高效液相色谱法测定银丹心脑通软胶囊中原儿茶醛含量

高效液相色谱法测定银丹心脑通软胶囊中原儿茶醛含量

陈继舜，陈琴华*

(湖北医药学院附属东风医院，湖北 十堰 442008)

摘要：目的建立用HPLC测定银丹心脑通软胶囊中原儿茶醛含量的方法。方法采用色谱条件为Linksil-ODS色谱柱(5 μm，4.6 mm×250 mm),流动相为乙腈-1%的冰醋酸(30∶70)，流速为1.0 mL/min，检测波长为280 nm，柱温为30 ℃，进样量20 μL。结果原儿茶醛在线性范围为5～100 μg/mL,线性关系良好，相关系数为0.999 5。平均回收率在97.6%(n=5)，日间精密度为1.25%。结论该方法准确性好，重现性好,快速准确，可用于银丹心脑通软胶囊中原儿茶醛的含量测定以及银丹心脑通软胶囊的质量控制。

关键词：银丹心脑通软胶囊；原儿茶醛；含量测定；色谱法，高效液相

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.01.021

中图分类号：R284文献标志码： A

文章编号：1003-5699(2015)01-0071-03

基金项目:十堰市科学技术研究与开发项目(14Y55,2013st33)；湖北省卫生和计划生育委员会计划项目(2013Z-B04)；湖北省2011协同创新中心基金(4)。

作者简介:陈继舜(1974-)，男，硕士，副主任医师，主要从事冠心病基础及临床研究。

收稿日期:(责任编辑：张瑞彬2014-08-03)

*通信作者:陈琴华,电话-(0719)8272351,电子信箱-cqh77@163.com

Determination of the content of protocatechualdehyde in Yindan Xingnaotong Capsule by HPLC

CHEN Jishun,CHEN Qinhua*

(Dongfeng Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine,Shiyan 442008,Hubei Province,China)

Abstract:ObjectiveTo establish a HPLC method to determine the content of protocatechualdehyde in Yindan Xingnaotong Capsule.MethodsChromatographic column was Linksil-ODS (5 μm,4.6 mm×250 mm) at the gradient elution mode with the now rate of 1.0 mL/min,mobile phase was acetonitrile-water(7∶3),including 1% acetic acid.The detection wavelength

was 280 nm,column temperature was 30 ℃ and injection volume was 20 μL.ResultsThe line range was 5～100 μg/mL and standard curve showed good linear regression in test ranges (r=0.9995).And the main recovery was in the range of 97.6% with RSD 1.25% (n=5).ConclusionThe method is acute,rapid and has good reproducibility for protocatechualdehyde in Yindan Xingnaotong Capsule.It can be used to control the quality of protocatechualdehyde in Yindan Xingnaotong Capsule.

Keywords:Yindan Xingnaotong Capsule;protocatechualdehyde;content determination;HPLC

银丹心脑通软胶囊主要由银杏叶、丹参、灯盏细辛、三七等8种中药组成[1-3]，具有活血化瘀、行气止痛、消食化滞的作用，用于气滞血瘀引起的胸痹，症见胸痛、胸闷、气短、心悸等，以及冠心病、心绞痛、高血压、脑动脉硬化、脑卒中、脑卒中后遗症见上述症状者[4-10]。原儿茶醛是主要组成药物丹参的主要有效成分之一。现代药理实验研究[11-15]证明其具有扩张冠状动脉，增加冠脉血流量，扩张心脑血管等作用。为了控制该胶囊质量，笔者对银丹心脑通软胶囊中的原儿茶醛进行含量测定，为银丹心脑通软胶囊质量评价提供科学依据。

1实验材料

Ultimate3000高效液相色谱仪，chromeleon工作站。KQ-100DB型数控超声波清洗器，苏州江东精密仪器有限公司。HP-01溶剂过滤器，杭州赛析科技有限公司。日本岛津AEU-210电子天平，TG16G离心仪。原儿茶醛,中国食品药品检定研究院，批号110810-200506。银丹心脑通软胶囊，贵州百灵企业集团制药有限公司，批号：130302，由湖北医药学院附属东风医院药学部提供。乙腈为色谱级，水为纯化水，其他试剂为分析纯。

2方法和结果

2.1色谱条件Linksil-ODS色谱柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)，流动相为1%的冰醋酸水：乙腈=7∶3，流速为1.0 mL/min，检测波长为280 nm，柱温为30 ℃，进样量20 μL。

