慢性HBV感染不同免疫状态与外周血T、B细胞亚群和NK细胞的相关性分析*



慢性HBV感染不同免疫状态与外周血T、B细胞亚群和NK细胞的相关性分析*

邹剑

(深圳市公安边防支队卫生队检验科，广东深圳518045)

摘要：目的探讨慢性HBV感染不同免疫状态与外周血T、B细胞亚群和NK细胞的相关性。方法选取2013年3月-2014年12月我院收治的慢性HBV患者118例，根据不同免疫状态分为免疫耐受组(39例)、免疫清除组(37例)、免疫不全组(42例)，并选取同期体检中心健康人35例作为对照组。比较不同组别中T、B细胞亚群和NK细胞相关性。结果四组CD3+细胞百分比和绝对数比较无统计学意义(P>0.05)。各组CD4+细胞及免疫清除组CD8+细胞、NK细胞、B细胞百分比和绝对数与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫耐受组和免疫不全组CD4+细胞、CD8+细胞、NK细胞百分比与免疫清除组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫耐受组和免疫不全组CD4+细胞及NK细胞绝对数与免疫清除组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性HBV感染者细胞免疫和淋巴细胞亚群处于紊乱状态，外周血T、B细胞亚群和NK细胞水平检测对患者免疫功能、病情评估、治疗有重要价值。

关键词：慢性乙肝；免疫；T淋巴细胞；NK细胞；B淋巴细胞

慢性HBV感染为世界公共卫生问题，我国为感染大国，流行病率约为7.2%[1]。HBV属嗜肝DNA病毒科，具有较强抵抗能力，室温下可存活7d，在低温冰箱中可存活数年。目前临床无治疗特效药，主要以抗病毒为主，机体免疫功能状况在慢性HBV治疗中发挥重要作用，因此治疗进展取决于病毒强度和机体免疫功能[2]。2011年国际肝病协会将慢性HBV感染自然过程划分为免疫耐受期、免疫清除期、免疫不全期，不同感染时期机体免疫功能不同[3]。为探究慢性HBV感染不同免疫状态与外周T、B细胞亚群及NK细胞相关性，笔者研究如下。

1资料与方法

1.1一般资料选取2013年3月-2014年12月我院收治慢性HBV患者118例，根据不同免疫状态分为免疫耐受组(39例)、免疫清除组(37例)、免疫不全组(42例)，并选取同期体检中心健康人35例作为对照组。四组患者在性别构成比、年龄上比较差异无统计学意义(P>0.05)，所有患者均自愿参加本次研究，并签署知情同意书。

1.2入组标准(1)患者入院后根据病史、临床症状，结合实验室检查均明确诊断为慢性HBV感染，并根据感染状态明确分组。(2)排除合并有其它类型肝炎患者。(3)排除近期1月内有使用免疫抑制剂、核苷酸类药物、免疫调节剂患者。(4)排除进展为肝癌，合并有严重心肺肾脑障碍患者。(5)排除合并有重症慢性疾病，如高血压、糖尿病患者。

1.3方法检测4组研究对象CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞、NK细胞及B细胞水平。肝功能检测采用AEROSET全自动生化仪器检测。HBV血清标记物采用分辨荧光分析法检测。HBV-DNA采用实时荧光探针定量聚合酶链反应方法检测。外周淋巴细胞采用荧光标记流式细胞技术，抽取研究对象静脉血，采用四色淋巴细胞亚群试剂检测。血细胞采用全血自动分析仪检测。T、B淋巴细胞亚群及NK细胞计算=外周细胞淋巴细胞绝对数×T、B淋巴细胞亚群及NK下拨百分比[4]。

2结果

2.1四组CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞、NK细胞及B细胞百分比比较见表1。

组别例数CD3+细胞CD4+细胞CD8+细胞NK细胞B细胞免疫耐受组3971.2±8.034.5±5.1ab27.6±5.8ab13.2±4.6b12.7±4.0免疫清除组3770.6±9.530.6±5.2a32.3±6.2a9.6±4.1a15.8±3.7a免疫不全组4269.6±9.435.5±4.2ab28.2±5.9ab12.9±3.8b13.1±3.2对照组3572.1±8.240.2±6.723.7±5.714.4±5.511.6±4.0

注:a与对照组比较P<0.05，b与免疫清除组比较P<0.05。

2.2四组CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞、NK细胞及B细胞绝对数比较见表2。

组别例数CD3+细胞CD4+细胞CD8+细胞NK细胞B细胞免疫耐受组391460±118762±197ab581±158280±65b246±55免疫清除组371429±311581±193a591±135a211±55a301±65a免疫不全组421481±290707±182ab574±166261±61b224±51对照组351571±419960±189556±174322±67231±54

