Mcm2和Survivin在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤中的表达及意义的研究

王鹏 张丹 宋永欣 冉德军 孙德义

·临床医学·

Mcm2和Survivin在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤中的表达及意义的研究

王鹏 张丹 宋永欣 冉德军 孙德义

目的探讨Mcm2和Survivin在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(SNIP)中的表达及其相互关系。方法采用免疫组织化学技术分别检测Mcm2及Survivin在40例SNIP、20例鼻腔鳞状细胞癌(NSCC)及40例正常鼻腔黏膜(NM)组织标本中的表达。结果Mcm2和Survivin在NM、SNIP、NSCC 中的表达呈递增趋势,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.01)。SNIP中Mcm2和Survivin的表达呈正相关(r=0.913,P＜0.01)。结论Mcm2和Survivin均参与SNIP的发生、发展过程,可作为衡量SNIP恶变与复发的参考指标之一。

鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤；Mcm2；Survivin；增殖；凋亡

SNIP是鼻科常见的良性肿瘤,其在性质上虽属良性,但具有侵袭性、高复发率、易恶变和多中心的临床特点［1］。本实验采取免疫组织化学方法检测Mcm2和Survivin在NM、SNIP及NSCC中的表达情况,并对两者在SNIP中的表达进行了相关分析,探讨两者在SNIP中表达的临床意义,现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 收集大庆油田总医院耳鼻喉科2009年1月～2012年9月手术切除的SNIP组织40例,2010年9月～2012年9月切除的40例慢性单纯性鼻炎的部分NM组织以及本院2006年1月～2012年9月手术切除的20例NSCC组织。所有标本均经病理证实。

1.2 试剂 S-P免疫组化试剂盒,鼠抗人Mcm2单克隆抗体,兔抗人Survivin多克隆抗体。

1.3 方法 将三种组织类型蜡块标本制作成病理切片后,按S-P免疫组织化学试剂盒操作方法进行染色,所有病理切片染色均在相同条件下进行,每种组织类型染色均设阳、阴性对照。用已确认染色阳性切片做阳性对照,用PBS替代一抗孵育切片做阴性对照。

1.4 染色结果及计数方法 Mcm2的表达产物定位于细胞核,凡细胞核染成棕黄色或棕褐色者为染色阳性细胞。同时按以下方法计算Mcm2标记指数：每张切片于高倍镜下随机选5个高倍视野计数阳性细胞的平均值作为其标记指数,然后进行评级：标记指数＜5%为(-)；标记指数6%～25%为(+)；标记指数26%～50%为(++)；标记指数＞50%为(+++)。

Survivin的表达产物定位于细胞浆,凡细胞浆呈黄色、棕黄色、棕褐色者为染色阳性细胞。同时按以下方法计算Survivin的阳性表达结果：每张切片于高倍镜下随机选5个高倍视野计数阳性细胞的平均数,根据染色阳性细胞数和染色强度独立评判后综合判定：①阳性细胞数：≤5%记为0分,6%～25%记为1分,26%～50%记为2分,51%～75%记为3分,＞75%记为4分；②染色强度：无染色记为0分,淡黄色记为1分,黄色记为2分,棕黄色记为3分。两项结果乘积＞1分为阳性,≤1分为阴性。

1.5 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用t检验；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验；相关性采用Spearman法进行分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Mcm2和Survivin在三种组织类型中的阳性表达情况 Mcm2和Survivin在NM、SNIP、NSCC中的表达呈递增趋势,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.01)。见表1,表2。

2.2 SNIP中Mcm2和Survivin表达相关性分析 本研究显示,Mcm2与Survivin表达之间呈正相关(r=0.913,P＜0.01)。Survivin蛋白表达呈阳性的组织标本与Survivin蛋白表达呈阴性的组织标本相比,前者的Mcm2中位标记指数明显高于后者(P＜0.01)。见表3。

3 讨论

细胞增殖与细胞凋亡状态的平衡,是维持机体组织细胞数量稳定、清除突变细胞、防止细胞癌变所必须的。细胞增殖与凋亡状态平衡的紊乱与肿瘤的发生关系密切,如损伤的细胞不能启动相应的凋亡机制,体内细胞的增殖与凋亡两者间的状态就会失去平衡,两者平衡的破坏使存在基因缺陷的细胞获得生存优势,促使细胞基因突变的发生和恶性转化,最终促使肿瘤的发生发展。因此,细胞的增殖与凋亡状态的异常可能在SNIP的发生发展过程中起着重要作用。

