高效液相色谱法测定兰索拉唑含量

张思雅+何敬琦

摘要：目的：采用高效液相色谱法建立兰索拉唑含量测定方法。方法：AlltimaTM C18（4.6mm×250mm，5μm）为色谱柱；流动相为甲醇-水-三乙胺-磷酸（600：400：5：1.5）[用磷酸溶液（1→10）调节PH值至7.3]；检测波长为284nm；流速为1.0ml/min。结果：本方法加样回收率测定平均回收率为100.08%，RSD为0.42%（n=6）。准确度试验符合测定要求。兰索拉唑浓度在0.09mg/ml～0.21mg/ml范围内，具有良好的线性关系。重复性、中间精密度、进样精密度试验均符合方法学试验要求。供试品溶液在室温条件下5小时内稳定。结论：该方法简便、快速、准确、重复性好，可有效控制注射用兰索拉唑的含量。

关键词：高效液相色谱法 兰索拉唑 含量测定

中图分类号：O657 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2015）02（b）-0000-00

兰索拉唑为苯并咪唑衍生物，为继奥美拉唑之后的新一代的质子泵抑制剂，能有效地抑制胃酸分泌，治疗胃酸相关性疾病。国外大量临床应用证明，兰索拉唑对消化性溃疡有很好的疗效，由血液吸收入壁细胞后作用于壁细胞质子泵即抑制H+/K+-ATP酶的活性，从而持续抑制胃酸分泌。

兰索拉唑不耐酸，目前比较普遍给药方式为口服的兰索拉唑肠溶片和肠溶胶囊，起效较慢，而改变给药途径为静脉给药的注射用兰索拉唑提高了兰索拉唑的生物利用度，缩短了起效时间。为保证产品质量，我们拟用高效液相色谱法对其含量测定方法进行研究。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪；AlltimaTM C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；MS105型精密电子天平（梅特勒）；兰索拉唑对照品（批号：100709-201304，含量为99.8%，中国食品药品检定研究院）；注射用兰索拉唑（30mg，以C16H14F3N3O2S计，自制）；甲醇、三乙胺、磷酸均为色谱纯，水为注射用水。

2 含量测定方法

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，AlltimaTM C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水-三乙胺-磷酸（600：400：5：1.5）[用磷酸溶液（1→10）调节PH值至7.3]，检测波长为284nm；流速为1.0ml/min；柱温30℃；进样量20μl。调节流动相比例使兰索拉唑峰的保留时间约为16分钟。

2.2 测定法

精密称定样品，约含兰索拉唑15mg，置100ml容量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml与甲醇-水（60：40）溶液适量，超声使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取兰索拉唑对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

3 方法学试验

3.1 准确度试验

按照制剂处方，分别称取18mg、15mg、12mg的兰索拉唑对照品各3份，分别加入处方量的辅料于同一100ml容量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml与甲醇-水（60：40）溶液适量，超声使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液分别作为测定浓度120%、100%、80%的供试品溶液，按外标法以峰面积计算测得量和回收率，试验结果见表1。

表1 准确度试验结果

加入量（mg）

测得量（mg）

加样回收率（%）

平均回收率（%）

RSD（%）

18.01

18.07

100.33

100.08

0.42

18.03

17.99

99.78

18.10

18.08

99.89

15.02

15.01

99.93

15.04

15.06

100.13

15.08

15.16

100.53

12.02

12.12

100.83

12.01

11.95

99.50

12.05

12.03

99.83

结果表明：含量测定平均回收率为100.08%，RSD为0.42%，准确度试验符合测定要求。

3.2 线性范围试验

储备液的制备：称取兰索拉唑对照品15mg，置50ml容量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml与甲醇-水（60：40）溶液适量，超声使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀释至刻度，作为储备液。

精密量取上述溶液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml，分别置10ml容量瓶中，加甲醇水（60：40）溶液稀释至刻度，作为线性试验溶液。分别精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以兰索拉唑浓度与相应峰面积计算线性回归方程，y=13263x-368.8，相关系数r=0.9994。结果表明，兰索拉唑浓度在0.09mg/ml～0.21mg/ml范围内，具有良好的线性关系。

3.3 重复性试验

取供试品，照含量测定项下方法试验，重复测定6次，计算其平均值。

结果表明：6次测定的平均含量为标示量的101.98%，RSD为0.21%，平行性好，重复性试验符合测定要求。

3.4 溶液稳定性试验

取供试品，照含量测定项下方法试验，每隔1小时测定一次，共测定5次，计算其平均值。

结果表明：兰索拉唑平均含量为标示量的101.44%，RSD为0.36%，供试品溶液在室温条件下5小时内稳定。

3.5 进样精密度试验

取供试品溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，连续进样6次。

结果表明：兰索拉唑平均峰面积为11891.5，RSD为0.56%，该方法进样精密度良好。

3.6 中间精密度试验

取供试品，照含量测定项下方法试验，变动因素为不同日期，不同人员。计算其平均值。

结果表明：兰索拉唑平均含量为标示量的101.48%，RSD为0.41%，该测定方法中间精密度良好。

4 样品含量测定

取三批供试品，照含量测定方法分别进行测定。结果表明：三批供试品含量均为98.0%～102.0%之间。

5 讨论

建立的高效液相色谱法通过准确度试验、线性范围试验、重复性试验、溶液稳定性试验、进样精密度试验及中间精密度试验等方法学试验，表明该含量测定方法具有准确、可靠、灵敏度高等特点，可有效控制注射用兰索拉唑的含量。

参考文献

[1]兰索拉唑质量标准 中国药典2010年版第一增补本 281.

[2]杨艳等. HPLC测定注射用兰索拉唑中兰索拉唑的含量和有关物质. 中国药学杂志[J]. 2006.4.41（7），538-540.

[3]郭水柱等. HPLC测定注射用兰索拉唑中兰索拉唑的含量. 中医临床研究[J]. 2014.6.17， 137-140.