大王棕内生真菌次级代谢产物的研究

王忠,罗都强

(河北大学药物化学与分子诊断教育部重点实验室，河北 保定 071002)



大王棕内生真菌次级代谢产物的研究

王忠,罗都强

(河北大学药物化学与分子诊断教育部重点实验室，河北 保定 071002)

摘要：通过高效液相色谱法，正相硅胶柱色谱法、凝胶柱色谱法等分离方法对大王棕内生真菌的次级代谢产物进行分离纯化，再应用NMR和MS等现代波谱分析方法对其进行结构鉴定，从中首次分离鉴定了6个化合物，分别为1’, 2’-epoxy-3’, 4’-didehydropenicillide.；丁二酸；3β- 羟基- 5α, 8α- 过氧化麦角甾- 6, 22- 二烯；ergosta- 7, 22- dien- 3β, 5α, 6α- triol；3β- 羟基- 麦角甾- 5, 7, 22- 三烯；4- 羟基苯乙酸。

关键词：大王棕；化学成分；结构鉴定

大王棕也称大王椰子，植株很高大，但是种子小的如黄豆一般[1]，大王棕树形及其美观好看，是一种优良的观光绿化乔木，极其合适在西双版纳栽种，其果实富含油脂，可以作为饲料，种子也可以用作鸽子的饲料，叶子可以作为扫把，叶柄可以加工制作成牙签[2]，具有很高的经济价值。

1主要仪器与材料

植物内生真菌Pestalotiopsis briosiana采自海南尖峰大王棕叶子，河北大学药物化学与分子诊断教育部重点实验室菌种库保藏。Bruker AM-600核磁共振仪(德国BRUKER光谱仪器公司)；Bruker Apex-Ultra 7.0 T质谱仪(德国BRUKER光谱仪器公司)；GF254薄层层析硅胶(青岛海洋化工厂)；柱层析硅胶(100-200、200-300目，青岛海洋化工厂)；Sephadex LH-20凝胶(瑞典Amersham Biosciences公司)；

2菌株的发酵

超净工作台紫外照射30 min后，用接种环将植物内生真菌Pestalotiopsis briosiana 的菌种接种到改良土豆液体培养基中(10×300 mL)，将其放入双层摇床在28 ℃，150 r/min恒温培养7天，得到3 L种子液；按照15% (v/v)的接种量，将发酵好的种子液转接至土豆培养基中扩大培养(共150瓶)，室温(26℃)恒湿培养15天，得液体发酵物40L。

3提取及分离纯化

将收集得到的液体发酵物放入萃取桶里，按1倍体积比加入乙酸乙酯40 L，将液体发酵产物搅碎，排除空气，使其完全浸泡在乙酸乙酯中，总共萃取4次，两次浸泡萃取间隔7天，合并萃取液，利用旋转蒸发仪减压蒸馏得浸膏123 g。

将得到123 g浓缩浸膏与123 g柱层析硅胶(60-80目)按1：1的比例充分搅拌混匀，避光室温放置干燥成粉末状，达到使提取物充分吸附于硅胶颗粒上的效果。然后装柱进行加压硅胶(200-300目)柱层析，用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱(100:0，95:5，90:10，60:10，40:10，20:10，10:10(v/v))，得到7个部分(Fr.1-7)。Fr.2(300 mg)经反复硅胶柱层析，Sephadex LH-20凝胶(CHCl3/CH3OH，1:1)过滤和重结晶，得到化合物1 (17 mg)、2(15 mg)、4(19 mg)，Fr.4(200 mg)经反复硅胶柱层析，Sephadex LH-20凝胶(CHCl3/CH3OH，CH3OH)过滤及重结晶，得到化合物3 (7 mg)、5 (11 mg)、6 (13 mg)

4结构鉴定

化合物1，C28H40O6，淡黄色晶体。1H- NMR (600 MHz, CDCl3): δH:6.93 (H, d, 8.4, H-1), 7.36 (H, d, 8.5, H-2), 5.22 (2H, s, H-7), 6.42 (1H, s, H-8), 6.87 (1H, s, H-10), 4.11 (1H, d, 1.4, H-1’), 3.32 (1H, d, 1.4, H-2’), 1.03 (2H, s, H-4’), 1.80 (3H, s, H-5’), 3.98 (3H, s, OMe-4), 2.25 (3H, s, Me-9). 13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δC: 117.56 (d, C-1), 129.42 (d, C-2), 129.85 (s, C-3), 156.22 (s, C-4), 120.98 (s, C-4a), 166.72 (d, C-5)，69.02 (t, C-7), 125.72(s, C-7a), 120.34 (d, C-8), 135.13 (s, C-9), 117.88 (d, C-10), 147.25 (s, C-11), 141.28 (s, C-11a), 151.65 (s, C-12a)，53.43 (d, C-1’), 64.66 (d, C-2’), 140.39 (s, C-3’), 115.25 (t, C-4’), 16.72 (q, C-5’), 63.10 (q, OMe-4), 20.90 (q, Me-9).上述氢谱碳谱数据与文献[3]一致。被命名为 1’, 2’-epoxy-3’, 4’-didehydropenicillide.

