胰腺癌组织HSP90α、VEGF-C蛋白表达及其临床意义

·短篇论著·

胰腺癌组织HSP90α、VEGF-C蛋白表达及其临床意义

周琎潘超杨士勇殷少华黄冠戴树龙杨坤兴

胰腺癌恶性程度高、侵袭力强、进展快、预后极差。诊断后的中位生存期只有5 ～6个月，发病后5 年生存率仅为5%～10%，死亡率在各肿瘤中位居第4位[1]。目前手术是唯一根治的方法，但有机会接受手术治疗的患者不到30%[2]，并且术后5年的存活率也低于20%[3-4]。探讨胰腺癌的发生发展机制，阐明胰腺癌侵袭、转移有关的分子机制，寻找胰腺癌调控通路上的靶点对于胰腺癌的诊断、治疗至关重要。本研究检测胰腺癌组织热休克蛋白90α(heat shock proteins 90α，HSP90α)、血管内皮生长因子 C(VEGF-C)的表达，探讨它们与肿瘤临床病理参数间的相关性。

一、资料与方法

1．资料：选择2006年1月至2012年2月南京医科大学附属南京第一医院收治的临床资料完整的胰腺癌患者40例。其中男性26例，女性14例，年龄52～74岁。所有患者均未接受放化疗，均行外科手术且术后病理证实为胰腺癌。

2．免疫组化染色：所有手术标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋、连续切片，采用二步法免疫组化染色法检测HSP90α、VEGF-C蛋白表达。兔抗人HSP90α单抗、兔抗人VEGF-C多抗均购自美国EPITOMIC公司，按说明书操作。以已知的乳腺癌HSP90阳性组织、已知的结肠癌VEGF阳性组织作为阳性对照，以PBS替代一抗作为阴性对照。细胞质和(或)细胞核中出现明显的棕黄色颗粒为HSP90α阳性染色，细胞质内出现棕黄色颗粒为VEGF-C阳性染色。每张切片随机选取5个400倍视野，观察染色强度及计算阳性细胞百分比。阳性细胞5%以下为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分；细胞无着色为0分，棕黄色为1分，棕色、粗颗粒状为2分，棕褐色、小块状为3分。两分相乘， 0分为-，1～4分为+，5～8分为++，≥9分为+++。

3．统计学处理：采用SPSS18.0统计软件包进行统计学分析。计数资料以百分率表示，采用χ2检验，胰腺癌组织HSP90α、VEGF-C表达的相关性采用Wilcoxon秩和检验。P<0.05为差异具有统计学意义。

二、结果

1．胰腺癌组织HSP90α、VEGF-C表达：胰腺癌组织HSP90α阴性表达11例，+、++、+++表达分别为4、20、5例；VEGF-C阴性表达4例，+、++、+++表达分别为6、20、10例(图1)。癌旁正常胰腺组织HSP90α阴性表达33例，+、++表达分别为6、1例；VEGF-C阴性表达30例，+、++分别为6、4例。胰腺癌组织HSP90α、VEGF-C阳性表达率分别为72.5%(29/40)、90%(36/40)；癌旁正常胰腺组织的阳性表达率分别为17.5%(7/40)、25%(10/40)。胰腺癌组织的阳性表达率均显著高于癌旁正常胰腺组织，差异有统计学意义(P值均<0.05)。

DOI:10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2015.02.018

作者单位：210006南京，南京医科大学附属南京医院(南京第一医院)普外科

通信作者：杨坤兴，Email: plt308@163.com

图1　胰腺癌组织HSP90α(1A)、VEGF-C(1B)表达(免疫组化　×400)

2．胰腺癌组织HSP90α、VEGF-C表达与临床病理参数间的关系：HSP90α、VEGF-C表达水平与患者性别、年龄及肿瘤大小均无关(P值均>0.05)，而与肿瘤组织分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P值均<0.05)。肿瘤组织分化程度低，有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者的HSP90α、VEGF阳性表达率高(表1)。

