头孢噻吩钠含量测定中HPLC方法的应用研究

2016-02-13 07:35陈瑶
泰州职业技术学院学报 2016年6期
关键词:醋酸钠流动色谱

陈瑶

(泰州市人民医院,江苏泰州 225300)

头孢噻吩钠含量测定中HPLC方法的应用研究

陈瑶

(泰州市人民医院,江苏泰州 225300)

目的探究分析头孢噻吩钠的临床应用及采用HPLC方法测量头孢含噻吩钠含量及所含物质的价值。方法色谱柱:C18(4.6mm×250mm,5μm)流动相醋酸钠溶液(采用17.0g的醋酸钠并将其溶于790ml的水中,用冰醋酸将流动相溶液的PH值调节到5.8~6.0)—乙醇—乙腈(82∶2∶18),流动速度为:1.0ml/min,进样量10μl,温度:40℃。结果头孢噻吩钠在55.8μg/ml~464.4μg/ml之间呈现出良好的线性关系。依据S/N>3,进行计算,得出头孢噻吩钠的检出限为3ng/mL。结论采用HPLC方法可以有效地测量出头孢含噻吩钠含量。

HPLC方法;头孢噻吩钠;含量

头孢噻吩钠是第一代头孢菌素,抗菌谱比较广泛[1-3],此种药物适用于治疗呼吸道感染或者尿路感染以及软组织感染等疾病。这些疾病都是由于耐药性金黄色葡萄球菌和一些革兰氏阴性杆菌引起的,而头孢噻吩钠可以对抗这两种病菌。头孢噻吩钠是以抑制细胞壁合成使细胞内物质膨胀直至破裂溶解,从而达到清除病菌的效果的。HPLC属于高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography),也叫高压液相色谱,是在经典液相色谱的基础上进一步研发引进了气相色谱而得出的,高效液相色谱法最大的优势就是填料颗粒比较小且均匀[4]。本研究就针对HPLC在头孢噻吩钠含量测定中应用的效果进行分析。

1 仪器和试药

高效液相色谱仪(HPLC)采用HP1100高效液相色谱仪(源于美国Agilent公司)。头孢噻吩钠样品(生产批号:020325、020327、020329)头孢噻吩对照品(头孢噻吩钠计92%,中国药品生物制品检定所,生产批号为130407~200306);其中乙腈为色谱纯,醋酸钠为分析纯。色谱具有的条件:色谱柱:C18(4.6mm×250mm,5μm),流动相醋酸钠溶液(采用17.0g的醋酸钠并将其溶于790ml的水中,用冰醋酸将流动相溶液的PH值调节到5.8~6.0)—乙醇—乙腈(82∶2∶18)[5-6],流动速度为:1.0ml/min,进样量10μl,温度:40℃。

2 方法与结果

2.1 色谱分离条件优化分析检测并考察缓冲盐溶液浓度、PH值、有机改性剂对头孢噻吩钠色谱的影响,依据醋酸盐的pKa值,选择适当剂量的流动相醋酸钠溶液,得出结果,醋酸钠溶液的保留时间会随着缓冲盐浓度以及PH值的增大而升高,伴随有机相的增加而PH值减小,并且流动相醋酸溶液的PH值的变化会对色谱峰的形态产生一定的影响。根据头孢噻吩钠以及相关物质在流动相溶液作用的情况下保留的时间以及分离度和色谱峰的形态变化,选择适合的头孢噻吩钠最佳色谱条件:流动相醋酸钠溶液。

2.2 适用性实验分析按照调配好的色谱进行实验,头孢噻吩对照品和头孢噻吩钠样品的色谱由下图中A、B两条色谱图表示,色谱图C表示相关物质,色谱图D表示空白溶液。1表示头孢噻吩钠,2表示FACA,3、4均为是未知物质,5表示TAC。由图1中色谱图的形态变化可以看出,有关物质对测定头孢噻吩钠并无影响或干扰,头孢噻吩钠的色谱时间大约在9.2min,根据色谱柱的理论塔板数计算头孢噻吩钠的峰值,大约为7000,头孢噻吩钠色谱峰值对比最近杂志色谱的峰值,其分离度大于2.0。

