洛阳地区幽门螺杆菌VacA 基因及亚型临床分布特征及其与胃肠疾病关系

戚艳丽，杨方方，金建军

1.河南科技大学第一附属医院消化内科，河南 洛阳471000;2.宜阳县人民医院心血管内科

幽门螺杆菌(H.pylori)是很多胃肠疾病的独立致病因子或相关因素，清除后部分疾病可以得到较好的控制，因此越来越受到人们的重视。流行病学资料显示，全球半数以上的人群存在H.pylori 感染，然而大部分感染H. pylori 的患者没有任何症状，只有15% ～20%的感染者产生疾病［1］。其原因可能与宿主、环境和H.pylori 的基因多态性有关。研究发现，不同的基因型其致病力不同，对人体的危害也不同;不同的基因型在各个地区的分布也不相同。空泡毒素基因(vacuolating cytotoxin gene，VacA)是最常见的基因型，它又分好多亚型，每个亚型的致病力差别很大。那么在洛阳地区VacA 基因亚型分布怎样?目前尚未见报道。本研究拟通过检测来自洛阳不同地区的H.pylori 感染患者的VacA 基因亚型，探讨洛阳地区H.pylori 感染的优势VacA 基因亚型、分布特征及与胃肠疾病关系，从而为制定洛阳地区H. pylori 感染的防治战略提供帮助。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2013 年9 月-2014 年4 月河南科技大学第一附属医院就诊的H.pylori 阳性的胃肠疾病患者546 例，男294 例，女252 例，平均年龄(51.11 ±14.42)岁。纳入标准:均经14C 尿素呼气试验检测为H.pylori(+)，均接受胃镜及病理检查，均为洛阳地区常住人口，无长期外地居住史。排除标准:(1)近2 周内用过抑酸剂、抗菌素或铋剂者。(2)合并严重的心血管、血液、内分泌系统疾病者。(3)酗酒，有药瘾者。入选对象均于治疗前清晨空腹抽取肘静脉血3 ml，室温下静置1 h 使血液自然凝集，离心20 min(3 000 r/min)，仔细收集上清液血清约500 μl，分装后置于-80 ℃冰箱保存待检。

1.2 方法 H. pylori 检测:采用14C 尿素呼气试验。仪器购自深圳中核海得威生物科技有限公司。VacA及VacA S1a、VacA S1b、VacA S2、VacA M1、VacA M2亚型的检测:采用酶联免疫吸附试验(ELISA 法)。试剂盒为美国TSZ 公司生产，上海酶联生物科技有限公司分装。

1.3 统计学分析 采用SPSS 17.0 统计学分析软件，计数资料采用χ2检验P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 洛阳地区VacA 的分布情况 在546 例感染H.pylori患者中，VacA 的总阳性率为48.35%，其中洛阳市区内VacA 的阳性率为40.00%，市区外县区VacA 的阳性率为50.70%，三者相比，差异无统计学意义(P ＞0.05，见表1)。

表1 洛阳地区H. pylori 感染VacA 基因型的分布特征［例数(%)］Tab 1 The distribution of H. pylori infection VacA genotype in Luoyang［n(%)］

2.2 洛阳地区VacA 亚型的分布特征 VacA 基因型有2 个易变信号区，S 区和M 区，S 区又可分为S1a、S1b、S2;M 区，又可分为M1、M2。在264 例VacA 阳性病例中，S 区阳性率分别为S1a:76.52%(202/264)、S1b:20.45%(54/264)、S2:0.76%(2/264)、未分型6例，以S1a 为最高;与其他两个分型相比差异有统计学意义(P ＜0. 05);M 区阳性率分别为M1 ∶21. 97%(58/264)、M2∶72.24%(196/264)，未分型10 例，以M2 为最高，与M1 型相比，差异有统计学意义(P ＜0.05)。

