的含量进行测定研究，旨在为控制五味降脂胶囊质量提供可靠依据。

1 仪器与试剂

1.1 试剂

五味降脂胶囊（长春中医药大学中药药理实验室）；五味子对照药材（中国食品药品检定所研究院，批号：120922～201108）；白术对照药材（中国食品药品检定所研究院，批号：120945～201309）；橙黄决明素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：121093～201303）；乙腈（色谱纯，天津市康科德科技有限公司）；纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）；其余试剂为分析纯。

1.2 仪器

TU-1810型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；Prominenece UFLC高效液相色谱仪（日本岛津公司）；TP-150超声波清洗机（天鹏电子新技术有限公司）；RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；BP211D塞多利斯分析天平（塞多利斯公司）；真空干燥箱（上海一恒实验仪器总厂）。

2 方法与结果

2.1 五味子的薄层色谱鉴别

取本品5 g，研细，加三氯甲烷30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1 ml使其溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。为增加鉴别的专属性，取去除五味子的模拟处方制成五味子阴性样品，再按五味子供试品溶液的制备方法依法制成五味子阴性对照品溶液。按照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（60～90℃）-甲酸乙酯-甲酸（29∶10∶2）的上层溶液为展开剂进行展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色斑点（图1）。

2.2 白术的薄层色谱鉴别

取本品5 g，研细，加环己烷20 ml，超声处理15 min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1 ml使其溶解，作为供试品溶液。另取白术对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。为增加鉴别的专属性，取去除白术的模拟处方制成白术阴性样品，再按白术供试品溶液的制备方法制成白术阴性对照品溶液。按照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述3种溶液各3 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）为展开剂进行展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸乙醇（1∶9）溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色的斑点，且阴性无干扰（图2）。

2.3 溶液制备及色谱条件

2.3.1 对照品溶液的制备 取橙黄决明素对照品，精密称定，加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液制成每1 ml含89 μg的溶液，即得。

2.3.2 供试品溶液的制备 取本品粉末约5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加乙醇20 ml，超声处理30 min，取出，放冷，再次称定重量，并用乙醇补足缺失重量，滤过，精密量取续滤液10 ml，蒸干，加稀盐酸30 ml，水浴加热水解60 min，冷却后，三氯甲烷萃取3次，20 ml/次，合并三氯甲烷层，蒸干，残渣加2 ml无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液溶解，并于10 ml容量瓶中定容，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得[5-8]。

2.3.3 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（75∶25），检测波长为284 nm。流速：1 ml/min，进样量：10 μl。柱温：30℃。

2.4 标准曲线制备

精密吸取橙黄决明素对照品溶液0.179、0.441、0.891、1.344、1.792 μg注入液相色谱仪，以峰面积积分值为纵坐标，以进样量为横坐标，绘制标准曲线。线性回归方程为：y=158216x+403.16，r=0.9996。结果显示，线性范围0.179～1.792 μg（表1）。

2.5 精密度试验

精密吸取上述对照品溶液10 μl，重复进样6次，测定橙黄决明素峰面积。结果显示，RSD值为2.08%，提示仪器、方法的精密度良好。

2.6 稳定性试验

取上述橙黄决明素对照品溶液及供试品溶液，分别于0、3、6、9、12 h测定其橙黄决明素峰面积，计算RSD分别为0.48%、2.08%，结果显示，两者在12 h内稳定性较好。

2.7 重复性试验

取6份五味降脂胶囊按上述方法分别制备6份供试品溶液，按含量测定方法测定橙黄决明素的含量。结果显示，RSD为1.59%，提示该含量测定方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

取已知含量供试品9份，分别精密加入浓度为0.89 μg/ml的对照品溶液，注入液相色谱仪测定，计算加样回收率。结果显示，平均回收率为98.68%，RSD为1.91%（表2）。

2.9 橙黄决明素的含量测定

取3批样品分别制得供试品溶液，按上述方法进行含量测定，采用峰面积比较法计算橙黄决明素含量，结果显示，本品含橙黄决明素>0.244 mg/g（表3）。

3 讨论

中医学认为高脂血症是由于浊邪内阻，气血瘀滞，络脉不通所致，故治疗多采用通便降脂、活血化瘀类中药[9-11]。临床实践证明，口服中药制剂不但能够有效治疗高脂血症，而且能够延缓病情的发展[13-14]。五味降脂胶囊具有清肠降脂、舒心活络作用，用于高脂血症的辅助治疗，临床疗效确切。本研究依据《中国药典》2010版一部决明子项下的要求，并查阅大量文献[15-18]，通过UV-1700紫外-可见分光光度计在波长200～600 nm范围内对橙黄决明素的70%乙醇溶液进行紫外波长扫描，得紫外吸收光谱，结果显示，橙黄决明素在284 nm处有最大吸收，与其他组分能达到较好分离，故将其检测波长选择在284 nm处。在橙黄决明素测定的流动相选择上曾试用甲醇-0.1%磷酸水溶液（70∶30），乙腈-0.1%磷酸水溶液（75∶25）等多种[19-20]，结果显示，以甲醇-0.1%磷酸水溶液（70∶30）作为流动相，供试品色谱中橙黄决明素峰与杂质峰分离效果不佳，存在杂质峰干扰，且保留时间过长；以乙腈-0.1%磷酸水溶液（75∶25）作为流动相，结果显示，供试品色谱中橙黄决明素峰型对称，且组分分离度较好，与杂质峰分离良好，故最终确定将乙腈-0.1%磷酸水溶液（75∶25）作为测定橙黄决明素含量方法的流动相。

综上所述，本研究所建立的定性及定量方法操作简便，有良好的重复性和精密度，为五味降脂胶囊的质量控制提供了可靠依据。

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（收稿日期：2015-09-18 本文编辑：祁海文）