图1 色谱图

2.3 线性范围检出限和测量精密度称取头孢噻吩对照品44.64mg,并精密测量,将其加入100ml的容器中,倒入流动相醋酸钠溶液进行稀释,直至稀释溶液达到100ml刻度处,将溶液均匀摇晃,将配好的溶液作为储备溶液;采用精密的测量方法将储备液分为五份不同体积的溶液到20ml的容器中,以流动相溶液进行稀释,最后得到五份不同浓度的溶液即55.8μg/ml、111.6μg/ml、223.2μg/ml、357.1μg/ml、464.4μg/ml,并将这五份溶液作为标准溶液,精确量取不同浓度的五份溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,平行3次,并记录色谱图。通过观察峰值和峰面积对浓度进行计算。由线性方程可得出头孢噻吩钠在55.8μg/ ml~464.4μg/ml之间呈现出良好的线性关系。依据S/N>3,进行计算,得出头孢噻吩钠的检出限为3ng/mL。经过精确的测量量取浓度为0.21mg/ mL的头孢噻吩对照品溶液,分析色谱图并测定峰面积,计算得出峰面积的RSD为0.83%。

2.4 含量测量通过精密的测量称取10mg的头孢噻吩钠,将其放入50ml的棕色容器瓶中,加入流动相溶液进行稀释,直至稀释溶液达到50ml刻度处,将溶液均匀摇晃,将配好的溶液作为供应实验的溶液,按照上面的方法配制出对照溶液,精确量取两种浓度的溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,平行3次,并记录色谱图。结果见表1。有关物质的测定:选取头孢噻吩钠10.05mg,再进行精密的测量,将其放入10ml的棕色容器瓶中,加入流动相溶液进行稀释,直至稀释溶液达到10ml刻度处,将溶液均匀摇晃,作为对照溶液。精确量取10μL的对照溶液和供应实验溶液,注入高效液相色谱仪,平行3次,并记录色谱图,结果见表1。

2.5 稳定性测量实验精确的测量同一批次的样品,采用流动相溶液进行稀释,将其浓度稀释到1mg/ml,进行稳定性测试,按照资料1中的色谱条件进行检测,可得出结果如表2所示:

表1 有关物质的测量

表2 稳定性测量结果

2.6 专属性试验

2.6.1 酸破坏实验称取25mg的头孢噻吩钠样品,将样品溶于5ml的0.1mol/L的盐酸溶液中,再将溶解的溶液放置在水温60℃的温水中,持续30min,而后将溶液取出,加上0.1mol/L的氢氧化钠溶液,让两者进行中和反应,再加上流动相醋酸钠溶液(其浓度为1mg/ml),将溶解中和好的溶液按照调配好的色谱进行实验,并记录色谱的形态,如图2B所示。

2.6.2 碱破坏性实验同样称取25mg的头孢噻吩钠样品,将样品溶于5ml的0.1mol/L的氢氧化钠溶液中,再将溶解的溶液放置在水温60℃的温水中,持续30min,而后将溶液取出,加上0.1mol/L的盐酸溶液,让两者进行中和反应,再加上流动相醋酸钠溶液(其浓度为1mg/ml),将溶解中和好的溶液按照调配好的色谱进行实验,并记录色谱的形态,如图2C中显示。

2.6.3 高温破坏实验称取25mg的头孢噻吩钠样品,将样品加入流动相醋酸钠溶液进行稀释,稀释成浓度为1mg/ml,将稀释后的溶液放入105℃的烘箱中,持续6h,而后将溶液按照调配好的色谱进行实验,并记录色谱的形态,如图2D显示。