2.3 洛阳地区VacA 基因亚型嵌合体的分布特征由上可知，S 区分为S1a、S1b、S2;M 区分为M1、M2，它们常常以嵌合体的形式存在。在264 例VacA 阳性病例中，VacA 基因亚型嵌合体的阳性率分别为S1a/M1∶12.88%(34/264)、S1a/M2 ∶47. 73% (126/264)、S1b/M1 ∶3.79% (10/264)、S1b/M2 ∶12. 88%(34/264)，未发现S2 嵌合体，以S1a/M2 为最高，与其他嵌合体相比，差异有统计学意义(P ＜0.05)。

2.4 洛阳地区不同胃肠病VacA 基因亚型嵌合体分布特征 病例数较多的3 种疾病:浅表性胃炎、糜烂性胃炎、十二指肠溃疡，其感染H.pylori 常见的VacA 基因亚型嵌合体的表现形式是S1a/M1、S1a/M2、S1b/M2。但每一种形式在3 种疾病之间相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。其余疾病因病例数太少，不做统计(见表2)。

表2 洛阳地区不同胃肠病VacA 基因亚型嵌合体分布特征［例数(%)］Tab 2 The distribution of VacA chimeric gene subtypes from different gastrointestinal diseases in Luoyang［n(%)］

续表2

3 讨论

VacA 是H.pylori 主要的毒力相关基因之一，存在于所有的菌株中，其编码产物VacA 蛋白(Vacuolating ytotoxin.associated protein A. VacA)是一种空泡毒素，可导致宿主上皮细胞浆内形成空泡。其成熟亚单位以可溶形式释放入细胞间空隙或留在细菌表面，以低聚体复合物形式插入脂质双分子层，形成阴离子选择通道，增加已极化上皮细胞的通透性，使细胞失去屏障功能，也可引起线粒体破坏、细胞毒素释放及胃上皮细胞凋亡。VacA 蛋白的分子量约87 kD，所有H.pylori 都有VacA 基因，但只有50% ～60%的H.pylori 表达VacA 蛋白，称为产毒菌。有毒素活性(Tox+)与无毒素活性(Tox-)的H. pylori 在VacA 基因中间区DNA 序列上有所不同，将Tox+的H.pylori 菌株中间序列定为M1 型等位基因，33 个氨基酸的信号区序列定为S1，S1可再分为S1a 和S1b;将Tox-的H. pylori 菌株中间序列定为M2 型等位基因，30 个氨基酸的信号区序列定为S2。S 区基因编码信号肽，是毒素运输蛋白分子的一部分;M 区基因编码毒素蛋白。研究发现VacA 基因有5 种信号区与中间区组合的亚型，其表达空包毒素活性能力不同，由强到弱依次为S1a/M1 ＞S1b/M1＞S1a/M2 ＞S1b/M2 ＞S2/M2。大量研究显示，来自欧美国家的H.pylori VacA 基因型以S1a 或S1b/M1a 或M2a 为主。而来自日本、韩国、中国香港等亚洲国家或地区的菌株以S1/M1 或M2b 为主。台湾地区以S1a 为主［2-3］。本研究发现，洛阳地区H. pylori 菌株VacA 总的阳性率为48.35%，市区和市区外县区之间无显著性差异，与总阳性率相比也无显著性差异。VacA 基因信号区序列中S 区以S1a 为最高;M 区以M2为最高;VacA 基因亚型嵌合体以S1a/M2 为最高。由此可知，洛阳地区感染的H.pylori 菌株约有48%含有VacA 蛋白，在这48%含有VacA 蛋白的菌株中主要表现为S1a/M2 嵌合体形式为优势基因型。可见洛阳地区感染的H.pylori 菌株致病力相对较低，引起胃肠疾病几率相对较小或较轻。公众在做健康体检时可不作为常规项目。另外，我们的研究发现VacA 基因亚型的分布与不同的胃肠疾病无明显相关性，与国内外文献报道一致［4-7］。

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