甲状腺乳头状癌组织Bag-1、Bcl-2蛋白表达变化及意义

孙亚楠，刘晓虹，毛晓韵，金泉秀，苏芃，金锋(中国医科大学附属第一医院，沈阳110001)

甲状腺乳头状癌组织Bag-1、Bcl-2蛋白表达变化及意义

孙亚楠，刘晓虹，毛晓韵，金泉秀，苏芃，金锋
(中国医科大学附属第一医院，沈阳110001)

摘要:目的观察甲状腺乳头状癌组织Bag-1、Bcl-2蛋白的表达变化，并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法检测120例份甲状腺乳头状癌及癌旁配对正常甲状腺组织中Bag-1与Bcl-2蛋白，并分析两种蛋白表达与甲状腺乳头状癌临床病理参数的关系。结果甲状腺乳头状癌及癌旁配对正常甲状腺组织中Bag-1表达的阳性率分别为72.5%、9.2%，Bcl-2表达的阳性率分别为81.7%、11.7%，两者比较，P均＜0.05。不同肿瘤直径、淋巴结转移情况甲状腺乳头状癌肿瘤组织Bag-1、Bcl-2蛋白表达比较，P均＜0.05。甲状腺乳头状癌组织中Bag-1与Bcl-2蛋白阳性表达呈正相关( r =0.797，P＜0.01)。结论甲状腺乳头状癌Bag-1与Bcl-2蛋白高表达，且二者表达密切相关，与肿瘤发生发展有关。

关键词:甲状腺肿瘤;甲状腺乳头状癌; Bag-1蛋白; Bag-2蛋白

Expression changes of Bag-1 and Bcl-2 in papillary thyroid carcinoma tissues and the significance

SUN Ya-nan1，LIU Xiao-hong，MAO Xiao-yun，JIN Quan-xiu，SU Peng，JIN Feng
( 1 The First Affiliated Hospital of China Medical University，Shenyang 110001，China)

Abstract:Objective To observe the expression changes of Bag-1 and Bcl-2 in papillary thyroid carcinoma ( PTC) tissues and to investigate the significance.Methods The Bag-1 and Bcl-2 expression was analyzed by immunohistochemistry in 120 cases of PTC tissues and paired adjacent normal thyroid tissues.The relationships between the expression of the two proteins and the clinicopathological parameters of PTC were analyzed.Results The Bag-1 positive expression rates in PTC tissues and paired adjacent normal thyroid tissues were 72.5% and 9.2%，and the Bcl-2 positive expression rates were 81.7% and 11.7%，respectively ( all P＜0.05).Furthermore，both Bag-1 and Bcl-2 protein positive expression was significantly associated with lymph node metastasis and tumor size in PTC ( all P＜0.05).Bag-1 positive expression was positively correlated with the Bcl-2 positive expression ( r = 0.797，P＜0.01).Conclusion In PTC tissues，the Bag-1 and Bcl-2 expression is high，and their expression is closely related，which plays an important role in the development of PTC.

Key words:thyroid neoplasms; papillary thyroid carcinoma; Bag-1;B-cell lymphoma 2

甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤之一，近年来发病率呈逐年上升趋势［1］，甲状腺乳头状癌是其中最常见的一种，约占甲状腺癌的90%。Bag-1基因于1995年首先被报道［2］，其分泌蛋白是一种多功能结合蛋白，可与酪氨酸激酶生长因子受体、肝细胞生长因子、血小板衍生生长因子相联结，加强其功能而抑制凋亡，还可以与Hsp70、孕激素受体、糖皮质激素受体等多种信号因子相结合，调节其功能［3］。Bcl-2是从B淋巴细胞中首先分离出来的一种原癌基因［4］，过度表达或失调均可阻断细胞凋亡，延长细胞寿命，从而导致细胞过度增殖而形成肿瘤。Bag-1与Bcl-2形成复合物后抗细胞凋亡能力

增强，还可上调Bcl-2的抗凋亡能力［2，5］。然而二者在甲状腺癌发生发展中的作用尚不清楚。本实验观察了甲状腺乳头状癌组织Bag-1、Bcl-2蛋白的表达变化，并探讨其意义。

