穿心莲内酯及其磺酸盐抗血小板聚集的实验研究*

段龙士 危玮 尹晓明 谢欢 吴东风 赵诗云#

（1江西省吉安市第一人民医院吉安 343000；2江西省中医药研究院南昌 330046；3江西省人民医院检验科南昌 330006）

穿心莲内酯及其磺酸盐抗血小板聚集的实验研究*

段龙士1危玮2尹晓明3谢欢2吴东风2赵诗云2#

（1江西省吉安市第一人民医院吉安 343000；2江西省中医药研究院南昌 330046；3江西省人民医院检验科南昌 330006）

目的：探讨穿心莲内酯及其磺酸盐（喜炎平针）对血小板聚集的影响。方法：选择穿心莲内酯、穿心莲内酯磺酸盐（喜炎平）用二磷酸腺苷（ADP）作为诱导剂，分别测定大鼠体内给药对血小板5 min内之最大聚集率。结果：大鼠体内穿心莲内酯给药剂量600 mg/kg与空白对照组比较（P＞0.05）无显著性差异，穿心莲内酯磺酸盐体内给药剂量400 mg/kg与空白对照组比较（P＜0.05，P＜0.01），可显著降低5 min之内最大聚集率。结论：穿心莲内酯对SD大鼠体内给药600 mg/kg抗血小板聚集作用不明显，而其磺酸盐400 mg/kg抗血小板聚集的作用明显。

穿心莲内酯；穿心莲内酯磺酸盐；SD大鼠；血小板聚集率

穿心莲为爵床科植物的全草或叶。穿心莲内酯（Andrographolide）为天然植物穿心莲的主要有效成份，分子式C20H3O5，分子量为350.45，具有清热解毒、消炎止痛之功效，对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效，被誉为天然抗生素药物，该品为二萜类内酯化合物，均难溶于水，通常仅能口服给药[1]。穿心莲内酯总磺酸钠，分子式：C20H29O5·NaSO3，它是通过穿心莲内酯与浓硫酸发生酯化、脱水、成盐精制而成的水溶性穿心莲内酯磺酸钠，由于它是在其结构中引入亲水基团，因此其水溶性好，疗效高，具有清热解毒止咳止痢，用于支气管炎、扁桃体炎、细菌性痢疾等，通常为注射用药[2～3]。近年来有研究发现清热抗炎中药同样有抗血小板聚集的作用，有报道用穿心莲内酯能够使心肌梗死的死亡率下降13%以上，但抗血小板聚集效果如何报道不多，课题组研究发现穿心莲内酯磺酸盐具有抗血小板聚集的作用，通过两者比较发现穿心莲内酯及穿心莲内酯磺酸盐在血小板聚集功能上具有一定的差异，探讨其药理学的作用和可能的机制，为今后深入研究奠定了基础，有望通过改变穿心莲内酯的分子结构在功效上能得到进一步开发和应用。

1 材料

1.1 动物SD大鼠，SPF级，雄性，体重260～280 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证SCXK（湘）2011-0003。

1.2 药物与试剂穿心莲内酯滴丸150 mg/袋（天士力制药集团股份有限公司）；穿心莲内酯磺酸钠（喜炎平针2 ml∶50 mg，江西青峰药业有限公司，批号2015032003）；阿司匹林（Aspirin）购于拜耳医药保健有限公司，批号BJ16334；二磷酸腺苷（Adenosine Diphosphate，ADP）购于美国海伦娜公司。

1.3 主要仪器AggRam血小板聚集仪，型号：BJF52001，购于美国海伦娜公司，试剂为原装配套试剂。日本西斯美康血凝仪CS-5100，试剂均为原装进口配套。

2 方法与结果

2.1 大鼠体内给药对血小板聚集影响的方法SD雄性大鼠32只，分成四组，每组8只，即正常对照组（生理盐水）、阿司匹林肠溶片组（60 mg/kg）、穿心莲内酯滴丸组（600 mg/kg），穿心莲内酯磺酸钠组（400 mg/kg）。阿司匹林肠溶片组、穿心莲内酯组、穿心莲内酯磺酸盐组腹腔注射给药连续5 d，第4天禁食过夜，第5天给药2 h后用乙醚麻醉，腹主动脉取血，用3.8%枸橼酸钠溶液按1∶9抗凝，以1 000 r/min离心10 min取上清液即得富血小板血浆（PRP），剩余部分以3 000 r/min离心10 min，取上清液即得贫血小板血浆（PPP），用PPP调PRP中的血小板数为（3～4）×109/L，采用比浊法测定，取250 μl置37℃恒温培养箱温育5 min，加入诱导剂ADP溶液25 μl（5 μmol/L），用血小板聚集仪进行动态测量血小板聚集能力，记录血小板5 min最大聚集率（PAGmax），与正常对照组比较计算给药组血小板聚集的最大抑制率（IR），IR=（正常对照组PAGmax-给药组PAGmax）／正常对照组PAGmax×100%。

