肝细胞肝癌组织中CD90表达与临床病理参数的关系

周焕城， 彭广福， 宋　越， 张彩云， 王　捷

(1中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科, 广州　510000； 2梅州市人民医院肝胆外科, 广东　梅州　514000)



肝细胞肝癌组织中CD90表达与临床病理参数的关系

周焕城1， 彭广福2， 宋越2， 张彩云2， 王捷1

(1中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科, 广州510000；2梅州市人民医院肝胆外科, 广东梅州514000)

摘要：目的探讨肝细胞肝癌(HCC)患者组织中CD90的表达与临床病理参数的关系，为HCC患者的临床治疗提供参考。方法选择2010年1月-2012年12月中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科住院并进行肝癌切除的HCC患者共80例，收集患者HCC组织(HCC组)、癌旁组织(癌旁组)，并收集40例同时期就诊的肝外伤患者正常肝脏组织(对照组)，分析不同组织中CD90表达与临床病理参数的关系。结果3组CD90阳性表达总体差异有统计学意义(χ2=120.341，P<0.05)。HCC组和癌旁组CD90表达明显高于对照组，差异有统计学意义(Z=-8.519，-3.545，P<0.05)。HCC组CD90表达明显高于癌旁组，差异有统计学意义(Z=-8.958，P<0.05)。CD90在HCC组织中的表达与肿瘤大小、肝内转移、TMN分期和病理分级有关(Z=-2.204、-2.728、-3.085、-4.068，P<0.05)。CD90阳性患者1年生存率与2年生存率分别为87.67%和63.01%，CD90阴性患者分别为85.71%和57.14%，差异均无统计学意义(χ2= 1.421，P= 0.233；χ2= 0.094，P=0.759)。结论CD90在HCC组织和癌旁组织中高表达，且其表达与临床病理参数紧密相关，可为HCC患者诊断、治疗、预后评估提供参考。

关键词：肝细胞肝癌； 干细胞标记物； CD90

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是常见的恶性肿瘤之一，是恶性肿瘤中仅次于胃癌和食道癌的第3位致死因素[1]。有研究报道，全世界每年HCC新发病例约60万，50%以上的新发病例在中国[2]。我国每年约11万人死于HCC，占全世界死亡人数的45%。肝癌初期症状不明显，晚期主要表现为乏力、消瘦、肝痛、黄疸、腹水等症状。HCC发病隐匿、转移早，晚期患者因癌细胞扩散而治愈率较低[3]。HCC发病的细胞学机制尚不清楚，随着干细胞研究的发展，提出了肿瘤干细胞学说，对肿瘤发生、发展、转移等起了重要作用。研究表明，40%的HCC由干细胞和始祖细胞分化而来，CD90是锚定于糖基磷脂酰肌醇的糖蛋白，在内皮细胞、胸腺细胞、神经细胞和成纤维细胞等多种细胞中表达[4-5]。CD90是HCC重要的干细胞抗原标记物，在HCC发病和转移中起重要作用[6-7]。本研究旨在探讨CD90在肝癌组织、癌旁硬化组织和正常肝组织中的表达及其与临床病理参数的关系，为HCC患者的临床治疗提供参考。

1资料与方法

1.1一般资料选择2010年1月-2012年12月中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科住院并进行肝癌切除的HCC患者共80例，其中男性63例，女性17例；年龄25~76岁，平均(54.37±9.81)岁；病程2~19个月，平均(10.42±3.95)个月。患者均为首诊HCC患者，术前未进行相关治疗。HCC的诊断参照中国抗癌协会肝癌专业委员会修订的肝癌诊断标准，排除存在严重的心、脑、肾等系统疾病及合并其他系统肿瘤的患者。术中收集患者HCC组织(HCC组)、癌旁组织(癌旁组)，并收集40例同时期就诊的肝外伤患者正常肝脏组织(对照组)。所有患者的随访日期截止至2014年12月。