2.2溶液的制备对照品溶液的制备：取原儿茶醛对照品约10 mg，精密称定，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，作为原儿茶醛对照品(1.0 mg/mL)贮备液。精密吸取适量，用甲醇稀释得100 μg/mL的工作溶液。

供试品溶液的制备：取银丹心脑通软胶囊适量，研碎，精密称定1.0 g，至容量瓶中，加入甲醇20 mL,称重,超声30 min，补重，进样前用0.45 μm的超滤膜过滤并脱气。

阴性对照品溶液的制备：取按照银丹心脑通软胶囊的组方配制独缺丹参的阴性样品，干燥，粉碎，过60目筛，按供试品溶液制备方法制备，即得阴性对照溶液。

2.3系统适应性试验按照“2.1项下”色谱条件，精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 μL分别注入高效液相色谱仪，供试品溶液色谱图上在与对照品溶液相应的位置上有一相同的色谱峰，而阴性对照溶液在对照品溶液处无色谱峰，银丹心脑通软胶囊的其他成分在该色谱条件下不影响原儿茶醛的测定。因此可知，原儿茶醛专属性较强，可以用来测定银丹心脑通软胶囊中原儿茶醛的含量。

2.4线性关系考察取定量的原儿茶醛对照品溶液，配置一系列的原儿茶醛对照品溶液，相当于原儿茶醛的浓度分别为5，10，20，40，80，100 μg/mL,按“2.1项下”色谱条件进样。记录色谱图和峰面积，以浓度(X)为横坐标，原儿茶醛的峰面积(Y)为纵坐标进行回归，得线性回归方程：Y=14 099X+5 324,r=0.999 5。结果表明,原儿茶醛在5～100 μg/mL的浓度范围线性关系良好。

2.5精密度试验精密吸取同一原儿茶醛对照品溶液(40 μg/mL)，在上述色谱条件下1 d内连续进样5次，记录峰面积，计算峰面积RSD为1.22%，表明仪器精密度良好。

2.6稳定性实验精密吸取同一原儿茶醛对照品溶液(40 μg/mL)，分别于0，1，2，4，8，12 h在上述条件下进样测定，其RSD为1.36%，结果表明样品在12 h内稳定。

2.7重复性试验取同一批银丹心脑通软胶囊，按“2.2项下”溶液的制备方法处理，按“2.1项下”色谱条件进样20 μL，计算原儿茶醛平均含量为366 μg/g，其RSD为1.35%。结果表明本法重复性良好。

2.8加样回收率精密称取已知含量的银丹心脑通软胶囊5份(366 μg/g)，每份约0.5 g，分别精密加入对照品(原儿茶醛200 μg/mL) 1.0 mL，按“2.2项”的方法制备供试品溶液，进样量20 μL，测定原儿茶醛的平均回收率为97.6%，RSD(n=5)为1.24%。结果见表1。

表1　原儿茶醛加样回收率

2.9样品测定取3批银丹心脑通软胶囊药品(批号为130302、130412、131203)适量,按“2.2项”下供试品溶液制备方法制备样品，按“2.1项”下色谱条件进行测定，原儿茶醛含量分别为366，382，370 μg/g。

3结论

本实验采用反相高效液相法建立了银丹心脑通软胶囊的活性成分原儿茶醛含量测定方法，该方法简便，准确度高，重复性好。该方法可用于银丹心脑通软胶囊中的有效成分的含量测定，亦可作为银丹心脑通软胶囊中原儿茶醛有效含量的测定方法。在流动相选择的中，考虑到本实验所检测的成分均为水溶性成分，故纯化水占流动相的70%，乙腈为30%，为保证分离效果良好，纯化水中加入的冰醋酸改善峰型及分离度。得到流动相为1%的冰醋酸水∶乙腈=7∶3可满足实验对流动相的要求。

在原儿茶醛提取上，方法加热回流，其提取时间超过2 h,而超声波技术可用于绝大多数中药有效成分的提取, 已有实验证明利用超声波提取可获得比常规方法更佳的提取效果和提取率，与水提取工艺相比，超声法具有省时、节能、不破坏有效成分、溶剂用量少、提取效率高等优点，本实验在样品处理方面采用在温度50 ℃时，超声功率60 W,提取30 min，更加体现快速测定。所建立银丹心脑通软胶囊中的原儿茶醛的含量测定方法，其方法专属性强，精密度好，回收率高，适合于银丹心脑通软胶囊质量评价。

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