2.2 大鼠体内给药对血小板聚集影响的结果穿心莲内酯磺酸盐组、阿司匹林肠溶片组血小板在5 min内最大聚集率均明显低于正常对照组（P＜0.01），有非常显著性意义。阿司匹林肠溶片组、穿心莲内酯组、穿心莲内酯磺酸盐组IR分别为20.6%、2.57%、36.4%。说明穿心莲内酯磺酸盐具有抗血小板聚集作用，而穿心莲内酯组和正常对照组比较（P＞0.05，）无统计学意义。见表1。

表1 穿心莲内酯及其磺酸盐对ADP诱导大鼠体内血小板聚集的影响（）

表1 穿心莲内酯及其磺酸盐对ADP诱导大鼠体内血小板聚集的影响（）

注：与正常对照组比较，*P＜0.01。

组别n剂量（mg/kg）血小板5 min最大聚集率（%）血小板聚集抑制率（%）正常对照组阿司匹林肠溶片组穿心莲内酯滴丸组穿心莲内酯磺酸盐组8 8 8 8 60 400 600 70.34±8.78 58.26±6.50*71.51.±5.31 46.66±7.47*20.6 2.57 36.4

3 讨论

血小板的聚集是动脉血栓和微血栓形成的最主要的因素，其机理主要是血小板过度活化（释放）和凝血系统过度激活的结果。抗血小板聚集的机理可能是：（1）抑制血小板环氧化酶，使血小板产生血栓烷素A2的能力下降，ADP诱导血小板颗粒内的ADP释放，而阻止了Ⅱ相聚集；（2）封闭和阻断此纤维蛋白受体（FgR）的作用，达到竞争性抑制；（3）ADP可抑制血小板表面ATP酶的活性，ATP酶可以防止血小板相互粘聚，达到抑制血小板聚集；（4）封闭血小板暴露出磷脂表面，因而阻断Ca2+“搭桥”而达到抗血小板粘聚的作用[4～6]。

众所周知在预防心脑血管疾病药物中阿司匹林（ASP）的效果显著，主要作用是抑制血小板聚集、黏附及释放，增强内皮细胞功能，进而防治血栓的形成，达到降低心脑血管疾病风险的作用。其机理为不可逆的抑制血小板内环氧合酶的合成，阻碍血小板花生四烯酸衍变PDD2，PGH2以及TXA2的生成，最终达到抑制血小板聚集、血栓的形成，还对ADP诱导的Ⅱ相聚集及低浓度的凝血酶都有抑制作用。虽然ASP在预防和治疗血栓性疾病方面都发挥了积极的作用，但是引起血小板聚集的因素很多，它的作用途径较为单一，加之其副作用等问题，在临床应用上还是受到一定的限制。

结果显示，穿心莲内酯在一定药物范围内抗血小板聚集作用不明显，可能与其分子结构有关，水溶性差，利用率低。穿心莲内酯磺酸盐化学成分确定，抗炎功效明显，其水溶性好，稳定性及生物利用度高，通过其对大鼠的抗血小板聚集的药理学研究，发现穿心莲内酯磺酸盐可明显降低血小板聚集率，表明穿心莲内酯磺酸盐对血小板聚集有抑制作用。至于穿心莲内酯磺酸盐是通过哪一途径使血小板聚集率下降，这些机理都有待今后进一步探讨。

[1]刘晟楠,魏惠珍,殷文静,等.不同产地不同部位3种穿心莲内酯成分研究[J].时珍国医国药,2016,27(6):1483-1484

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].2015年版.北京:中国医药科技出版社,2015.412,1308

[3]钟星明,钟美兴,邱芳,等.穿心莲内酯对心肌肥厚大鼠心肌胶原及心肌酶谱的影响[J].时珍国医国药,2016,27(4):822-823

[4]赵诗云,危玮,尹小明,等.喜炎平抗ADP诱导的血小板聚集作用的实验研究[J].实用中西医结合临床,2016,16(8):81-82

[5]尹小明,赵诗云,彭旦明,等.SD大鼠血小板聚集实验测定方法的研究[J].南昌大学学报(医学版),2013,53(8):6-7

[6]尹小明,赵诗云,饶丽华,等.鸡血藤不同成分抗AA诱导的血小板聚集作用得实验研究[J].2016,34(4):422-424

R285.5

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2016.12.046

2016-11-08）

江西省卫生计生委中医药科研课题（编号：2008A291）

#通讯作者；赵诗云，E-mail：2605594053@qq.com