1.2CD90表达的测定采用免疫组化法检测CD90表达。CD90 P-V法免疫组化检测试剂盒购于上海欣裕生物科技有限公司，CD90鼠抗人单克隆抗体购于北京博奥森科技公司，CD90抗体稀释度为1∶100，操作步骤严格按照说明书进行。将组织石蜡标本切片，恒温烤片，脱蜡，梯度乙醇脱水，抗原修复；滴加过氧化氢(3%)、一抗4°C过液、滴加二抗，DAB显色；染色满意后，自来水冲洗，染色终止；苏木素染色(3 min)，自来水冲洗；盐酸乙醇(1%)适度分化，温水反蓝 ；晾干切片，封片。显微镜下，每张切片随机选择5个高倍视野(×400)，每个视野选择100个细胞，计算阳性细胞率，并进行评分：0分：阳性细胞率为0；1分：阳性细胞率≤25%；2分：26%<阳性细胞率≤50%；3分：50%<阳性细胞率≤75%；4分：阳性细胞率>75%；进一步按照多数阳性细胞染色强度进行评分：0分：无显色；1分：浅棕黄色；2分：棕黄色；3分：棕褐色。将上述2项评分相加进行总评分：0分为阴性(-)，2~3分为弱阳性(+)，4~5分为中度阳性(++)，6~7分为强阳性(+++)。

1.3统计学处理采用SPSS18.0统计软件对数据进行统计学分析。计数资料采用百分比表示，两组间差异性比较采用Mann-Whitney U检验，多组间差异性比较采用Kruskal-Wallis H检验,检验水准α=0.05。

2结果

2.1不同组别CD90阳性表达比较3组CD90阳性表达总体差异有统计学意义(χ2=120.341，P<0.05)。HCC组和癌旁组CD90表达明显高于对照组，差异有统计学意义(Z=-8.519，-3.545，P<0.05)。HCC组CD90表达明显高于癌旁组，差异有统计学意义(Z=-8.958，P<0.05)(表1、图1)。

2.2CD90阳性表达与临床病理参数的关系CD90在HCC组织中的阳性表达与患者性别、年龄、AFP、HBsAg和HBeAg无关(Z=-0.074、-0.171、-0.128、-1.079、-1.485，P>0.05)，与肿瘤大小、肝内转移、TMN分期和病理分级有关(Z=-2.204、-2.728、-3.085、-4.068，P<0.05)(表2)。

2.3CD90表达与患者预后的关系所有患者中位随访时间36个月，CD90阳性患者1年生存率与2年生存率分别为87.67%和63.01%，CD90阴性患者分别为85.71%和57.14%，差异均无统计学意义(χ2= 1.421，P= 0.233；χ2= 0.094，P=0.759)。

表1　不同组别CD90阳性表达比较/例(%)

注：与对照组比较，*P<0.05；与癌旁组比较，△P<0.05。

图1　CD90蛋白免疫组织化学结果

项目例数CD90表达-++++++Z值P值性别 男635212512-0.0740.941 女172564年龄/岁 ≥50536171911-0.1710.864 <502729115肿瘤大小/cm <52341063-2.2040.028 ≥5575132514肝内转移 有50519242-2.7280.006 无3037614TMN分期 Ⅰ~Ⅱ33514113-3.0850.002 Ⅲ~Ⅳ47426152病理分级 Ⅰ~Ⅱ36419132-4.0680.000 Ⅲ~Ⅳ44231560AFP/(μg/L) <40033211155-0.1280.898 ≥400475161313HBsAg -1932113-1.0790.28 +61526219HBeAg -45615177-1.4850.138 +3538159

3讨论

干细胞是没有特定功能的不成熟细胞，能够多分化且保持自我更新的能力[8]。成年人干细胞多储存在骨髓中，但相关研究认为，干细胞也可存在于肿瘤组织[9]。随着干细胞研究的发展，提出了肿瘤干细胞假设，肿瘤干细胞可能源于某些具有干细胞特性的肿瘤细胞或者突变的正常干细胞[10]。CD90是一种细胞表面糖蛋白，在内皮细胞、胸腺细胞、神经细胞和成纤维细胞等多种细胞中表达，与细胞增殖分化、机体免疫反应、细胞因子释放等过程紧密相关[11]。相关研究发现，CD90和CD133在恶性肿瘤干细胞和鼠乳腺癌治疗干细胞表达；在肺癌的研究中，也发现了CD90的表达；CD90还在间质干细胞、肝干细胞/肝祖细胞等表达，CD90可能是肿瘤干细胞的表面标记物[12]。肝癌相关研究结果发现，HCC患者血清中可检测到CD90阳性细胞；人低分化原发性肝癌细胞中均发现CD90的表达；HCC患者肝脏中，CD90在肌成纤维细胞、肝脏干细胞、肿瘤基质中表达，认为CD90是HCC干细胞的细胞表面标记，可作为诊断和治疗的靶点[13]。因此，本研究通过比较CD90在肝癌组织、癌旁硬化组织和正常肝组织中的表达与临床病理参数的关系，为HCC患者的临床治疗提供参考。

