乌鸡白凤丸对大鼠实验性前列腺炎纤维化的影响

2016-01-09 03:25董亚楠,张鑫
吉林中医药 2015年10期
关键词:纤维化

乌鸡白凤丸对大鼠实验性前列腺炎纤维化的影响

董亚楠1,张鑫2*

(1.郑州澍青医学高等专科学校,河南 郑州 450064;2.河南科技大学医学院,河南 洛阳 471003)

摘要:目的探讨乌鸡白凤丸对大鼠实验性前列腺炎纤维化的影响。方法采用消痔灵注射液前列腺内注射制作慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型。观察各组大鼠前列腺病理学改变及组织纤维化程度。结果乌鸡白凤丸能减轻慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺的炎症反应和纤维化程度(P<0.05)。结论乌鸡白凤丸有改善大鼠慢性非细菌性前列腺炎纤维化的作用,其机制可能与降低TGF-β1的表达有关。

关键词:乌鸡白凤丸;慢性非细菌性前列腺炎;纤维化;大鼠

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.10.029

中图分类号:R285.5文献标志码: A

文章编号:1003-5699(2015)10-1068-03

基金项目:河南省教育厅2011年度自然科学研究计划(2011A360001)。

作者简介:董亚楠(1987-),女,硕士研究生,主要从事组织学科研工作研究。

收稿日期:(责任编辑:赵玉芝2014-11-11)

*通信作者:张鑫,电子信箱-xzzp@haust.edu.cn

Impact of Wujibaifengwan on prostatic fibrosis of rats with chronic nonbacterial prostatitis

DONG Yanan1,ZHANG Xin2*

(1.Zhengzhou Shuqing Medical College,Zhengzhou 450064,China;

2.Medical College of Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,Zhengzhou Province,China)

Abstract:ObjectiveTo study the impact of Wujibaifengwan on prostatic fibrosis of rats with chronic nonbacterial prostatitis (CNP).MethodsThe model of chronic nonbacterial prostatitis in rats was established by injecting into the prostates with Xiaozhiling solution.The prostatic pathological changes and fibrosis of rats were observed.ResultsThe inflammatory reactions and fibrosis of prostates in rats with chronic nonbacterial prostatitis had been improved after treated with Wujibaifengwan (P<0.05).ConclusionWujibaifengwan is effective to improve the fibrosis of rats with chronic nonbacterial prostatitis.The mechanism is probably related with the decrease production of TGF-β1.

Keywords:Wujibaifengwan;CNP;fibrosis;rat

乌鸡白凤丸处方来源于《寿世保元》中的乌鸡丸,经加减化裁而成,它虽是传统的妇科良方,但依据中医学“异病同治”“证同治同”的原则,已广泛地应用于妇科“经”“带”疾病以外的其他疾病的治疗[1-2]。临床有应用乌鸡白凤丸治疗前列腺炎的报道,但缺乏乌鸡白凤丸治疗前列腺炎的机制研究[3-7]。本实验主要通过观察乌鸡白凤丸对消痔灵所致的慢性非细菌性前列腺炎(CNP)大鼠前列腺间质纤维化的影响并探讨其作用机制,从而为其临床应用提供实验依据。

1材料与方法

1.1实验动物清洁级健康雄性SD大鼠40只,体质量450~500 g,5月龄,由河南科技大学医学院实验动物中心提供。

1.2主要药品及试剂乌鸡白凤丸购自北京同仁堂制药厂;前列泰购自陕西功达制药有限公司;消痔灵注射液购自吉林省集安益盛药业股份有限公司;抗TGF-β1鼠源性单克隆抗体购自Santa Cruz;免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3仪器OLYMPUS光学显微镜,蛋白电泳仪及电转仪。

1.4大鼠造模根据文献[8-10],实验大鼠用1%戊巴比妥钠腹腔注射,无菌条件下取下腹正中切口,提出膀胱及两侧精囊,暴露附于精囊内侧的前列腺背叶,造模组(32只)分别注入25%的消痔灵注射液共0.25 mL,假手术组(8只)分别注入等量生理盐水,腹腔喷庆大霉素注射液以防感染,缝合肌肉、皮肤。创口处涂红霉素软膏。

1.5分组与给药1周后,将32只造模大鼠随机分为4组:CNP模型对照组,乌鸡白凤丸低、高剂量组,前列泰治疗对照组,各8只。假手术组、CNP模型组:以等量生理盐水灌胃;乌鸡白凤丸低、高剂量组:以乌鸡白凤丸悬液5 mL/kg灌胃,分别相当于1、2 g/kg生药;前列泰治疗对照组:以前列泰胶囊用蒸馏水配制成混悬液5 mL/kg灌胃,相当于0.95 g/kg生药。给药1次/d,连用4周。