3．胰腺癌组织HSP90α、VEGF-C表达的相关性：HSP90α、VEGF-C表达均阳性29例，均阴性4例，单纯VEGF-C阳性7例，无单纯HSP90α阳性例。胰腺癌组织HSP90与VEGF-C表达呈正相关(r=0.541，P<0.05)。

讨论热休克蛋白(HS)是一种高度保守的细胞应激蛋白，根据分子量的大小分为4个家族：HSP90家族、HSP70家族、 HSP60家族及小分子HSP家族。HSP90是一种十分活跃的分子伴侣蛋白，有4种亚型，胞质内有HSP90α和HSP90β两型。多种蛋白信号转导都有赖于HSP90的参与。HSP90通过分子伴侣作用与其客户蛋白结合，稳定客户蛋白构象，保持客户蛋白活性，防止其被泛素化途径降解。肿瘤细胞通过HSP90的帮助维持细胞增殖、抑制细胞的凋亡。HSP的客户蛋白包括IGF-1R、EGFR、HIF-1a、AKT1、RAF-等[5]，多达100多种。HSP90在乳腺癌、黑色素瘤、结肠癌、白血病等高表达，且与肿瘤的恶性程度密切相关[6]。本研究结果表明，HSP90α在胰腺癌组织中高表达,胰腺癌HSP90α阳性表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关，提示HSP90α参与胰腺癌的侵袭及转移。

表1　胰腺癌组织HSP90α、VEGF-C表达与肿瘤临床病理参数的关系

VEGF是目前研究较多的一类因子，它是一种较强的促进血管生成的细胞因子，属于血小板源性生长因子超家族成员之一。VEGF家族包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、PIGF。VEGF通过与细胞膜上的受体结合，介导细胞内酪氨酸激酶磷酸化而发挥一系列的生理功能，通过与其特异性的受体结合而发挥多中心生物学效应[7]。VEGF的高表达与肿瘤细胞的侵袭和转移也密切相关。肿瘤细胞通过分泌VEGF来促进血管内皮细胞的分裂和生长，诱导新生血管的生成，而阻断VEGF信号转导可以抑制其表达，抑制肿瘤血管及淋巴管的生成，达到抑制肿瘤生长的目的。亓宪银等[8]报道，非小细胞肺癌组织VEGF-C的表达与肺癌的淋巴结转移、分化程度及肿瘤TNM分期显著相关。张胜辉等[9]报道，VEGF高表达患者发生淋巴结转移的可能性明显增加。本研究结果也显示，胰腺癌组织VEGF-C高表达，并且与肿瘤淋巴结转移、分化程度及TNM分期相关。

HSP90的一些客户蛋白在促存活信号通路中发挥作用，信号通路被激活时上调表达促增殖转录因子，下调表达促凋亡因子，肿瘤细胞凋亡受到抑制[10]。VEGF也是HSP90的一种重要客户蛋白存在于信号通路中。当HSP90活性被抑制时，VEGF、IGF-1R、Bcl-2等依赖于HSP90的客户蛋白会降解，促增殖信号通路被抑制，肿瘤细胞发生凋亡。肿瘤细胞启动新生血管生成依赖于VEGF途径。Sun等[11]报道，VEGF在血管生成过程中需要HSP90的支持以达到血管内皮细胞的稳定生成。而HSP90抑制剂可以通过两种途径阻断VEGF通路。第一种途径是HSP90抑制剂通过抑制低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor，HIF)的活性显著减少VEGF的生成[12]。HIF是依赖于HSP90的转录因子，当HSP90被抑制时，作为分子伴侣的HSP90就不能稳定HIF的功能、状态，HIF也就难以上调下游基因VEGF的表达。其次，HSP90也参与维持VEGF受体蛋白稳定。HSP90抑制剂能诱导它们的降解，阻止内皮细胞增殖和分化，进而抑制肿瘤新生血管生成[10,12]。本研究结果显示，胰腺癌组织HSP90α及VEGF-C表达呈正相关关系，这也为HSP90、VEGF之间的联系添加了新的实验证据。

参考文献

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收稿日期：(2014-11-17)

(本文编辑：吕芳萍)