解郁开心丹对抑郁模型大鼠脑内单胺类神经递质的影响

解郁开心丹对抑郁模型大鼠脑内单胺类神经递质的影响

周庆莹，刘宏岩*

(长春中医药大学，长春 130117)

摘要：目的观察解郁开心丹对抑郁模型大鼠脑内去甲肾上腺素(NA)、多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)含量的影响。方法80只SD大鼠自由饮食，自然光线下适应性喂养1周后，按照 Open-Field评分方法，将得分≤20分、≥130分的大鼠剔除，剩余的大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、阳性药物对照组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组。后5组通过禁水24 h、禁食24 h、4 ℃冰水游泳5 min、2 h行为限制、夹尾1 min、潮湿环境、昼夜颠倒，7种应激刺激每天随机安排一种，各种刺激不连续出现，连续刺激3周造模。造模后灌胃给药，阳性药物对照组给予盐酸氟西汀混悬液10 mg/d；解郁开心丹高、中、低剂量组分别给予解郁开心丹2.0，1.0，0.5 g/d(给药体积为每100 g体质量给予1.0 mL)。模型组给予等量生理盐水，持续28 d。用酶联免疫法检测大鼠脑内NA，DA，5-HT的含量。结果与模型组比较，中药高剂量组、中药中剂量组大鼠脑内NA，DA，5-HT含量明显增高且P<0.05；中药高剂量组、中药中剂量组与阳性药物对照组比较无明显差异且P>0.05。结论解郁开心丹具有与西药抗抑郁药物氟西汀同样的抗抑郁作用，且抗抑郁作用机制可能与调节大鼠脑内单胺类神经递质的平衡有关。

关键词：解郁开心丹;抑郁模型;单胺类神经递质;去甲肾上腺素;多巴胺;5-羟色胺

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.03.021

中图分类号：R741文献标志码： A

文章编号：1003-5699(2015)03-0282-04

基金项目:吉林省自然科学基金(201015118)。

作者简介:周庆莹(1985-)，女，硕士，助教，主要从事中医临床基础理论研究。

收稿日期:(责任编辑：张瑞彬2015-02-10)

*通信作者:刘宏岩，电话-18686698557，电子信箱-hong.yancc@163.com

JieYuKaiXinDanwithin the depression model rats on single amine neurotransmitter

ZHOU Qingying,LIU Hongyan*

(Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

Abstract:ObjectiveObserve Jie Yu Kai Xin Dan within the depression model rats on norepinephrine (NA),dopamine (DA) and serotonin (5-HT) content.Methods80 SD rats in free diet,natural light,and adaptive feeding for one week.Make the behavioral score by Open-Field scoring method.Exclude the rats who’s score is ≥120 or ≤30,the last rats are randomly divided into six groups.normal control group,model group,Fluoxetine group,Chinese medicine high dose group,Chinese medicine middle dose group,and Chinese medicine low dose group,the last 5 groups was treated by water deprivation for 24 h,fasted for 24 h,4 ℃ ice water swimming 5 min,2 h behavior restrictions,tail clamp 1 min,humid environment,day and night reversed,and the rat was in different stress factors every day which is randomly decided.After 3 weeks’ continuous stimulation,the depression model was made,normal control group were not treated.Intragastric administration was given after the completion of the modeling,positive control group was given fluoxetine hydrochloride suspension 10 mg/d,positive control drug’s high,middle and low dose group were given Jie Yu Kai Xin Dan 2.0 g/d,1.0 g/d,0.5 g/d (Given 1.0 mL dose volume per 100 g body weight).Model control group were given normal saline.for 28 day.Enzyme league immune method to detect the rats NA,DA and 5-HT content.ResultsConclusion Compared with model group,Chinese medicine dose group of rats in high dose group,the traditional Chinese medicine (TCM) in NA,DA and 5-HT content increased obviously and P<0.05;Traditional Chinese medicine (TCM) in high dose group,Chinese medicine dose group compared with positive drug control group no significant difference(P>0.05).ConclusionJie Yu Kai Xin Dan with western medicine antidepressants fluoxetine same antidepressant effect,and the antidepressant mechanism may be related to regulating single amine neurotransmitter balance in rats.

