小鼠脑缺氧后P300在海马结构中表达变化及其意义

王树鹏　宋春来　于广池　胡光宇

(集安市公安局，吉林　集安　134200)



小鼠脑缺氧后P300在海马结构中表达变化及其意义

王树鹏宋春来1于广池2胡光宇3

(集安市公安局，吉林集安134200)

〔摘要〕目的探讨小鼠脑缺氧后P300在大脑海马结构中的表达。方法随机将50只昆明系小鼠分成10组，颈部手术结扎右侧颈总动脉，术后1、3、6、12 h、1、3、6、9、12 d处死，采用免疫组化染色方法检测P300在海马结构中表达变化，应用CMIAS多功能真彩色病理图像分析系统测量细胞内灰度值。结果P300在脑缺氧3 h后表达明显增加。结论P300可作为脑缺氧的早期指标，并很可能参与脑缺氧后海马功能改变。

〔关键词〕脑缺氧；P300；海马

1内蒙古兴安盟突泉县公安局2长春市公安局宽城公安分局

3嘉兴市公安局

第一作者：王树鹏(1970-)，男，副主任法医师，主要从事法医病理学研究。

P300为分子量大约250 kD的核蛋白，在转录调节方面发挥至关重要的作用。作为细胞核内的大蛋白，其蛋白表面存在着与诸多转录因子结合的结构域〔1，2〕。目前为止，至少已经发现400个蛋白可与P300形成物理性结合。P300可作为桥接蛋白介导DNA结合转录因子与基础转录复合物相结合，另外，P300还具有赖氨酸乙酰化酶活性，可通过乙酰化组蛋白而调控转录〔3，4〕。最近的研究发现，P300表达量和活性降低均与人类神经细胞退行性改变相关联。但神经细胞缺氧后P300的表达改变，国内外却鲜有报道。

1材料与方法

1.1动物分组及模型建立昆明系雄性小鼠50只，随机分为10组，包括脑缺氧实验组及正常对照组。实验组分别于术后1、3、6、12 h、1、3、6、9、12 d处死。实验过程中结扎右侧颈总动脉，腹腔内注射10%水合氯醛(0.35 g/kg体重)麻醉小鼠，剪毛并消毒颈部皮肤后，沿中线切开皮肤，手术分离并结扎右侧颈总动脉，缝合皮肤后鼠笼饲养。不结扎颈部动脉，但切开颈部皮肤小鼠作为正常对照组。

1.2方法

1.2.1苏木素-伊红(HE)染色脑组织标本用10%甲醛溶液固定2 d，采用石蜡包埋，4 μm厚连续切片，进行常规HE染色。

1.2.2免疫组织化学染色采用P300一抗进行组织化学染色，按试剂盒说明书应用SP法对脑组织中P300进行检测。用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗为阴性对照，对已知阳性的切片做阳性对照。神经细胞内平均灰度值采用CMIAS多功能真彩色病理图像分析系统测量。

1.3统计学方法应用SPSS13.0统计学分析软件行单因素方差分析。

2结果

常规HE染色可见，脑缺氧3 h后，损伤灶周围神经细胞尼氏体溶解消失，神经细胞及血管周围间隙增宽；缺氧1 d后，脑实质内出现嗜神经细胞现象；缺氧3 d后，可见有胶质神经细胞增生(图1)。在正常对照组海马组织中，P300呈弱表达，实验组海马组织中P300在伤后3 h表达量增高，且随缺氧时间延长后持续增高，缺氧1 d后达峰值。缺氧0 min、1、4、12 h、1、3、6、9、12、16 d的平均灰度值为165±3.5，178±7.2，157±7.9，159±5.2，136±8.9，91±6.9，76±8.2，79±9.1，73±2.3，71±6.2。

图1　小鼠大脑缺氧后P300在海马中的表达变化(HE，×20)

3讨论

P300作为重要的转录因子调控因子，在神经细胞退行性变中的重要作用已被众多学者所报道〔6〕。本研究发现，P300在正常海马组织中呈一致性弱表达，提示P300很有可能参与海马组织内神经细胞的正常转录调节过程。在脑缺氧早期，P300在海马组织中表达即发生变化，P300表达量增加，很有可能参与脑缺氧早期细胞代偿过程，提示P300可作为脑缺氧的早期诊断指标。另外，P300可通过调节转录因子而调控细胞中众多基因的表达，其在海马组织中随缺氧时间延长而呈规律性增长，进一步说明其在神经细胞退行性变代偿过程中发挥着重要功能。

4参考文献

1von Mikecz A，Zhang S，Montminy M，etal.CREB-binding protein (CBP)/p300 and RNA polymerase Ⅱ colocalize in transcriptionally active domains in the nucleus〔J〕.J Cell Biol,2000;150(1):265-73.

2Bhattacherjee V，Horn KH，Singh S，etal.CBP/p300 and associated transcriptional co-activators exhibit distinct expression patterns during murine craniofacial and neural tube development〔J〕.Int J Dev Biol,2009;53(7):1097-104.

3Cazzalini O，Sommatis S，Tillhon M，etal.CBP and p300 acetylate PCNA to link its degradation with nucleotide excision repair synthesis〔J〕.Nucleic Acids Res,2014;42(13):8433-48.

4Ni J，Shen Y，Wang Z，etal.P300-dependent STAT3 acetylation is necessary for angiotensin II-induced pro-fibrotic responses in renal tubular epithelial cells〔J〕.Acta Pharmacol Sin，2014;35(9):1157-66.

5Viosca J，Lopez-Atalaya JP，Olivares R，etal.Syndromic features and mild cognitive impairment in mice with genetic reduction on p300 activity：differential contribution of p300 and CBP to Rubinstein-Taybi syndrome etiology〔J〕.Neurobiol Dis，2010;37(1):186-94.

6van Deursen JA，Vuurman EF，Smits LL，etal.Response speed，contingent negative variation and P300 in Alzheimer's disease and MCI〔J〕.Brain Cogn，2009;69(3):592-9.

〔2015-01-15修回〕

(编辑袁左鸣)

通讯作者：胡光宇(1976-)，男，主检法医师，主要从事法医病理学研究。

〔中图分类号〕R36

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2015)22-6366-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.22.022