肺炎支原体的快速液体培养与血清法的联合应用探讨

李　新，岳兴华

(天津中医药大学第一附属医院检验科，天津　300193)

肺炎支原体的快速液体培养与血清法的联合应用探讨

李新，岳兴华

(天津中医药大学第一附属医院检验科，天津300193)

[摘要]目的：探讨肺炎支原体(Mycoplasma pneumonia，MP) 快速液体培养及药敏与肺炎支原体抗体检测的联合应用的临床价值。方法：对同一患者分别取呼吸道标本及静脉血进行MP快速液体培养和血清中肺炎支原体抗体的测定，然后对进行快速法、血清法及快速加血清法进行统计学分析与比较。 结果：512例肺炎支原体快速培养标本中，阳性87例 ，检出率是16.99%。血清学抗体检测中，阳性138例，检出率26.76%。将这两种方法差异有统计学意义。但联合使用两种方法与血清法比较差异无统计学意义。结论：MP快速液体培养法无需特殊设备，操作简单，阳性者带有药敏结果，是目前比较理想的早期诊断方法之一，但要注意取材质量，适合各级医院推广，尤其社区医院。血清法特异性强，如能将快速培养与血清学检测联合应用则更加准确，减少假阳性和假阴性率的发生。

[关键词]肺炎支原体的快速液体培养；药敏；肺炎支原体抗体

Abstract：ObjectiveTo investigate the clinical value of fast liquid culture of Mycoplasma pneumonia (MP) and drug sensitivity combined with Mycoplasma pneumoniae antibody.MethodFor the same patient respiratory tract specimens of MP fast liquid culture and venous blood of mycoplasma pneumoniae antibody in serum were taken，and then compared by statistical analysis of the fast method，serum method and combinate method.Results512 cases of Mycoplasma pneumoniae rapid culture specimens，87 were positive，the detection rate was 16.99%.Serological antibody detection，138 cases were positive，the detection rate of 26.76%.These two methods were significant difference. But a combination of the two methods and serum were compared，the difference wasn′t statistically significant.ConclusionMP rapid liquid culture method without special equipment，simple operation，positivewith the drug sensitivity results，but pay attention to material quality.Is one of the ideal method for early diagnosis，suitable for all levels of hospitals，especially in community hospital.Method serum specificity，such as can be quickly combined application of culture and serological detection is more accurate，reduce the incidence of false positive and false negative rate.

[收稿日期：2015-02-12编校：郑英善]

Investigate of the serum method combined with fast liquid culture of Mycoplasma pneumoniaeLIXin，YUEXing-hua(DepartmentofClinicalLaboratory，TheFirstAffiliatedHospitalofTianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine，Tianjin300193,China)

Key Words:Fast liquid culture of Mycoplasma pneumoniae；Drug sensitivity；Mycoplasma pneumoniae antibody

近年来关于肺炎支原体MP,感染的报道日益增多,大环内酯类抗菌素在使用过程中出现了日趋严重的耐药性。由肺炎支原体引起的呼吸道感染的临床诊断基本上依赖于临床症状，因其病史和临床表现常常缺乏特异性，因此病原学的诊断非常困难。肺炎支原体的各种实验室检测手段不够特异、敏感、快速，因而临床价值有限。培养分离病原体被认为是诊断感染的金标准， 但分离培养肺炎支原体难度大、 耗时长、 不适用于肺炎支原体的感染诊断[1]。近年来MP快速液体培养已有商品试剂供应，但其临床应用价值文献报道差别较大。本研究将2013年对我院住院及门诊患者使用快速培养和血清抗体检测进行对比分析，现报告如下。

1资料与方法

1.1标本来源：所有标本均来自本院住院及门诊呼吸道感染的患者 ，严格按照标准操作规程采集质量合格的咽拭子和痰液及静脉取血。

1.2仪器与试剂：肺炎支原体快速液体鉴定与药敏试剂盒由郑州安图绿科生物工程有限公司提供。电热恒温箱一台。 肺炎支原体抗体检测试剂盒为日本富士瑞必欧株式会社产品。

1.3方法

1.3.1MP快速液体培养法：按使用说明书进行操作，用无菌咽拭子在被检测患者口腔喉部捻转数次或用无菌棉签在被检测患者痰标本捻转数次采集标本，置培养基瓶内搅动数次，挤压去除拭子。置于37℃孵箱中培养24 h后观察结果。培养基颜色由原红色变成清亮的淡黄色判为阳性 。如液体已浑浊即使变色也视为污染而不判为阳性，可用接种环蘸取一快速液体培养浑浊生长的标本于清洁玻片上，干燥后进行革兰染色，用显微镜下观察来证实是细菌或真菌污染。 培养基颜色不变色判断为阴性。

