注射用单磷酸阿糖腺苷细菌内毒素检查法的可行性研究

李凤华，李凤义



注射用单磷酸阿糖腺苷细菌内毒素检查法的可行性研究

李凤华，李凤义

[摘要]目的：建立注射用单磷酸阿糖腺苷的细菌内毒素检测方法。方法：按《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查方法，考察注射用单磷酸阿糖腺苷对细菌内毒素检查法的干扰作用。结果：当注射用单磷酸阿糖腺苷稀释至25.0 mg/ml及以下时，对细菌内毒素检查法无干扰作用。结论：细菌内毒素检查法可用于注射用单磷酸阿糖腺苷的质量监控。

[关键词]注射用单磷酸阿糖腺苷； 细菌内毒素检查法； 干扰试验

注射用单磷酸阿糖腺苷为抗脱氧核糖核酸(DNA)病毒药，其药理作用是与病毒的脱氧核糖核酸聚合酶结合，使其活性降低而抑制DNA合成；主要用于治疗疱疹病毒所致的口炎、皮炎、脑炎及巨细胞病毒感染。为了简便、快捷的检查制剂的质量，本文参照《中国药典》2010年版附录XIE的细菌内毒素检查法[1]，通过干扰试验，探讨注射用单磷酸阿糖腺苷细菌内毒素检查法的可行性，现报告如下。

1实验材料

注射用单磷酸阿糖腺苷(河南辅仁怀庆堂制药有限公司，规格：0.1 g/支，批号：1301054，1302034，1304295，1306155)；鲎试剂(TAL，湛江安度斯生物有限公司，规格：0.1 ml/支,批号：1207141，标示灵敏度λb为0.25 EU/ml；福州新北生化工业有限公司，规格：0.1 ml/支，批号：12030212，标示灵敏度λb为0.25 EU/ml)；细菌内毒素工作标准品(CSE，中国药品生物制品检定所，批号：150601-200963，效价120 EU/支)；细菌内毒素检查用水(BET，湛江安度斯生物有限公司，批号：1207150，规格：5 ml/支)。实验用玻璃试管、刻度吸管等均经250℃干烤1 h以上去除热原。

2方法与结果

2.1鲎试剂灵敏度的复核按《中国药典》2010年版二部附录的鲎试剂灵敏度复核试验方法[1]进行复核实验，实验结果见表1。由表1结果可知，批号1207141鲎试剂灵敏度测定值(λC)为0.25EU/ml，批号12030212鲎试剂灵敏度测定值(λC)为0.21 EU/ml，两者λC均在0.5~2.0λb之间,符合规定，可用于实验，并以标示灵敏度为该批TAL灵敏度。见表1。

表1　鲎试剂灵敏度复核结果 (EU/ml)

注：λC=antilg(∑X/4),X-反应终点内毒素浓度的对数值。

2.2供试品细菌内毒素理论限值(L)的确定L=K/M,式中K为按规定的给药途径，人用每千克体重每小时可接受的最大内毒素剂量，注射剂的K=5EU·kg-1·h-1,M为人用每千克体重每小时可接受的最大供试品剂量，参照注射用单磷酸阿糖腺苷说明书，成人按体重一次5~10 mg/kg,每日1次，用药时间不足1 h的按1 h算，那么注射用单磷酸阿糖腺苷的M应为10 mg·kg-1·h-1,本品的细菌内毒素的理论限值L=K/M=5/10=0.5(EU/mg)。

2.3供试品最小有效稀释浓度(C)的确定按照《中国药典》2010年版细菌内毒素检查法的规定，MVD=CL/λ,目前用于药品检验的凝胶法的鲎试剂灵敏度一般在0.03~0.5 EU/ml，本试验选用0.25 EU/ml的鲎试剂，本品为注射用粉末，MVD=1，则C=λ/L,L为0.5 EU/mg，则最小有效稀释浓度C=0.25/0.5=0.5 mg/ml)；本品说明书的用法[2]是临用前每瓶加2 ml灭菌生理盐水溶解后肌肉注射，可以将此浓度溶液视为原液，浓度为50 mg/ml，则本品的最大有效稀释倍数为100倍。

