补肺益脾通窍汤对慢性鼻窦炎家兔模型NF-κB p65的影响*

张　岳，唐年亚

(南阳医学高等专科学校，河南 南阳 473000)



·实验研究·

补肺益脾通窍汤对慢性鼻窦炎家兔模型NF-κB p65的影响*

张岳，唐年亚

(南阳医学高等专科学校，河南 南阳 473000)

摘要目的：研究补肺益脾通窍汤对慢性鼻窦炎家兔模型鼻黏膜NF-κB p65的影响，探讨其作用机制。方法：选取家兔60只，雌雄各半，分为正常对照组、假手术组、模型对照组、克拉霉素片组、补肺益脾通窍汤组、针氧组6组，每组10只。采用窦口不完全堵塞+窦腔留置棉絮造模法建立慢性鼻窦炎家兔模型，造模时间为42 d。造模成功后，克拉霉素片组灌胃克拉霉素片25 μg/(g·d)；补肺益脾通窍汤组灌胃补肺益脾通窍汤14 g生药/(kg·d)；针氧组针刺5组穴位(迎香穴、肺俞穴、脾俞穴、肾俞穴和后三里穴)，针刺后给体积分数300 mL/L氧10 min，1 d 1次；以上各组疗程均为14 d。免疫组织化学法检测各组兔NF-κB p65在鼻窦黏膜的表达。结果：模型对照组家兔NF-κB p65的表达高于正常对照组，差别有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组对比，克拉霉素片组、补肺益脾通窍汤组和针氧组NF-κB p65的表达均降低，差别有统计学意义 (P<0.01)；其中以补肺益脾通窍汤组降低最为明显，与正常对照组对比，差别无统计学意义。结论： 补肺益脾通窍汤能够抑制NF-κB p65激活，终止炎症介质的转录，减少炎症介质释放，限制炎症反应；减轻鼻黏膜炎症反应，达到治疗慢性鼻窦炎的目的。

关键词补肺益脾通窍汤；慢性鼻窦炎；NF-κB p65；动物；家兔

慢性鼻窦炎(chronic sinusitis，CRS) 属中医学“慢鼻渊”范畴，是鼻窦黏膜慢性化脓性疾病，临床上以慢性上颌窦炎最为常见。目前临床治疗CRS多采用的药物和(或)手术治疗，容易导致细菌耐药性增强，手术治疗后遗症(如病情反复、头痛等症状加重、嗅觉减退等)增多，因此寻求安全、有效、副作用少的CRS治疗方法，已成为广大耳鼻喉科医生迫切需要解决的问题。本研究通过观察补肺益脾通窍汤对慢性鼻窦炎家兔模型鼻黏膜NF-κB p65的影响，探讨补肺益脾通窍汤治疗CRS的作用机制。

1材料与方法

1.1动物

选取3月龄1级健康家兔60只，雌雄各半，体质量1.9～2.3 kg，由华中科技大学统计医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(鄂)2013-10。

1.2菌株

取门诊慢性鼻窦炎患者上颌窦穿刺冲洗液进行细菌培养，筛选单一菌株金黄色葡萄球菌接种于血平板上，置于培养箱中 24 h，收集菌落，用生理盐水稀释成1 麦氏单位的细菌悬浊液备用。

1.3药品、试剂与仪器

补肺益脾通窍汤由党参、黄芪、山药、桔梗、辛夷花、荆芥、防风、薏苡仁、茯苓、鹅不食草、细辛、甘草等组成，由南阳医学高等专科学校第二附属医院药房制备，每毫升含1 g生药；克拉霉素片，江苏恒瑞医药股份有限公司产品，批号20131209。兔抗NF-κB多克隆抗体(批号BA0866)、生物素化山羊抗兔抗体(批号AR0194)、抗体稀释液(批号AR1016)、兔SABC试剂盒(批号SA1052)，均为武汉博士德生物工程有限公司产品；DAB显色试剂盒，北京中山生物技术有限公司，批号SW1040。华佗牌针灸针一次性无菌银针(直径0.3 mm，长25 mm)，苏州医疗用品厂产品；PHY-III病理组织漂烘处理仪，常州中威电子仪器厂产品；BMJ-III病理组织包埋冷冻台，常州中威电子仪器厂产品；电热恒温培养箱，天津实验仪器厂产品；Leica Qwin V3.2.0图像分析系统，产地德国。

1.4分组、模型的建立与给药

将60只家兔随机分为正常对照组、假手术组、模型对照组、克拉霉素片组、补肺益脾通窍汤组、针氧组6组，每组10只。采用窦口不完全堵塞+窦腔留置棉絮造模方法建立CRS家兔模型：家兔鼻部常规消毒铺巾，10 g/L利多卡因手术区浸润麻醉；沿鼻背正中线作一纵长切口，分离双侧上颌窦前壁皮下组织及骨膜；上颌窦穿刺针在上颌窦前壁圆孔凹陷处钻开直径1.5 mm小孔；取少量棉絮放置在窦口及窦腔中，窦口不完全堵塞；注入1mL金黄色葡萄球菌悬浊液；碘伏消毒手术创面，将骨膜、皮肤逐层缝合。假手术组手术步骤同上，但窦腔内不填塞棉絮，不注射细菌。正常对照组不需任何处理。造模时间为42 d。组织学病理检查以鼻窦黏膜出现增生肥厚，伴大量慢性炎性细胞渗出为造模成功的标准。造模成功后，克拉霉素片组灌胃克拉霉素片25 μg/(g·d)；补肺益脾通窍汤组灌胃补肺益脾通窍汤14 g生药/(kg·d)；针氧组针刺5组穴位(迎香穴、肺俞穴、脾俞穴、肾俞穴和后三里穴)，针刺后放入密封纸箱，给体积分数300 mL/L氧10 min，1 d 1次。以上各组疗程均为14 d。