本研究结果显示，HCC组织、癌旁组织和正常肝组织CD90阳性表达总体差异有统计学意义，HCC组织和癌旁组织的表达明显高于正常肝组织，HCC组织的表达明显高于癌旁组织，与相关研究结果一致[14]，说明正常组织中CD90不表达或者较少表达而未能检测，随着HCC的发生、发展，CD90表达上升，HCC组织中肿瘤干细胞数量增多，进一步促进了HCC的发展。CD90定位于脂质双分子层外侧，其功能异常可能与CD90的异常定位有关，进而参与肿瘤细胞的增殖过程[15]。HCC组织中CD90阳性的表达与肿瘤大小、肝内转移、TMN分期和病理分级有关。肿瘤体积增大，CD90表达增强，可能与CD90阳性细胞的增多、细胞分裂加快等因素有关[16]。肝内转移HCC患者CD90表达较强，说明CD90可能参与肿瘤细胞血行转移过程，在肿瘤细胞的扩散和肿瘤组织的发展中发挥作用，与Yamashita等[17]研究结果一致。TMN分期越晚、病理分级越低的HCC组织CD90表达越强，说明HCC患者病情越严重，肿瘤干细胞数量越多，患者预后越差。但本研究结果未表现出CD90的表达与患者生存期的显著关系，CD90阳性细胞是否是肝癌肝细胞有待进一步研究。

本研究通过探讨HCC组织中CD90表达与临床病理特征和患者预后的关系，判断CD90作为HCC干细胞标记物的可能性，为HCC的靶向治疗和预后评估提供新的途径，同时也验证了肿瘤干细胞学说在HCC组织中的适应性。肿瘤干细胞相关标志物的共同表达，如CD90和CD44细胞群、CD90和CD133等表达的相关性有待进一步探讨。

综上所述，CD90在HCC组织和癌旁组织中高表达，且其表达与临床病理参数紧密相关，可为HCC患者诊断、治疗、预后评估提供参考。

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Relationship between clinical pathological parameters and expression of CD90 in hepatocellular carcinoma

ZHOU Huancheng1, PENG Guangfu2, SONG Yue2, ZHANG Caiyun2, WANG Jie1

(1DepartmentofHepatobiliarySurgery,SunYixianMemorialHospitalofZhongshanUniversity,

Guangzhou510000,China;2DepartmentofHepatobiliarySurgery,MeizhouPeople′sHospital,

Meizhou514000,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the relationship between clinical pathological parameters and expression of CD90 in hepatocellular carcinoma, and provide evidence for the treatment of HCC patients. Methods80 HCC patients were selected with excision of liver cancer from department of hepatobiliary surgery, Sun Yixian Memorial Hospital of Zhongshan University from January 2010 to December 2012, and their HCC cancer tissues (HCC group), para-carcinoma tissues (para-carcinoma group) were collected. 40 cases of normal liver tissues of liver trauma patients were collected (control group), The relationship between clinical pathological parameters and expression of CD90 in different tissues was analyzed. ResultsPositive expression of CD90 was statistically significant between three groups (χ2=120.341; P<0.05). Expression of CD90 in HCC group and para-carcinoma group were higher than that in control group, the difference was statistically significant (Z=-8.519, -3.545; P<0.05). Expression of CD90 in HCC group was higher than that in para-carcinoma group, the difference was statistically significant (Z=-8.958; P<0.05). Expression of CD90 in HCC cancer tissues was related with tumor size, intrahepatic metastasis, TMN staging and pathologic grading (Z=-2.204, -2.728, -3.085, -4.068; P<0.05). 1 year survival rate and 2 years survival rate of CD90 positive patients were 87.67% , 63.01%, the difference were not statistically significant (χ2=1.421, P=0.233), and negative patients were 85.71%, 57.14% respectively, the difference were not statistically significan (χ2=0.094, P=0.759). ConclusionThe expression of CD90 increased in cancer tissues and para-carcinoma tissues, and was closely related with clinical pathological parameters, which can provide reference for diagnosis, treatment and prognosis evaluation of HCC patients.

Keywords:hepatocellular carcinoma; stem cell markers; CD90

[收稿日期：2015-06-08]

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2016.02.019

中图分类号：R735.7

文献标识码：A

文章编号：1009-5551(2016)02-0203-04

作者简介：周焕城(1981-)，男，博士，主治医师，研究方向：肝细胞癌分子机制。通信作者： 王捷，男，博士，主任医师，研究方向：肝细胞癌分子机制,E-mail:9834441262@qq.com。

基金项目：广东省自然科学基金博士启动项目(S2012040007235)