Keywords:Jie Yu Kai Xin Dan;Depression model;Single amine neurotransmitter;NA;DA;5-HT

抑郁症是现代医学病名，表现为情绪低落、兴趣缺乏、快感缺失、思维迟缓、运动性迟滞或激越、焦虑、自责自罪、自杀观念和行为、精神病性症状、躯体症状(主要有睡眠障碍、食欲减退、性欲减退、躯体疼痛不适、乏力、自主神经功能失调症状等)[1]。从20世纪中后期到现在，对抑郁症的研究越来越多，脑内单胺类神经递质功能异常是目前较为公认的假说之一[2]。西药治疗抑郁症疗效确切，但存在依从性差、起效时间长、停药后病情反复、治疗费用高、毒副作用广泛等问题[3]。近年来中医治疗抑郁症显示了其自身的优势，经过多年临床实践总结出部分抑症患者因多脏腑虚损而致病。结合《内经》“五神脏”理论提出“五脏精亏，精不养神”是抑郁症的病机之一。在此病机的指导下创立了方剂解郁开心丹，从而总结出填精益气养血的治疗方法。以下实验是对解郁开心丹抗抑郁疗效和抗抑郁机制的研究。

1实验材料

1.1实验动物由长春中医药大学基础实验动物中心提供的清洁级健康成年雄性SD大鼠80只，体质量(200±20)g，合格证号：SCXK(吉-2011-0004)。

1.2实验药品及试剂解郁开心丹由柴胡、桂枝、茯苓、人参、龙骨、牡蛎、黄芩、大黄、夜交藤、制何首乌等组成(药材购于长春市中东市场医药超市)。按照灌胃剂量制成水煎剂浓缩至相应浓度后，置4 ℃冰箱储存备用。盐酸氟西汀每片20 mg,苏州中化药品工业有限公司，批号H20064844。按照灌胃剂量制成相应浓度的混悬液后,置4 ℃冰箱储存备用。大鼠去甲肾上腺素(NA)酶联免疫分析试剂盒、大鼠5-羟色胺(5-HT)酶联免疫分析试剂盒、大鼠多巴胺(DA)酶联免疫分析试剂盒：均为美国R&D公司产品。

1.3实验仪器电子显微镜(莱卡)，宝特ELX-808酶标仪(ELX-808),TKY-LA冷冻切片机(湖北泰康医疗设备有限公司)，GHP-9270隔水式培养箱(上海莜翼仪器设备有限公司),BS-1100型分析天平(天津斯维科科技有限公司生产)。

2实验方法

2.1动物分组80只SD大鼠自由饮食，自然光线，适应性喂养1周后。按照Open-Field评分方法：将得分≤20分和得分≥130分的大鼠剔除后，剩余的大鼠随机分为6组。分别为：正常对照组、模型组、阳性药物对照组、中药高剂量组、中药中剂量组和中药低剂量组，每组10只。

2.2模型制备具体造模方法采用慢性不可预见性温和应激结合孤养法制备大鼠抑郁模型。从第8天起，正常组大鼠同笼饲养,自由饮食饮水，不给予任何刺激。其余各组大鼠单笼饲养，并开始接受21 d各种不同的应激刺激。包括：1)禁水24 h；2)禁食24 h；3)4 ℃冰水游泳5 min；4)2 h行为限制；5)夹尾1 min；6)潮湿环境；7)昼夜颠倒。7种应激刺激每天随机安排1种，每种应激刺激不连续出现。

2.3给药情况除正常组外，其余各组大鼠在接受21 d应激刺激后，开始灌胃给药。给药量如下:阳性药物对照组给予盐酸氟西汀混悬液10 mg/d；解郁开心丹高、中、低剂量组分别给予解郁开心丹2.0，1.0，0.5 g/d(给药体积为每100 g体质量给予1.0 mL)，模型组给予等量生理盐水。

2.4单胺类神经递质NA、DA、5-HT的测定大鼠麻醉后，剥离脑壳,分离除脑干部分外的全脑组织，放置于-70 ℃冰箱内待检测使用。具体检测方法如下，加样：分别设空白孔、标准孔、然后再加待测样品10 μL(样品最终稀释度为5倍)。将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37 ℃温育30 min。配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每空加洗涤液，静置30 s后弃去，如此重复5次，拍干。加酶:每孔加入酶标试剂50 μL，空白孔除外。再次温育：用封板膜封板后置37 ℃温育30 min。再次洗涤:小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每空加洗涤液，静置30 s后弃去，如此重复5次，拍干。显色：每孔加入显色剂A50 μL，再加入显色剂B50 μL，轻轻振荡混匀，37 ℃避光显色15 min。终止：每孔加终止液50 μL，终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定：以空白孔调零，450 nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定在加终止液后15 min以内进行。

