miR-200在肺癌细胞系中的表达及其对肺癌细胞迁移能力的影响

石丽娟 孙 洁 金铁峰

(延边大学病理学教研室 吉林 延吉 133002)

肺癌是临床上的常见病，其发病率及致死率均高居恶性肿瘤的首位。肺癌患者在发病早期其临床症状较不典型，其病情在得到确诊时往往已经进入晚期，其生存率较低。肺癌患者体内的肿瘤发生转移及复发是导致其预后极差最主要的原因。近年来的研究表明，miRNA-200可调控L1CAM的表达，促使肺癌细胞与血管壁粘附，进而可促使其发生转移。本实验旨在研究miRNA-200在人肺癌细胞系中表达的情况，以便为临床上治疗肺癌提供新的实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 肺癌细胞株 H1792、HCC2279、PC9、H1299、CALU-1、H2052、PC7、H2122、H322、SQ-5、A549、EBC-1、H157、 H1650均购自ATCC公司。RPMI 1640培养基、胎牛血清均购自Gibco公司。胰蛋白酶购自Santa Cruz 公司。

1.2 方法 对H1792等肺癌细胞株进行RT-PCR检测的方法是：将H1792等肺癌细胞株置于含10%胎牛血清、1%双抗的1640培养基中，在培养条件为37℃、5%CO2的细胞培养箱中进行常规培养。将肺癌细胞用PBS进行清洗，用Triozol进行充分裂解，在其中加入氯仿进行震荡，加入异丙醇进行静置，然后进行PCR处理，相关的温度条件为：变性温度为95℃、退火温度为58℃、延伸温度为72℃。对PCR产物进行凝胶电泳操作，并将其置于凝胶成像仪中分析检测结果。

1.3 统计学分析 采用 SPSS 17.0 统计软件对本研究中的数据进行统计，计量资料以均值±标准差（±s）表示，在进行两组均数间的比较时采用 t 检验。

2 结果

2.1 对miR-200在本组肺癌细胞系中表达情况的分析 在 H1792等16种肺癌细胞系中检测miR-200的相对表达量，如图1所示。检测结果表明，H1792、HCC2279、PC9、H1299、CALU-1、H2052、HCC44及 H322等 肺 癌细胞系中miR-200的表达量较高，SQ-5、A549、EBC-1、H157、H358及H1650等肺癌细胞系中miR-200的表达量较低。从这些肺癌细胞系中选择表达量最高的H1792和表达量最低的H1650两个肺癌细胞系进行进一步的研究。

2.2 对miR-200在肺癌细胞系中的高表达在促进其迁移方面的作用分析 将miR-200呈高表达的H1792肺癌细胞系和miR-200呈低表达的H1650肺癌细胞系在6孔板上进行培养后统一进行划痕实验，在48个小时后进行拍照分析，结果表明，与miR-200呈低表达的H1650肺癌细胞系相比，miR-200呈高表达的H1792肺癌细胞系其迁移的速度较快，差异有统计学意义（p＜0.05）。详情见图2。

图1 对miR-200在本组肺癌细胞系中表达情况的分析

图2 经划痕实验证实，miR-200的高表达可促进肺癌细胞系的迁移(* p＜0.05)

3 讨论

肺癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一。早期肺原位癌患者的生存率较高，但其体内的肿瘤细胞一旦发生转移其预后可显著变差。找出可参与肺癌转移相关的分子靶点和信号通路是治疗肺癌的关键。miR-200在肿瘤发生发展的过程中可起到重要的作用，但其作用机制仍存在一定的争议。研究发现，miR-200家族（miR-200a/miR-200b/miR-200c/miR-141/miR429）在肿瘤细胞中的表达与上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的发生密切相关，在EMT的发生和肿瘤的进展中可发挥重要的作用[1]。miR-200可通过与ZEB形成负反馈回路调控EMT及肿瘤细胞的活性[2,3]。P53是miR-200的上游转录调节因子，可激活miR-200[4]。

我们的研究表明，在16种肺癌细胞系中miR-200的表达量各不相同。miR-200呈高表达的细胞系其迁移能力明显较强。可见，miR-200可能在肺癌发生侵袭迁移甚至远处转移的过程中起到重要的作用，其具体的作用机制有待于进一步的研究加以证实。

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