注:a与对照组比较P<0.05，b与免疫清除组比较P<0.05。

3讨论

慢性HBV感染自然分期分为免疫耐受期、免疫清除期、免疫不全期，免疫耐受期为HBV携带者初期表现，表现为HBsAg和HBeAg阳性，HBV-DBA阳性，但肝功能正常或有轻度炎症反应、慢性肝纤维化进展，可持续数年甚至十年[5]。免疫清除期为慢性HBV感染者症状表现开始期，肝功能开始出现明显异常，伴有丙氨酸转移酶(ALT)间歇性或持续升高，肝组织出现中、重度炎症反应，肝纤维化发展迅速，严重者可发生为肝硬化或肝衰竭[6]。免疫不全期又称为非活动期，表现为HBsAg阴性而抗-HBeAg阳性，HBV-DNA水平持续降低或检测不出，肝组织炎症反应较轻，ALT水平正常，为HBV感染通过获得性免疫控制结果[7]。

研究指出，HBV感染者肝细胞并不直接受HBV病毒损伤，而是病毒引起机体免疫反应导致宿主细胞免疫受损，而细胞免疫为导致宿主细胞损伤主要发生机制。T淋巴细胞为机体免疫反应主要主导细胞，其中CD3+为总T细胞。根据T细胞表现功能不同可分为CD4+和CD8+两个亚群，CD4+为辅助T细胞，可诱导和辅助发生免疫反应，并能分泌白介素2(IL-2)、干扰素等炎症因子，CD8+细胞免疫系统中清除病毒主要效应细胞。机体内各T淋巴细胞相互辅助、相互制约发挥免疫功能，如免疫平衡发生紊乱则可降低患者免疫功能。本次研究得出，各组间CD3+细胞百分比和绝对数比较差异无统计学意义(P>0.05)，分析指出，慢性HBV感染患者在免疫过程中由CD4+和CD8+细胞直接参与反应，并不影响CD3+水平。本次研究得出，各组CD4+细胞百分比和绝对数与对照组比较均降低，而CD8+水平升高。研究指出，免疫反应过程中CD4+遭受破坏而降低，提示机体免疫功能不足，不能清除游离HBV病毒，而CD8+细胞升高可进一步抑制CCD4+细胞生成，降低免疫功能并增强对肝细胞损伤。B细胞为人体体液免疫中主要细胞，本次研究得出，免疫清除组中B细胞百分比和绝对数均高于对照组。HBV感染人体后，可激发免疫系统促使B细胞转化为浆细胞，产生相应抗体，以发挥免疫和保护功能。NK细胞为人体天然免疫主要细胞，同时调节获得性免疫细胞，NK细胞通过CD8+细胞途径杀伤病毒细胞，并可通过死亡受体系统诱导细胞凋亡，将受病毒感染细胞清除，还能分泌大量炎症细胞和免疫调节因子发挥抗病毒作用。本次研究中，免疫清除组中NK细胞百分比和绝对数低于对照组，且免疫耐受组和免疫不全组NK细胞百分比和绝对数相对降低。分析指出，NK细胞在慢性HBV感染者体内活性降低，并和慢性程度和病情严重程度有一定相关性。

综上所述，慢性HBV感染者体内淋巴细胞亚群失去平衡，临床中通过检测患者外周淋巴细胞亚群水平，可评估患者病情、进展时期，具有一定临床价值。

参考文献：

[1]王娟华,顾锡炳,朱银芳，等.慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与滤泡辅助性T淋巴细胞的关系和意义[J].中华实验和临床病毒学杂志,2013,27(5):351-353.

[2]王姣,邓洪,谢冬英，等.HBV特异性CTLs表面CD244和PD-1共表达与慢性乙型肝炎严重程度的相关性[J].中国病理生理杂志,2012,28(12):2254-2260.

[3]刘莲,王慰,黄艳，等.HBV携带者外周血中辅助性T淋巴细胞1/辅助性T淋巴细胞2相关细胞因子的研究[J].中西医结合肝病杂志,2014,24(6):336-337,353.

[4]王栋,顾锡炳,朱银芳，等.拉米夫定治疗失代偿乙型肝炎肝硬化的疗效与HBV基因型及细胞毒性T淋巴细胞的关系[J].中华实验和临床病毒学杂志,2013,27(4):283-285.

[5]谢冬英,刘琼,谢俊强，等.乙型肝炎病毒特异性CD8+T淋巴细胞表达T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3和程序性死亡受体-1的水平及其与肝脏炎症活动度的相关性[J].中华传染病杂志,2013,31(5):285-289.

[6]姚思敏,刘映霞,李晓鹤，等.慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞及相关转录因子表达的检测[J].中华实验和临床病毒学杂志,2015,29(1):2-4.

[7]华忠,顾锡炳,汤琴，等.慢性乙型肝炎患者不同HBV DNA水平诱导细胞免疫不同及其意义[J].实用医学杂志,2013,29(22):3718-3720.

收稿日期(2015-10-12)

doi:10.3969/j.issn.1004-7115.2016.01.030

中图分类号：R446.6

文献标识码：B

文章编号：1004-7115(2016)01-0078-02

作者简介：*邹剑，主要从事临床检验工作。