1　材料与方法

1.1标本来源收集中国医科大学附属第一医院病理科2007年1月～2012年10月无家族史新鲜甲状腺乳头状癌癌标本及癌旁配对正常甲状腺组织120例份。标本来源的患者年龄27～81岁、中位年龄43.6岁，所有患者均为初次手术，其手术切除标本经常规石蜡包埋、固定后行HE染色，经2位病理医生按世界卫生组织( WHO)《甲状腺和甲状旁腺肿瘤组织学分类》( 2006新版)标准读片确认其病理类型。

1.2 Bag-1、Bcl-2蛋白检测方法及结果判定石蜡切片脱蜡、水化后高压抗原修复。采用SP法行Bag-1(鼠抗人Bag-1多克隆抗体sc-56003，1∶150，Santa Cruz，美国)及Bcl-2(鼠抗人Bcl-2多克隆抗体sc-509，1∶200，Santa Cruz，美国)的免疫组化染色(即用型免疫组织化学超敏UltraSensitiveTMSP试剂盒KIT-9701，福建迈新)，DAB显色( DAB-1031，福建迈新)，苏木素复染。采用双盲评分法对免疫组化结果进行判定，Bag-1蛋白阳性反应颗粒定位于胞核，Bcl-2蛋白阳性反应颗粒定位于胞质，在排除非特异性染色的前提下显微镜下凡胞核/胞质出现清晰的棕黄色染色的细胞即为阳性细胞，在200×视野下随机选取5个视野(每个视野观察不少于200个细胞)，按阳性细胞所占的百分比及着色强度进行结果判定。按着色强度评分:无着色计为0分;浅黄色计为1分;黄色计为2分;棕黄色计为3分。按阳性细胞数占同类细胞数的百分比评分:阴性计为0分，阳性细胞百分比≤10%计为1分，11%～50%计为2分，51%～80%计为3分，＞80%计为4分。取两项评分的乘积作为总积分，≤1为阴性，＞1为阳性。

1.3统计学方法采用SPSS15.0统计软件。计数资料比较用χ2检验，两变量间的相关性检验采用直线相关分析法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

甲状腺乳头状癌及癌旁配对正常甲状腺组织中Bag-1表达的阳性率分别为72.5% ( 87/120)、9.2% ( 11/120)，两者比较，P＜0.05。甲状腺乳头状癌及癌旁配对正常甲状腺组织中Bcl-2表达的阳性率分别为81.7%( 98/120)、11.7%( 14/120)，两者比较，P＜0.05。Bag-1和Bcl-2蛋白表达与甲状腺乳头状癌临床病理参数的关系见表1。不同肿瘤直径、淋巴结转移情况甲状腺乳头状癌肿瘤组织Bag-1、Bcl-2蛋白表达比较，P均＜0.05。87例Bag-1阳性表达的甲状腺癌组织中有77例Bcl-2亦为阳性表达。甲状腺乳头状癌组织中Bag-1与Bcl-2蛋白阳性表达呈正相关( r =0.797，P＜0.01)。

表1　 Bag-1和Bcl-2蛋白表达与甲状腺乳头状癌临床病理参数的关系(例)

3　讨论

肿瘤的发生与细胞凋亡和增殖失衡有关［6］。肿瘤细胞的凋亡受多种基因表达方式改变的影响，Bag-1和Bcl-2基因是参与细胞凋亡调控的主要基因。Bag-1基因位于9p12号染色体，是一种新的非Bcl-2家族的Bcl-2结合蛋白，主要功能为抑制细胞凋亡。Bag-1蛋白具有4种亚型［7］，即p50 ( Bag-1L)，p46( Bag-1M)，p33( Bag-1S)和p29，是由共同的mRNA通过选择不同的起始部位进行翻译产生的。Bag-1L主要分布在细胞核，Bag-1M及Bag-1S则主要分布在细胞质，p29主要分布在细胞膜［8］，但是他们都拥有共同位于羧基末端的Bag功能区。研究［9］表明，Bag功能区可与Hsp70结合而进一步发挥作用。Bag-1在正常组织中几乎不表达，在乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、口腔鳞癌等恶性肿瘤中都有阳性表达［10～14］。然而文献中关于Bag-1与肿瘤预后关系的结论并不一致，有的提出Bag-1阳性表达与肿瘤的发生及恶性程度有关，恶性程度越高，Bag-1蛋白阳性表达率也越高，有的则表示Bag-1是预后良好的指标。Ni等［15］对65例肝细胞癌组织研究发现，Bag-1在肝癌细胞核中高表达，进一步统计分析表明Bag-1核表达与肝癌组织学分级相关，提示较差预后，同时该实验用小RNA干扰技术敲掉Bag-1高表达的HepG2细胞系中的Bag-1基因，结果发现肿瘤细胞迁徙及增殖能力明显下调。Liu

