牛无乳链球菌的危害、检测方法及防治

夏良华

（内蒙古赤峰市巴林左旗碧流台镇动物防疫站，内蒙古赤峰 025458）

牛无乳链球菌的危害、检测方法及防治

夏良华

（内蒙古赤峰市巴林左旗碧流台镇动物防疫站，内蒙古赤峰 025458）

1 无乳链球菌的危害

无乳链球菌是引起奶牛乳腺炎的主要病原菌之一。乳腺炎是严重危害畜群生产的一类疾病，它虽不能造成大批的畜群死亡，却是影响全世界奶牛产业最重大的经济问题之一，奶牛乳腺炎的发生直接影响着牛奶质量，从而严重地威胁着人类的健康。

2 无乳链球菌的检测方法

马保臣等的研究表明，在无乳链球菌的16SrRNA和23SrRNA之间的区域设计3对引物，建立了检测无乳链球菌的多重PCR方法。结果表明，利用多重PCR培养法对无乳链球菌的检测与传统的细菌培养法的检测的结果基本一致，敏感性差异不显著，用PCR方法鉴定细菌，选取的扩增片段是保守的，但在不同种的水平上是有一定差异的。

贾玉萍等建立了巢式PCR检测无乳链球菌的方法，她们利用了链球菌属16SrRNA基因的保守区设计通用引物作为链球菌属的阳性控制，在保守区内的可变区设计无乳链球菌的特异的引物。通过DNA提取、引物设计与合成、PCR扩增、敏感性实验、无乳链球菌检测等一系列步骤，得出扩增后均产生明显的目的条带，用含无乳链球菌101、102和103CFU/ml的奶样过夜培养后，通用引物和特异引物PCR扩增结果均为阳性，这充分说明了此方法具有较高的灵敏性和特异性。

无乳链球菌分离培养所需的条件比较严格，操作不当就会造成假阴性的发生而妨碍治疗，上述的方法可以解决这些问题，利用链球菌属的16SrRNA基因，在保守区设计出通用引物可以更好地进行检测，从而正确的指导临床用药。另一方面，无乳链球菌感染的初期不引起明显的变化，而用此方法经过夜培养后，可检测到1CFU/ml的链球菌，这对于早期预防和监测都具有十分重要的意义。

目前，临床上多用常规的CAMP法来检测无乳链球菌，这样不仅费时费力，而且还不能满足临床快速检测的需要。苏桂华等研究的方法是：取2～3个菌落混悬于抗原浸出液中，在35℃下温育10～15min备用，然后，将无乳链球菌胶乳试剂滴入使用卡的圆圈内1滴，再加1滴备好的抗原浸出液，混合后摇匀，如果在2min内出现凝集即为阳性，操作非常简便、快速。结果也容易判断。因为此方法是建立在抗原抗体结合的基础上的，因此具有很高的敏感性和特异性，在临床应用中可以作为检测的一种辅助手段。

3 无乳链球菌的防治及耐药性

致病性链球菌可导致人和动物的各种化脓性疾病、肺炎、乳腺炎、败血症等疾病的发生，对人畜的健康造成极大的危害，已引起了人们的高度重视。王丽平等研究表明，红霉素等作为青霉素药物的替代药物是治疗致病性链球菌感染的有效药物。尤其是那些对ß内酰胺酶类抗生素过敏的孕妇，可选用红霉素作为产前预防链球菌感染的抗菌药物。链球菌对大环内酯类耐药机制主要是由于：（1）核糖体靶位点改变，大环内酯耐药性链球菌合成核糖体甲基化酶，使23sRNA的特定腺嘌呤甲基化而阻断大环内酯类抗生素与核糖体的结合。（2）mefA基因编码特异大环内酯类外排机制增强，菌株主动将细胞内抗生素浓度泵出而耐药。（3）23rRNA和L4核糖体及L22蛋白突变。一个国家和地区的耐药性的地理范围和严重程度造成了发病率的不同，因此，应对流行株的发生、发展进一步了解，才能更好地预防和控制耐药性的产生。

4 无乳链球菌的疫苗应用研究

应用抗生素治疗虽然对由无乳链球菌引起的疾病有效，但是维持期短，并且有一定的局限性，大量应用抗生素会使得动物产生耐药性，为今后的治疗埋下隐患。而利用疫苗来对无乳链球菌病进行预防已经是一种切实有效的手段，同时，利用疫苗还有许多的优点，如：（1）不发生药物残留问题（2）有助于降低无乳链球菌的感染程度（3）操作简便且费用低廉。接种疫苗的目的就是增加机体免疫应答反应，来阻止、中和并杀灭无乳链球菌。

邢玫等2007年的研究表明，现有的链球菌的疫苗研究比较少，而针对无乳链球菌的疫苗也不十分理想。使用甲醛灭活后的无乳链球菌对奶牛的保护力很差，而国外有人用血纤维蛋白溶酶受体蛋白（Gapc）的基因编码无乳链球菌细胞表面相关的Gapc蛋白，结果证明，Gapc的基因工程疫苗免疫后对无乳链球菌引起的疾病无保护性，Gapc与Mig是由无乳链球菌SDG8菌株分泌的两种蛋白，应用Gapc和Mig重组苗免疫后，Gapc能使SDG8含量明显降低，但是Mig苗却不能使其降低，因此，这一方面还有必要进一步的研究。

无乳链球菌根据细胞壁多糖及表面抗原的不同可将其分为Ia、Ib、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ和Ⅷ9个血清型，这当中起主要致毒作用的是Ⅲ型荚膜多糖，因此，现在一般应用Ⅲ型荚膜多糖共价耦联破伤风类毒素等异源蛋白制备的疫苗，能够产生较高的免疫保护性。另外，以无乳链球菌菌体表面的蛋白质成分为抗原制备疫苗，接种后也能产生理想的效果。

5 小结与讨论

近年来，随着我国生态环境的保护，畜牧业生产逐渐向规模化、集约化发展，饲养数量也不断扩大，尤其是家禽和猪、牛的饲养正在趋向自动化、专业化、机械化的管理方式。人们生活水平不断提高，需要畜禽产品的种类和数量不断增加。如果出现畜禽类疾病的暴发和流行，不但要造成较大的经济损失，还会对人类的健康带来严重影响，甚至死亡。更会造成人们的高度恐慌，如：“疯牛病”，“禽流感”。人们惧怕因食用这种畜禽产品而造成感染，还会有许多人畜共患的传染病等高发病的流行。为保证人们的健康，让人们真正吃上“放心肉”和畜禽产品，保护畜牧业的持续发展，就要寻求更好的途径，控制畜禽的各类疾病。

综上所述，加强无乳链球菌的流行病学的调查与分析，可以为诊断提供依据，也能为拟订防治措施提供依据，建立快速、灵敏、简便的诊断方法，研制出符合国情的实用、有效的技术，开发各种疫苗、中西兽药等都是未来畜禽病防治工作的重点。今后，我们要更加深入的研究无乳链球菌，掌握它基因变异的各种情况，为认识和消灭病原，预防、诊断和控制疾病，做出更大的贡献。