1.5检测指标

治疗结束处死动物，于冰盘上取出部分鼻窦黏膜。按照试剂盒说明书，采用免疫组织化学法检测各组兔NF-κB P65在鼻窦黏膜的表达。显微镜下随机选5个高倍视野(×200)，用计算机图像处理系统分析细胞凋亡率，以细胞核染呈棕褐色者为NF-κB阳性细胞。细胞阳性率=棕褐色细胞面积/细胞总面积×100%。

1.6统计学方法

2结果

模型对照组家兔NF-κB p65的表达高于正常对照组，差别有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组对比，克拉霉素片组、补肺益脾通窍汤组和针氧组NF-κB p65的表达均降低，差别有统计学意义 (P<0.01)；其中以补肺益脾通窍汤组降低最为明显，与正常对照组对比，差别无统计学意义。见表1。

表1各组家兔鼻窦黏膜中NF-κB p65表达

注：与正常对照组对比，*P<0.05；与模型对照组对比，#P<0.05；与补肺益脾通窍汤组对比，△P<0.05。

3讨论

慢性鼻窦炎多与鼻窦内多种细菌感染、炎症细胞长期浸润相关。鼻窦急性炎症反复多次发作，导致鼻窦黏膜病变，纤毛上皮功能失常，上皮细胞分泌增强和鳞状上皮化；窦口黏膜肿胀、肥厚,甚至息肉样变，使窦口引流受阻，出现鼻窦慢性炎症。

慢性炎症反应是体液和细胞等多因素介导的免疫机制表达，基因转录增加是许多细胞因子产生过量的关键[1]。NF-κB p65通过促进多种细胞因子基因转录，参与并调控多种炎症因子表达[2]。NF-κB活化后在核定位信号介导下，以能量依赖形式进入核内，接触DNA，诱导多种细胞因子和炎症介质等基因转录；激发NF-κB过度活化，引起炎症介质过度表达和超量释放[3]。炎症介质同时反作用激活NF-κB，形成正反馈效应，使炎症反应放大并持续存在。慢性咽炎是鼻-鼻窦黏膜的慢性化脓性炎症，参与早期免疫反应和炎症反应各阶段的许多细胞因子都受NF-κB的调控。炎症反应激活NF-κB p65，持续激活的NF-κB p65通过增强细胞因子(如IL-6、IL-8)表达，刺激抗凋亡基因的转录，增强细胞的增殖能力，使炎症反应细胞产生活性氧，损伤鼻-鼻窦黏膜周围上皮细胞DNA，引起鼻-鼻窦黏膜组织的炎性损害。

补肺益脾通窍汤主要针对肺脾气虚、湿邪滞留鼻窍的病因，采用补益肺脾、利水渗湿排脓、宣通鼻窍的方法进行治疗。党参、黄芪、山药补肺脾之气，桔梗宣肺排脓，辛夷祛风通窍，荆芥、防风祛风解表，薏苡仁、茯苓利水渗湿健脾，鹅不食草、细辛祛风散寒除湿通窍，甘草调和诸药，共奏补肺益脾、宣鼻通窍之功效。现代药理表明：党参、薏苡仁能够提高机体免疫功能[4-5]；黄芪可以降低滑膜细胞和血清脂质过氧化物的一氧化氮，发挥一定的抗炎作用[6]。诸药合用,可抑制CRS的发生、发展，达到治疗本病的目的。

本实验表明，补肺益脾通窍汤可降低CRS中升高的NF-κB p65至正常水平，由此推测，补肺益脾通窍汤能够抑制NF-κB p65激活，终止炎症介质的转录，减少炎症介质释放，限制炎症反应；并提高机体免疫力，减轻鼻黏膜炎症反应，达到治疗慢性鼻窦炎的目的。

4参考文献

[1]徐祥,梁华平.核因子-κB的结构和功能研究进展[J].细胞与分子免疫学杂志, 2002, 18(1):92-95.

[2]Wu MY，Hung SK,Fu SL. Immunosuppressive effects of fisetin in ovalbumin-induced asthma through inhibition of NF-κB activity[J]. J Agric Food Chem,2011，59 (19):10496-10504.

[3]黄小兵,梁平. NF-κB在感染和炎症促进肿瘤发生及发展中的作用[J].重庆医学,2008, 37(23):2741-2743.

[4]贾泰元， Benjamin H.S.Lau. 党参对鼠J774巨噬细胞吞噬活性的增强效应[J].时珍国医国药，2000,11(9):769-770.

[5]范伟忠，章荣华，傅剑云. 薏苡仁油对小鼠移植性肿瘤的影响[J].上海预防医学，2000，12(5):210.

[6]刘美华.黄芪的化学成分及药理作用研究进展[J].科学与财富,2014，13(3):252.

(编辑陶珠)

文章编号:1001-6910(2016)01-0065-03

中图分类号:R765.4+1

文献标志码:B

doi:10.3969/j.issn.1001-6910.2016.01.28

* 基金项目：南阳市科技攻关项目(2013GG062)

收稿日期：2015-04-24；修回日期：2015-08-31