等［16］发现，对比正常的乳腺癌MCF-7细胞系，三苯氧胺耐药的MCF-7细胞系( TAMR/MCF-7)中Bag-1高表达，下调TAMR/MCF-7细胞系中Bag-1基因表达，可以显著增强该细胞系对三苯氧胺治疗的敏感性。相反的，Van der Zee等［12］对217例根治性切除的胰头或壶腹周围癌石蜡标本进行免疫组化染色，结果显示80%癌组织存在Bag-1核表达，且预后分析显示，Bag-1核表达是胰头癌预后良好的指标。本实验发现，相比癌旁正常组织，Bag-1在甲状腺乳头状癌组织中高表达，阳性表达率为72.5%，且肿瘤直径越大、淋巴结转移越快，其表达越高，提示Bag-1的高表达可能预示着甲状腺癌的高侵袭性和不良预后。

Bcl-2基因通过广泛抑制各种刺激因素诱导的细胞凋亡，延长细胞活力而发挥生物学作用。Bcl-2过度表达与多种肿瘤的发生发展密切相关，可导致DNA受损的细胞持续生存，突变产物聚集，从而导致肿瘤的发生发展。Ito等［17］研究结果显示，Bag-1 与Bcl-2在甲状腺肿瘤中的表达具有相关性，二者可能共同参与肿瘤间变性转化过程。刘主才等［18］研究了48例甲状腺癌、11例甲状腺腺瘤中Bag-1及Bcl-2蛋白的表达情况，并进行相关性分析，结果显示Bag-1、Bcl-2蛋白在甲状腺癌中的表达率分别为66.7%及75.0%，均高于甲状腺腺瘤，且甲状腺癌中两基因的表达呈正相关，Bag-1表达水平与甲状腺癌组织学分型、临床分期及淋巴结转移均有相关性。陈建国等［19］构建反义双靶区重组载体pVITRO2-AsBAG-1-Bcl-2，发现其能抑制胃癌细胞系SGC-7901的细胞增殖并引起细胞凋亡。本实验发现，相比癌旁正常组织，Bcl-2在甲状腺乳头状癌组织中高表达，阳性表达率为81.7%，且肿瘤直径越大、淋巴结转移越快，其表达越高。本研究相关性分析显示，甲状腺乳头状癌组织中Bag-1与Bcl-2蛋白阳性表达呈正相关，提示二者可能在调节甲状腺滤泡上皮的凋亡中扮演重要角色，能使更多的上皮细胞具有逃避凋亡的能力，甲状腺癌的发生可能与Bag-1及Bcl-2过量表达有关。

可见，甲状腺乳头状癌Bag-1与Bcl-2蛋白表达增多，且二者表达密切相关，与肿瘤发生发展有关。

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收稿日期:( 2015-05-24)

通信作者简介:金锋( 1963-)，男，教授，博士生导师，主要研究方向为乳腺癌发生发展分子机制研究及乳腺疾病外科手术治疗临床工作。E-mail: jinfeng66cn@ hotmail.com

作者简介:第一孙亚楠( 1982-)，女，主治医师，讲师，主要研究方向为肿瘤发生发展分子机制研究及普通外科手术治疗临床工作。E-mail: night408@163.com

基金项目:国家自然科学基金资助项目( 81201886)。

文章编号:1002-266X( 2015) 31-0011-03

文献标志码:A

中图分类号:R736.1

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.31.004