2.4供试品干扰预实验[2-3]为确定供试品对细菌内毒素检查法不干扰的浓度，首先进行干扰预实验。取本品，用细菌内毒素检查用水溶解，得浓度为50 mg/ml的溶液，作为原液，用BET水将供试品原液按2，10，50，100倍进行稀释，制得25.0，5.0，1.0，0.5 mg/ml 4个浓度梯度的溶液,将上述原液和各稀释度溶液记为NPC；用上述原液和各稀释度溶液作溶剂，分别溶解并稀释CSE，制得5个浓度中细菌内毒素含量均为2.0 λ(0.5 EU/ml)的注射用单磷酸阿糖腺苷溶液，记为PPC。

取灵敏度0.25 EU/ml两个不同厂家的鲎试剂，加入0.1 mlBET水溶解后，分别与上述的NPC和PPC溶液各0.1 ml进行反应，每一浓度重复2管，同时平行做阳性对照管PC和阴性对照管NC各2管，结果两个厂家的鲎试剂测定结果一致，当样品稀释至25.0 mg/ml及以下浓度时，对鲎试剂无干扰作用。

2.5供试品干扰试验取供试品，用BET水溶解并稀释成25.0、5.0 mg/ml的稀释液，分别用此稀释液和BET水将同一支细菌内毒素工作标准品稀释成0.5，0.25，0.125，0.0625 ml/ml的溶液，分别与两个厂家的鲎试剂(λ均为0.25 EU/ml)进行反应。每个浓度平行做4管，同时以BET水和供试品25.0，5.0 mg/ml的稀释液作阴性对照，试验结果见表2。由表2结果可得出，当供试品稀释至浓度为25.0 mg/ml及以下的溶液时，Et值均在0.5Es～2.0 Es之间，表明两批供试品稀释至25.0 mg/ml及以下的浓度时，均不干扰试验。

表2　样品干扰试验结果 (λ=0.25 EU/ml)

注：ES=antilg(∑XS/4)，Et=antilg(∑Xt/4), XS-细菌内毒素检查用水反应终点内毒素浓度的对数值，Xt-供试品溶液或其稀释液制成的内毒素溶液反应终点内毒素浓度的对数值。

2.6供试品细菌内毒素检查试验根据2.5项下的结果，选用λ为0.25 EU/ml的鲎试剂进行试验。取4批供试品，用BET水溶解并稀释至25.0 mg/ml，分别用两个厂家的鲎试剂依法检查，并增设(2λ)供试品阳性对照管。结果供试品和阴性对照管均成阴性反应，供试品阳性管和和阳性对照管均成阳性反应，实验结果成立，4个批号的注射用单磷酸阿糖腺苷细菌内毒素检查符合规定。

3体会

本实验结果表明，当供试品稀释至25.0 mg/ml及以下的浓度时，对鲎试剂的凝集反应无干扰作用，因此细菌内毒素检查法可用于注射用单磷酸阿糖腺苷的质量控制。本法具有快速、简便和灵敏的优点，适合于基层医院药检室对药品质量的监控。若试剂、药品产地更换时，建议重做干扰试验。

[参考文献]

[1]国家药典委员会.中国人民共和国药典[S].2010年版2部.北京：中国医药科技出版社.附录 XIE：99-101．

[2]关恺珍，卢丽霞，梁毅.注射用甲泼尼龙琥珀酸钠的细菌内毒素检查[J].中国实用医药，2009,4(12):84-86．

[3]陈晓玲，厉青，杨玲.注射用甲磺酸加贝酯细菌内毒素检查法验证[J].中国药师，2013,16(12):1940-1941．

[作者单位] 安徽省和县人民医院 药剂科，238200

收稿日期：(2015-06-07)

[中图分类号]R 969.4

[文献标识码]A

[文章编号]1008-7044(2016)01-0106-03

DOI：10.14126/j.cnki.1008-7044.2016.01.050

[作者简介]李凤华(1965-)，男，副主任药师，大学。