Mcm2是近年来发现的一种较好地反映细胞增殖活性的标志物。在所有进入细胞周期的细胞中均有表达,但在静止期及分化成熟的细胞中则不表达,因此,在突变和增殖发育异常的细胞中,Mcm2可作为细胞增殖标记物来标记细胞所处的状态［2］。且Ramnath等［3］研究证实,Mcm2的细胞表达阳性度与细胞变异的严重程度相关。

本实验结果表明,Mcm2在NM中表达较少,但在SNIP、NSCC中表达范围和层次广泛、染色强度明显增强。Mcm2的蛋白标记指数也呈一递增趋势,符合三者细胞增殖活性逐一递增的规律。Gonzalez等［4］研究指出,Mcm2高表达,意味着随后的细胞突变转化增加。本实验中有些SNIP病例的Mcm2的标记指数较高,甚至达到NSCC的Mcm2中位标记指数,这说明在某些SNIP中存在有恶变倾向或恶变的病灶,这些Mcm2的标记指数较高的SNIP病例可能比Mcm2标记指数低的SNIP病例易发生复发或恶变。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族中的新成员。它可以抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂,对细胞周期和细胞凋亡界面的联系起重要作用。Survivin除了在胸腺、生殖腺中微弱表达外,在其他正常组织中均未表达,而在几乎所有恶性肿瘤中都有高表达［5］。研究表明,Survivin在几种前恶性损伤(如结肠息肉、乳腺腺瘤等)中表达,表明Survivin的表达可能出现于细胞恶性转化的早期［6］。因此,Survivin的检测可为诊断肿瘤及预测肿瘤的发生、发展、预后提供新的指标。

本实验结果显示,Survivin蛋白在NM中无明显表达,在SNIP及NSCC中表达逐渐升高,统计分析显示三者之间的差异具有统计学意义(P＜0.05)。SNIP中Survivin蛋白含量较高,并且Survivin在不同SNIP病例的染色表达强弱不等,Survivin强表达可能提示该肿瘤更趋向复发、恶变。

本实验中,Survivin蛋白阳性表达与阴性表达相比,Mcm2中位标记指数前者明显高于后者。这表明在SNIP的发生发展中高增殖和低凋亡可能同时存在,Mcm2促增殖作用和Survivin的凋亡抑制作用相互促进,使细胞增殖和凋亡之间的差距进一步扩大,使得肿瘤细胞获得生长优势。因此,SNIP中Mcm2与Survivin的表达水平有可能作为衡量SNIP恶变与复发的参考指标之一。

［1］邬旭,韩德民.鼻腔、鼻窦内翻性乳头状瘤的研究进展.国外医学耳鼻咽喉科学分册,2002 ,26(2):95-97.

［2］Gakiopoulou H,Korkolopoulou P,Levidou G,et al.Minichromosome maintenance proteins 2 and 5 in non-benign epithelial ovarian tumours: relationship with cell cycle regulators and prognostic implications.Br J Cancer,2007,97(8):1124-1134.

［3］Ramnath N,Hernandez FJ,Tan DF,et al.MCM2 is an independent predictor of survival in patients with non-small-cell lung cancer.Clin Oncol,2001,19(22):4259-4266.

［4］Gonzalez MA,Pinder SE,Callagy G,et al.Minichromosome maintenance protein 2 is a strong independent prognostic marker in breast cancer.J Clin Oncol,2003,21(23):4306-4313.

［5］Athanassiadou AM,Patsouris E,Tsipis A,et al.The significance of Survivin and Nectin-4 expression in the prognosis of breast carcinoma.Folia Histochem Cytobiol,2011,49(1):26-33.

［6］Kobayashi Y,Yukiue H,Sasaki H,et al.Developmentally regulated expression of survivin in the human thymus.Hum Immunol,2002,63(2):101-107.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.07.011

2015-12-10］

163000 大庆油田总医院耳鼻喉科

王鹏