1.3.2肺炎支原体抗体检测：采用被动凝集法，按使用说明书进行操作，其利用MP细胞膜成分mac株致敏人工明胶粒子与人血清中存在的肺炎支原体抗体发生凝集反应， 其检测抗体效价结果以≥1∶40判断为阳性。

1.3.3联合检测阳性结果的判断：针对同一患者分别使用快速培养与血清法检测，其中一项为阳性者则视为联合检测结果阳性。

1.4统计学分析：采用SPSS13.0统计软件，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

不同方法检测肺炎支原体感染测定结果对比，见表1。

表1不同方法检测肺炎支原体感染测定结果比较

方法阳性数阴性数阳性率(%)快速培养8742516.99①②血清学检测13837427.09②联合检测15635630.47

注：与血清学检测比较，①P<0.001；与联合检测比较，②P>0.05

3讨论

国内外大多数研究显示，下呼吸道感染(包括社区和获得性肺炎CAP，慢性阻塞性肺疾病加重AECOPD以及支气管扩张急性加重AEB)严重威胁人类健康[2]，其发病率和死亡率也一直居高不下，其中由非典型病原体所致的感染不断增加，MP等非典型病原体已取代了肺炎链球菌的重要位置。故MP的诊断尤为重要。可肺炎支原体感染具有其临床症状不典型的特点，虽然传统MP分离培养是诊断的金标准，但其难度大，不能普及。PCR法具很高的特异性、 敏感性，但其要求操作技术高，仪器设备昂贵，不适合一般实验室开展。

选择血清法检测肺炎支原体抗体比培养法更简单且敏感，2 h即出结果。但是由于IgM抗体在发病5~7 d才产生[3]，早期患者假阴性率会较高，同时检测结果也因受患者年龄、免疫力等因素的影响造成婴幼儿及免疫力低下的患者易被漏检。当然也会有一部分已康复的患者因IgG在体内尚存被测出阳性。

肺炎支原体快速培养基是人工合成专为MP快速培养鉴定的液体培养介质，培养基中按照支原体的成长要求科学配置了支原体繁殖所需的蛋白质、糖类等营养成分及促进MP快速成长的生长因子。 其次，还加入了抑制其他微生物成长的抗生素， 在一定时间内控制其他微生物的繁殖。其原理就是利用由于繁殖的过程中其代谢物会改变培养基的pH值，在培养基中的指示剂会随着pH值的改变而呈现颜色的变化。快速液体培养法由于其操作简单无需特殊设备，24 h基本解决问题[4-5]。此方法的特点是属于无创检测，患者没有痛苦，尤其为早期确诊提供便利，可提早对症治疗，从而控制病程发展。为验证是否真能抑制细菌和真菌的生长，本人曾将纯培养的白假丝酵母菌、大肠埃希菌、干燥奈瑟氏菌、草绿色链球菌、不动杆菌和表皮葡萄球菌分别放入液体培养基的小瓶中，经37℃ 24 h培养后发现不动杆菌和表皮葡萄球菌的小瓶浑浊变色，其他小瓶仅仅浑浊没变色。同时也将做快速培养浑浊的小瓶加以验证，结果相符。经实验观察可通过对液体颜色及浑浊情况来判断阴阳性。

从总体结果来看，快速法阳性率还是低于血清法，原因之一就是培养法标本取材质量还应再提高。快速法是2013年新开设的实验方法，通过比较可以总结出快速培养法优点是对发病早期或不易产生抗体的有优势，同时可得到药敏结果。为临床医生提供帮助，患者属于无创检测。检测MP抗体的优点是敏感、特异，可通过观察抗体梯度的变化了解病情。缺点是两种方法都不是金标准，存在一定的假阴性和假阳性。所以最好将两种方法联合检测。

参考文献4

[1]袁应华，刘瑾，成洁，等.快速液体培养法检测呼吸道标本中的肺炎支原体[J].国际检验医学杂志，2013，34(3)：343.

[2]熊讳虹，邓锐，付荣荣，等.非典型病原菌致成人社区获得性肺炎患者的临床特点分析[J].中华结核和呼吸病杂志， 2010， 33(5)： 646.

[3]曹云.肺炎支原体培养与抗肺炎支原体抗体检测的临床评价[J].实用医技杂志，2008,15(18)：2338.

[4]曹丽丽.儿童肺炎支原体快速培养的临床分析[J].吉林医学，2013,34(20)：4014.

[5]田瑛，赵安成.呼吸科门诊肺炎支原体感染及体外药敏分析[J].医学检验与临床，2013，23(4)：29.