1.6取材末次给药24 h后,处死大鼠,取前列腺组织,切取单侧部分新鲜前列腺组织做Western Blotting;切取部分前列腺组织放入10%的中性福尔马林溶液中固定24 h,做石蜡切片。

1.7检测指标

1.7.1病理学观察肉眼观察各组大鼠前列腺组织的颜色、硬度、大小、完整性等一般情况。取材、HE染色,光镜下观察大鼠前列腺的炎症情况。

1.7.2Masson染色常规Masson染色,光学显微镜观察拍照,用Image-proplus 6.0图像分析软件进行自动测量分析,前列腺纤维化相对面积=前列腺蓝染面积/视野总面积×100%。

2结果

2.1病理学观察假手术组大鼠前列腺表面红润,腺体组织柔软有弹性,结构完整,与周围组织无黏连,易与周围组织剥离;CNP模型组腺体呈暗红色或棕黄色,质地较硬,弹性较差,与周围组织黏连,体积较正常组较大,不易剥离;给药各组与CNP模型组相比,前列腺质地相对较软,弹性较好,颜色鲜红,与周围组织的黏连程度较轻,个别大鼠前列腺组织与假手术组近似。光镜下可见,假手术组前列腺腺泡上皮无增生或萎缩现象,腺腔不规则,腺腔内有少量正常分泌物,间质无炎症细胞浸润;CNP模型组前列腺腺腔扩张,上皮变矮,排列较规则,腔内分泌物增多,间质疏松水肿、血管扩张充血、有大量炎症细胞浸润;乌鸡白凤丸低剂量组、高剂量治疗组腺腔轻度扩张,腺上皮萎缩改善,腔内有少量分泌物,炎症明显消退;前列泰治疗对照组腺上皮有轻度萎缩,腺腔扩张,腔内分泌物较多,个别切片可见到少量炎症细胞浸润。

2.2Masson染色结果如图1,光镜下可见:假手术组大鼠前列腺间质内纤维结缔组织很少;CNP模型组大鼠前列腺组织间质内纤维结缔组织大量增生;治疗之后,前列腺间质内纤维结缔组织增生减轻。用图像分析系统对Masson染色结果进行半定量分析,结果见表1。

表1 各组大鼠前列腺纤维化相对面积比较 ± s, n=8)

注:与假手术组比较,##P<0.01;与CNP模型组比较,△P<0.05

注:A:假手术组;B:CNP模型组;C:乌鸡白凤丸低剂量组;D:乌鸡白凤丸高剂量组;E:前列泰治疗对照组 图1 乌鸡白凤丸对CNP大鼠前列腺组织纤维化的影响(Masson染色,400×)

3讨论

慢性前列腺炎是一种十分常见的男性泌尿生殖系疾病,其中90%左右为慢性非细菌性前列腺炎[11]。慢性前列腺炎病理变化主要为前列腺腺泡萎缩、腺腔缩小、腔内分泌物减少、间质内炎性细胞浸润和纤维组织增生,随着病情的进展,后期前列腺常常发生纤维化、质地较硬、周围炎性黏连重、解剖层次不清,可能是导致药物不易进入前列腺组织,疗效较差的一个重要原因[12-13]。本实验结果显示,在慢性非细菌性前列腺炎模型大鼠的前列腺组织内有明显的炎症浸润和大量的纤维结缔组织增生,表明模型复制成功。

乌鸡白凤丸以乌鸡为主药,配以当归、白芍、人参、黄芪、地黄、丹参等组成,具有理血通经、活血化瘀、抗炎、改善微循环等作用[14-15]。在本实验中,乌鸡白凤丸治疗组与慢性非细菌性前列腺炎模型组相比,前列腺组织纤维化情况有了明显的改善,表明乌鸡白凤丸可以改善慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺的纤维化程度,从而治疗慢性非细菌性前列腺炎。研究表明[16-18],TGF-β1是一类强效的致纤维化因子,在器官纤维化中发挥重要的作用。免疫组织化学和Western Blotting的结果一致显示TGF-β1在慢性非细菌性前列腺炎模型组大鼠前列腺组织中的表达量显著高于假手术组大鼠,经乌鸡白凤丸治疗后,大鼠前列腺组织中TGF-β1的表达量显著低于模型组,并且乌鸡白凤丸高剂量组TGF-β1的表达量低于乌鸡白凤丸低剂量组。因此,我们认为乌鸡白凤丸可以通过改善前列腺组织的纤维化来治疗慢性非细菌性前列腺炎,其机制可能与乌鸡白凤丸降低前列腺组织内TGF-β1的表达有关。

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