3实验结果

与模型组比较，中药高剂量组、中药中剂量组大鼠脑内5-HT，NA，DA含量明显增高,且差异有统计学意义(P<0.05)；中药高剂量组、中药中剂量组与阳性药物对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1～3。

表1　治疗后各组大鼠脑组织中5-HT的表达水平 ± s, n=10)　ng/L

注：与空白组比较，△ P<0.05；与模型组比较，▲ P<0.05

注：与空白组比较，△ P<0.05；与模型组比较，▲ P<0.05

注：与空白组比较，△P<0.05；与模型组比较，▲P<0.05

4讨论

4.1解郁开心丹的作用机制解郁开心丹以五脏精亏，精不养神为病机指导，从整体出发，利用填精益气养血的方法，由柴胡、桂枝、茯苓、人参、龙骨、牡蛎、黄芩、大黄、夜交藤、制何首乌等药物配伍组成。柴胡，味辛而苦，能行能泄，性善条达肝气，疏肝解郁，与茯苓配伍可疏肝养血，利湿健脾，与人参同用又可补气升阳；桂枝性温，可温通经脉，助阳化气，温化心脾之阳气；龙骨，入肝经，质重沉降，有较强的平肝潜阳作用，与牡蛎同用可滋补肝阴，平肝潜阳；大黄，苦降，能使上炎之火下泄，与黄芩同用可治火邪上炎，防治火邪攻心、伤胃；夜交藤，味甘、性平，归心、肝二经，能补养阴血，养心安神；制首乌功善补肝肾、益精血。通过以上中药的配伍，可达到滋养五脏阴阳之虚、顾护五脏之神，防止邪气伤及五脏，填精益气养血、舒肝解郁、镇静安神的功效。解郁开心丹，寓舒肝解郁于填精益气养血之中，可避免长期单纯的疏肝解郁至人体气血耗伤；不局限于对局部脏腑的调补而是补养五脏阴阳之虚，整体调和人体气机与阴阳，使人体自身达到抗御疾病的最佳状态，从而起到抗抑郁症的作用。

“填精益气养血法”是在中医基础理论的指导下和临床实践的经验中总结出来的，通过十几味中药配伍，滋养五脏阴阳之虚、顾护五脏之神，防止邪气伤及五脏，具有填精益气养血、舒肝解郁、镇静安神的功效，从而补充人体之气血，整体调和人体之气机、阴阳，使人体自身达到一个抗御疾病的最佳状态而达到抗抑郁的作用。

4.2解郁开心丹抗抑郁作用的优势实验结果证实解郁开心丹与氟西汀具有相同的抗抑郁疗效。但是解郁开心丹与氟西汀相比目前没有发现临床治疗过程中产生的性功能障碍、出血、脱发、认知功能障碍、额叶损害综合征、单纯或带状疱疹病毒感染复发、肺损伤、药物相互作用、诱发狂躁症、诱发自杀意图等不良反应[4-7]。所以解郁开心丹在治疗抑郁症的过程中不仅具有确实可信的抗抑郁疗效，而且与现代临床中常用的抗抑郁西药相比具有其独特的优势和良好的开发前景。

参考文献：

[1]郝伟.神经病学[M].北京:人民卫生出版社,2008:103-106.

[2]周江宁,闫雪波.抑郁症发病的下丘脑中枢驱动调节机制[J].中国科学技术大学学报,2008,38(8):967-977.

[3]王蕾,李丽.中药复方治疗抑郁症实验研究进展[J].辽宁中医药大学学报,2011,8(13):35-37.

[4]姜玉龙,赵重波.抑郁症治疗药物发展[J].上海医药,2011,32(6):267-269.

[5]祁雪丹,屠树滋,王秋娟.治疗抑郁症药物的研究进展[J].中国新药杂志,2003,12(10):810-816.

[6]吴飞华,金剑,肖忠革.抑郁症的药物治疗及其进展[J].临床合理用药,2009,2(3):81-83.

[7]李焕德,邓孟先.氟西汀的副作用[J].国外医学(精神病学分册),1993,20(4):239-243.