活菌制剂对2型糖尿病胃肠神经病变患者肠道菌群的影响

程晓亮　朱寅荣　于南南　宫　芸

活菌制剂对2型糖尿病胃肠神经病变患者肠道菌群的影响

程晓亮朱寅荣于南南宫芸

【摘要】目的研究2型糖尿病并胃肠功能紊乱患者服用双歧杆菌三联活菌胶囊治疗前后肠道双歧杆菌的变化。方法选取30例2型糖尿病并胃肠神经病变患者，给予双歧杆菌三联活菌胶囊口服，每次2粒，3次/d，治疗1个月，治疗前后收集粪便样品，提取样品中细菌DNA，根据双歧杆菌总菌的16S rRNA序列设计特异性引物，并应用实时荧光定量PCR技术对60份粪便样品中的双歧杆菌总菌进行定量检测。结果2型糖尿病并胃肠功能紊乱患者服用双歧杆菌三联活菌胶囊治疗后肠道双歧杆菌总菌数量较治疗前增加（P＜0.05）。结论2型糖尿病伴胃肠功能紊乱患者口服双歧杆菌活菌制剂能有效增加肠道双歧杆菌数量，改善胃肠道症状，双歧杆菌活菌制剂在2型糖尿病伴胃肠功能紊乱患者的治疗上有较好的运用前景。

【关键词】2型糖尿病；胃肠功能紊乱；双歧杆菌；双歧杆菌三联活菌胶囊

Objective To study the influence of intestinal bifidobacteria on the type 2 diabetes patients with gastrointestinal dysfunction after taking bifid triple viable capsule.Methods Selecting 30 cases of type 2 diabetes patients with gastrointestinal dysfunction.Taking the bifid triple viable capsule（2 pieces each time，three times a day）for a month.Extracting the bacterial DNA of the fecal samples before and after the treatment.Designing the specific primer of bifidobacteria according to the bacterial 16SrRNA sequence.Quantitatively testing the total volume of bifidobacteria on the two different groups by applying the real-time PCR technology.Results After taking the bifid triple viable capsules，the total amount of bifidobacteria increased compared to the previous case（P＜0.05）for the type 2 diabetes patients with gastrointestinal dysfunction.Conclusion Bifid triple viable capsules help increase the amount of intestinal bifidobacterium effectively and improve the gastrointestinal symptoms.It is promising for type 2 diabetes patients with gastrointestinal dysfunction by using bifid triple viable capsules as the medical treatment.

【Key words】Type 2 diabetes，Gastrointestinal disorders，Bifidobacteria，Bifidobacterium triple viable capsule

糖尿病胃肠功能紊乱是糖尿病的常见并发症之一，其详细机制尚不明确，目前认为其发生可能与自主神经病变、胃肠神经系统病变、Cajal间质细胞病变、高血糖刺激肠微血管病变及胃肠激素分泌失调等相关［1］。研究表明，与无胃肠功能紊乱的2型糖尿病患者相比，2型糖尿病伴胃肠功能紊乱的患者存在更严重的菌群失调［2］。本实验通过给予受试者口服双歧杆菌活菌制剂，分析益生菌制剂口服途径治疗的有效性。

1　材料与方法

1.1研究对象及标本收集

选取2014年3月～2014年9月在昆明医科大学第二附属医院内分泌科住院的30例2型糖尿病并胃肠神经病变患者，年龄在50～70岁，男20例，女10例，平均年龄（62.50±8.15）岁。采集30例患者治疗前后的粪便样品，收集于无菌采便盒中，并迅速保存于-70℃低温冰箱内。所有患者给予口服双歧杆菌三联活菌胶囊，每次2粒，3次/d，治疗1个月。

1.2主要实验试剂和仪器

细菌基因组DNA提取试剂盒（TІANampBacterriaDNAKit）、PBS液（0.01 mol/L，pH 7.4）、质粒提取试剂盒（TІANGEN 100次质粒小提）、琼脂糖、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒均购自北京天根生化科技有限公司，SYBRGreen荧光染料、dNTP、TaqDNA聚合酶、DNA分子标准Marker、T载体试剂盒（TAKARApMD19Tsimple），均购自宝生物工程（大连）有限公司，实验所用引物、GlodViewІ染料购自生工生物工程（上海）有限公司。

1.3实验方法

取湿重粪便样品1 g加10 ml灭菌PBS（0.01 mol/L，pH 7.4），充分振荡混匀10 min，随之低速离心（3000 r/min）5 min，留取上清，上述过程重复3次。将所收集到的上清液高速离心（12000 r/min）10 min，然后弃上清，收集沉淀，并用10 mlPBS悬浮，12000 r/min离心5 min，沉淀重复洗涤3次，所得菌体用1 ml无菌水悬浮混匀，装至1.5 mlEP管中，并以12000 r/min离心5 min。得到的菌体沉淀保存于-20℃。使用细菌基因组DNA提取试剂盒并严格按照说明书步骤进行提取。选用的引所物序列如下：双歧杆菌总菌：上游：AGAACCTTACCTGGGCTTGA；下游：CCTTCCTCCGAGTTGACCC，片段大小208 bp。以2型糖尿病伴胃肠神经病变患者服药前粪便样本提取的细菌基因组DNA为模板进行常规PCR反应，制备质粒标准品，通过实时荧光定量得出双歧杆菌总菌的拷贝数。

