ELISA与RFFIT两种方法检测人狂犬病抗体的对比

熊 春

ELISA与RFFIT两种方法检测人狂犬病抗体的对比

熊 春

目的 对比酶联免疫吸附试验（ELISA）与快速免疫荧光灶抑制试验（RFFIT）检测人狂犬病抗体的效果。方法 选取狂犬抗体疫苗接种者免疫后血清100份，分别随机选用ELISA与RFFIT检测。结果 免疫0 d、3 d、7 d、14 d和45 d时ELISA法检测阳性率分别为9.00%、12.00%、25.00%、48.00%、86.00%；RFFIT法检测阳性率分别为0.00%、0.00%、23.00%、100.00%、100.00%。结论 ELISA与RFFIT两种方法检测人狂犬病抗体均可适用于抗狂犬病毒抗体检测，但ELISA法免疫早期假阳性率较高，后期假阴性率较高。

人狂犬病抗体；ELISA；RFFIT

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2016.13.099

狂犬病是世界范围内广泛流行的人兽共患传染病，控制和消除人狂犬病的根本前提是防控动物狂犬病，而接种疫苗免疫预防是其重要的控制手段［1］。衡量免疫效果的关键指标是动物或人接种狂犬病疫苗后的狂犬病中和抗体水平。狂犬病疫苗免疫成功的关键是是否产生足够抗体，疫苗加强免疫的依据是抗体水平以及抗体持续时间［2］。快速免疫荧光灶抑制试验（RFFIT）和酶联免疫吸附试验（ELISA）是检测抗狂犬病毒中和抗体水平的常用方法。本研究对这两种检测方法结果进行了对比，报道如下。

1　材料与方法

1.1人血清

选取2014年1月～2015年12月狂犬抗体疫苗接种者免疫后血清100份，分别随机选用ELISA与RFFIT检测。

1.2ELISA法

试剂盒为武汉生物制品研究所生产的狂犬病毒抗体ELISA测定试剂盒。由专业人员按照试剂盒说明书进行严格操作。血清抗体滴度≥0.5 EU/ml为抗体阳性。

1.3RFFIT法

在96孔板上，3倍系列稀释待检血清，设立细胞对照及病毒对照。根据标准参考品及血清样品荧光病变在50%上下的两个稀释度，计算结果。抗体阳性：血清抗体滴度≥0.5 U/ml。

1.4评价指标

抗体阳转率：中和抗体水平≥0.5 IU/ml，表示能得到有效的保护。比较不同免疫时间血清抗体阳转率，全程免疫后狂犬疫苗的抗体阳转率应达100%。

2　结果

免疫0 d、3 d、7 d、14 d和45 d时ELISA法检测阳性率分别为9.00%、12.00%、25.00%、48.00%、86.00%；RFFIT法检测阳性率分别为0.00%、0.00%、23.00%、100.00%、100.00%。

3　讨论

抗体在狂犬病的预防、诊断及治疗的过程中有着极其重要的作用。目前狂犬病毒特异性抗体对病毒的清除机理还不明确。狂犬病血清学检测常规用于狂犬病疫苗免疫后免疫效果评价。小鼠中和试验（MNT）、RFFIT是WHO认可和国际通用的狂犬病中和抗体的检测方法［3］。RFFIT法是将固定量的攻击病毒CVS株与稀释的血清温育后加入敏感细胞悬液，最后通过计算得出抗体效价，具有特异性好、灵敏度高等优点，但其不仅成本高，而且技术、设备要求高［4］。RFFIT法因操作中有狂犬病病毒的参与，具体操作必须在2级生物安全实验室内才能进行，基层机构由于缺乏相应的设备较难开展，应用范围因此受到限制。除此之外，由于RFFIT法主观性较强，检测员经验不同、选取的标准品和中和用狂犬病毒CVS剂量以及试验操作的地点不同等都是影响最终实验结果的因素，所以对待临界值的判断需慎重。有报道称利用异源性中和病毒所测抗体滴度在RFFIT法检测抗体中，比同源性中和病毒所测抗体滴度低30%［5］。狂犬病中和抗体的定性检测可选用ELISA检测试剂盒和胶体金层析试纸等产品，但还需通过RFFIT平行检测进行比对，方可确定检测性能。由于ELISA法快速、简便也被许多实验室采纳。缺点是用于检测狂犬病中和抗体的试剂生产技术方面的原因，未包含狂犬病毒中和抗体在内的所有非特异性的抗狂犬病毒抗体，检出抗体由于其吸附抗原的纯度及组分的不同而不尽相同，因此检测的特异性受到一定限制［6］。灵敏度有时会因为吸附的抗原量不稳定而受到影响。