2.6.4 氧化破坏实验称取25mg的头孢噻吩钠样品,将样品放到密封的容器里,并加入1ml的双氧水(H2O2),让两者反应,持续10min,再加入流动相醋酸钠溶液,将其稀释到浓度为1mg/ ml,而后将溶液按照调配好的色谱进行实验,并记录色谱的形态,如图2E显示。

图2 色谱图

结合实验结果和图2中的色谱形态可以得出,通过强化分解产生的峰态,并不影响头孢噻吩钠的含量测定,通过专属性的实验可以看出,在高温和氧化的作用下,加大了头孢噻吩钠降解的程度,由图可知色谱的峰值逐渐降低,在高温条件的作用下,有杂质峰出现,且峰值面积有所增加,噻吩-2-乙酰氯的的色谱峰的峰位与杂质峰出现的位置一致,可判定噻吩-2-乙酰氯可能就是使头孢噻吩钠降解的物质,这种实验方法为研究该药物的降解物提供了依据[5-7]。

3 讨论

综上所述,本研究以资料1中的色谱条件为基础,进行了一系列的测试和实验,得出在头孢噻吩钠中有两个杂质峰,通过专属性的实验,得出结果,即在一些高温、氧化、酸碱条件的作用下,头孢噻吩钠的色谱峰会有不稳定的现象。采用醋酸钠溶液作为流动相溶液,其结果显示色谱峰的形态和分离效果比较明显,但是流动相溶液组分的色谱条件还是比较复杂。最终可得出结论,采用HPLC方法可以有效测量出头孢含噻吩钠含量。

[1]高景会,史静杰,王蕊,等.HPLC和MS法研究头孢噻吩钠有关物质的种类与含量[J].中国药师,2016,19 (2):274-276.

[2]李玲玲,周劲康.HPLC法测定头孢噻吩钠含量的改进[J].今日药学,2014(12):873-874.

[3]李蔚,朱捷,张妍.注射用头孢噻吩钠含量测定及与3种大输液的配伍稳定性分析[J].第三军医大学学报,2011(12):1313-1314.

[4]张辉,吕文博.高效液相色谱法测定注射用拉氧头孢钠含量[J].科学中国人,2014(12):178.

[5]刘守琼,汪健,姚迅,等.HPLC法同时测定头孢哌酮钠舒巴坦钠注射剂中头孢哌酮钠和舒巴坦钠含量[J].中外食品工业:下,2015(3):41-42.

[6]董超琪,袁华峰,屈蓉.高效液相色谱法测定注射用头孢曲松钠含量的不确定度评定[J].中国药业, 2014(22):45-47.

[7]刘亚妮,马林,刘金梅,等.高效液相色谱法测定人血浆中头孢替坦二钠含量的不确定度[J].中国医院药学杂志,2013(20):1695-1698.

(责任编辑 杨荔晴)

Application of HPLC Method for Determination the Content of Cefalotin Sodium

CHEN Yao
(Taizhou People’s Hospital,Taizhou Jiangsu 225300,China)

Objective To explore the value of the HPLC method for the determination of the content and the content of the sodium containing thiophene.Methods Column:C18(4.6mm*250mm,5 m)mobile phase(so⁃dium acetate solution with sodium acetate 17.0g and its soluble 790ml with acetic acid water,the mobile phase pH value of the solution is adjusted to 5.8-6.0)ethanol acetonitrile(82:2:18),flow rate:1.0ml/min,in the sam⁃ple volume of 10 m,temperature:40 degrees.Results A good linear relationship was found between 55.8 g/m and 464.4 g/ml.According to S/N>3,calculation,the detection limit of the detection of the sodium is 3ng/ mL.ConclusionThe HPLC method can be used to effectively measure the content of the sodium containing thiophene.

HPLC method;cefalotin sodium;content

R927.2

A

1671-0142(2016)06-0051-03

陈瑶(1987-),女,江苏泰州人,主管药师.

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