化合物2, C4H6O4，白色晶体。1H- NMR (600 MHz, CD3OD):δH: 5.25 (2H, brs, -COOH), 2.70 (4H, m, H-2, 3).13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δC: 174.5 (d, C-1,4), 29.7 (t, C-2,3) ，上述NMR数据与文献[4]对照一致。被命名为丁二酸。

化合物3，C28H44O3，无色针状结晶。13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δC: 33.4 (t, C-1), 28.8 (t, C-2), 65.5 (d, C-3), 38.7 (t, C-4), 83.1 (s, C-5), 136.7 (d, C-6), 130.8 (d, C-7), 79.8 (s, C-8), 51.5 (d, C-9), 37.4 (s, C-10), 23.5 (t, C-11), 39.5 (t, C-12), 44.4 (s, C-13), 51.5 (d, C-14), 20.7 (t, C-15), 28.3 (t, C-16), 56.8 (d,C-17), 13.2 (q, C-18), 18.6 (q, C-19), 39.5 (d, C-20), 20.6 (q, C-21), 135.2 (d, C-22.), 132.4 (d, C-23), 42.7 (d, C-24), 32.8 (d, C-25), 20.5 (q, C-26), 19.4(q, C-27), 18.1 (q, C-28)。上述NMR碳谱数据与文献[5]一致，故鉴定该化合物为3β- 羟基- 5α, 8α- 过氧化麦角甾- 6, 22- 二烯。

化合物4，C28H46O3，无色晶体。13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δC: 31.3 (t, C-1), 21.3 (t, C-2), 67.7 (d, C-3), 39.8 (t, C-4), 76.2 (s, C-5), 73.7(d, C-6), 118.2 (d, C-7), 142.6 (s, C-8), 44.2 (d, C-9), 34.1 (s, C-10), 22.6 (t, C-11), 37.7 (t, C-12), 44.1 (s, C-13), 55.4 (d, C-14), 23.5 (t, C-15), 28.9 (t, C-16), 56.8 (d ,C-17), 12.4 (q, C-18), 12.3 (q, C-19), 39.6 (d, C-20), 18.6 (q, C-21), 136.5 (d, C-22), 132.8 (d, C-23), 41.4 (d, C-24), 17.8 (q, C-25), 33.5 (d, C-26), 19.9 (q, C-27), 19.7 (q, C-28)。上述碳谱数据与文献[6]数据一致，故鉴定该化合物为ergosta- 7, 22- dien- 3β, 5α, 6α- triol。

化合物5，C28H44O，无色针状结晶。13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δC: 38.3 (t, C-1), 32.1 (t, C-2), 70.4 (d, C-3), 40.1 (t, C-4), 139.7 (s, C-5), 119.6 (d, C-6), 116.1 (d, C-7), 141.5 (s, C-8), 46.1 (d, C-9), 37.3 (s, C-10), 21.3 (t, C-11), 39.2 (t, C-12), 42.8 (s, C-13), 54.2 (d, C-14), 23.7 (t, C-15), 28.1 (t, C-16), 56.0 (d, C-17), 12.1 (q, C-18), 16.2 (q, C-19), 40.6 (d, C-20), 21.4 (q, C-21), 135.3 (d, C-22), 132.5 (d, C-23), 42.9 (d, C-24), 32.8 (d, C-25), 20.2 (q, C-26), 19.9 (q, C-27), 17.5 (q, C-28) 。上述碳谱数据与文献[7]一致，故鉴定该化合物为3β- 羟基- 麦角甾- 5, 7, 22- 三烯。

化合物6：C8H8O3，黄色油状。1H-NMR(600 MHz , CD3OD) δH:7.12 (2H, d, J=8.4 Hz,H-2, H-6), 6.65 (2H, d, J=8.4Hz,H-3,H-5), 3.47 (2H,s,H-7);13C-NMR (150MHz, CD3OD)δC: 127.3 (s,C-1), 131.5 (d,C-2,6), 116.5 (d,C-3,5), 157.3 (s,C-4), 41.4 (t,C-7) ,173.5 (s,C-8)。以上MNR数据与文献[8]一致，故鉴定为4- 羟基苯乙酸。

参考文献:

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中图分类号:O629

文献标志码：A

文章编号：1671-1602(2016)08-0031-02

通讯作者简介：罗都强(1968-)，男，河北大学生命科学学院教授，研究方向为植物化学及药物研究开发。

作者简介：王忠(1989-)，男，河北大学硕士研究生，研究方向为天然产物化学。