1.4统计学分析

所得数据应用SPSS 17.0软件处理，双歧杆菌总菌计量资料结果均经正态性检验，以（均数±标准差）（）表示，2型糖尿病伴胃肠神经病变组治疗前后差异用配对t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2型糖尿病伴胃肠神经病变组患者治疗前双歧杆菌总菌数量为（7.97±0.63）lgcopies/g，经双歧杆菌三联活菌胶囊420 mg，3次/d。治疗1个月后，双歧杆菌总菌数量为（9.07±0.72）lgcopies/g。与治疗前相比，2型糖尿病伴胃肠神经病变患者服用双歧杆菌三联活菌胶囊治疗后肠道双歧杆菌总菌数量增多，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3　讨论

糖尿病性胃肠功能紊乱患者的治疗，主要包括控制血糖及减轻相关的胃肠道症状两方面［3］。研究显示［4-6］，补充双歧杆菌制剂，能够减少LPS，减轻2型糖尿病个体的低水平炎症反应，改善糖代谢及胰岛素抵抗，增加葡萄糖依赖的胰岛素分泌。王雪萍等［7］及张宜松等［8］将双歧杆菌制剂用于2型糖尿病伴胃肠功能紊乱患者，以治疗恶心、腹胀、腹泻、便秘等症状，收到了良好的效果。因此，通过增加肠道双歧杆菌，能够通过改善内毒素血症，降低全身炎症反应，改善胰岛素抵抗，调节胃肠激素及渗透压，维持肠道正常的内环境，协调消化道与中枢神经系统的相互作用，从而改善糖尿病胃肠功能紊乱的症状。

本实验中2型糖尿病伴胃肠功能紊乱患者在服用双歧杆菌制剂1个月后，症状改善的同时肠道双歧杆菌数量较治疗前升高。由此可见，益生菌活菌制剂能通过口服途径有效提高肠道双歧杆菌数量，从而有效改善腹胀、腹泻、便秘等症状，在糖尿病性胃肠功能紊乱的治疗上有着良好的运用前景。

参考文献

［1］Yarandi SS，Srinivasan S.Diabetic gastrointestinal motility disorders and the role of enteric nervous system：current status and future directions［J］.Neurogastroenterology&Motility，2014，26（5）：611-624.

［2］任巧.2型糖尿病胃肠功能紊乱患者粪便菌群分析［J］.临床医学，2013，33（3）：54-55.

［3］Gatopoulou A，Papanas N，Maltezos E.Diabetic gastrointestinalautonomic neuropathy：current status and new achievements for everyday clinical practice［J］.European journal of internal medicine，2012，23（6）：499-505.

［4］Cani PD，Neyrinck AM，Fava F，et al.Selective increases of bifidobacteria in gutmicroflora improve high-fat-diet-induced diabetes in mice through amechanism associated with endotoxaemia［J］.Diabetologia，2007，50（11）：2374-2383.

［5］Cani PD，Amar J，Iglesias MA，et al.Metabolic endotoxemia initiates obesity and insulin resistance［J］.Diabetes，2007，56（7）：1761-1772.

［6］Chen JJ，Wang R，Li XF，et al.Bifidobacteriumlongum supplementation improved high-fat-fed-induced metabolic syndrome and promoted intestinal Reg I gene expression［J］.Experimental Biology and Medicine，2011，236（7）：823-831.

［7］王雪萍，李军，陈建强.双歧杆菌三联活菌胶囊治疗糖尿病性胃肠功能紊乱60例疗效观察［J］.医学理论与实践，2012，25（7）：788-789.

［8］张宜松，朱玉林，陈建国，等.双歧杆菌三联活菌胶囊治疗2型糖尿病难治性腹泻的疗效观察［J］.临床合理用药杂志，2014，7（13）：74.

【中图分类号】R587.1

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9316（2016）11-0101-03

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2016.11.068

基金项目：2型糖尿病伴或不伴胃肠神经功能紊乱患者肠道双歧杆菌的差异。云南省教育厅项目（2013Y294）

作者单位：昆明医科大学第二附属医院内分泌科，云南昆明650101

Effect of Living Bacteria Agent on Intestinal Flora in Type 2 Diabetes Mellitus Patients With Gastrointestinal Dysfunction

CHENG Xiaoliang ZHU Yinrong YU Nannan GONG Yun Department of Endocrinology，The Second Affiliated Hospital of Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650101，China

【Abstract】