除了上述不足之外，ELISA法还有两种弊端：假阴性结果会导致加强注射以期达到阳性，个别免疫者会连续加强十几支疫苗；假阳性结果报告有可能会给检测机构带来医疗风险。本研究中免疫0 d和3 d时ELISA法检测阳性率分别为9.00%、12.00%，而RFFIT法检测阳性率均为0.00%。表明RFFIT法检测血清抗体假阳性率较高，特异性差。免疫14 d和45 d的血清抗体阳性率为100.00%，而ELISA法检测结果阳性率48.00%和86.00%，表明ELISA法检测结果假阴性率高，灵敏度低。

综上所述，ELISA与RFFIT两种方法检测人狂犬病抗体均可适用于抗狂犬病毒抗体检测，但ELISA法免疫早期假阳性率较高，后期假阴性率较高。检测人狂犬病疫苗免疫后血清抗体临床实际中可根据具体情况，建议采用WHO认可的方法。

［1］ 罗君，苗秋丽，司珩. ELISA方法检测人狂犬病毒抗体效果分析［J］. 现代预防医学，2011，38（3）：556-558.

［2］ 吕新军，王伟伟，李云云，等. 采用快速荧光灶抑制试验对一种狂犬病病毒抗体竞争性ELISA检测法的评价［J］. 国际检验医学杂志，2011，32（6）：640-641.

［3］ 王伟伟，王远征，张国强，等. 狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法的建立及初步应用［J］. 中国生物制品学杂志，2011，24（11）：1355-1359.

［4］ 吴小红，董关木，L.Audry，等. ELISA与RFFIT 2种方法检测人狂犬病抗体的比较［J］.药物分析杂志，2010，30（10）：1966-1968.

［5］ 王余俊，王晓昱，石建方，等. 53例人用狂犬病无佐剂纯化疫苗接种后抗体检测结果分析［J］. 现代预防医学，2012，39（11）：2826-2828.

［6］ 吕新军，申辛欣，唐青，等. 改良抗体结合试验检测人用狂犬病疫苗效价方法的初步建立［J］. 中国疫苗和免疫，2014，20（3）：250-253.

Comparison of Two Methods of ELISA and RFFIT for Detection of Human Rabies Antibody

XIONG Chun Department of Quality Management，Centre for Disease Control and Prevention of Changsha City，Changsha Hu'nan 410004，China

【Abstract】

Objective To compare enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） and rapid fluorescent focus inhibition test （RFFIT） on the detection of human rabies antibodies. Methods 100 cases of serum of rabies antibody vaccine recipients after vaccination were selected and randomly detected with RFFIT or ELISA. Results 0 d，3 d，7 d，14 d and 45 d after vaccination，the positive detection rate by ELISA were respectively 9.00%，12.00%，25.00%，48.00% and 86.00%. The positive rate by RFFIT were 0.00%，0.00%，23.00%，100.00% and 100.00%. Conclusion Both ELISA and RFFIT can be applied to the detection of rabies virus antibody，but ELISA has higher false positive rate in early period of immunization and higher false negative rate in later period of immunization.

Human rabies antibody，ELISA，RFFIT

R446.11

A

1674-9316（2016）13-0159-02

长沙市疾病预防控制中心质量管理科，湖南 长沙 410004