动物园野生动物消化道寄生虫感染调查

罗 琴,谭立娉,胡 伟,郑国超,林丽琴,路鹏云,李国清

（华南农业大学兽医学院，广州510642）

·研究论文·

动物园野生动物消化道寄生虫感染调查

罗 琴,谭立娉,胡 伟,郑国超,林丽琴,路鹏云,李国清

（华南农业大学兽医学院，广州510642）

为了解广州市某野生动物园草食类及灵长类野生动物肠道寄生虫的感染情况，采用粪便检查法共检查36种动物500份粪样，总阳性率为50.6%。其中毛圆线虫、毛尾线虫、蛔虫、类圆线虫、钩虫、绦虫、片形吸虫、球虫的感染率分别为37.4%、5.0%、5.4%、2.0%、0.2%、2.4%、0.4%、7.8%。草食类和灵长类动物寄生虫感染率分别为61.3%和28.4%，其中长颈鹿的毛圆线虫、猴科动物的毛尾线虫感染较为普遍，年平均感染率分别为64.5%和31.2%，具有明显季节性。采用粪便培养法将毛圆线虫卵培养至第三期幼虫，对其进行形态学鉴定，结果显示，来自长颈鹿、角马、弯角剑羚的毛圆线虫样品多为混合感染，其中捻转血矛线虫为优势虫种。

野生动物；肠道寄生虫；捻转血矛线虫；毛尾线虫；野生动物园

由于人类的无度开采，生态环境的恶化，野生动物资源逐渐衰竭，许多珍稀野生动物濒临灭绝。野生动物因其特有的观赏价值和经济价值，且与人类的健康和物种保护密切相关，保护野生动物已成为兽医研究的重要任务[1]。越来越多的研究显示寄生虫病是危害野生动物的主要疾病之一，各种寄生虫广泛寄生于野生动物，以多种方式掠夺营养，损害健康，降低生产性能，并造成饲料的浪费[2]。圈养野生动物聚集在相对局限的特定空间，种类多，密度大，活动范围相对减小，种间接触机会增多，寄生虫感染或交叉感染几率增大，寄生虫病在圈养野生动物中凸显，其中，消化道寄生虫严重影响野生动物的健康和活力[3]。同时，野生动物的频繁活动，加之与人类的密切接触使其不断地向人类传播各类寄生虫病。

近年来，吉林省[4]、陕西省[5]、福建省[6]、安徽省[7]等相继报道了野生动物消化道寄生虫的感染情况，但广东省未见报道。为了解广东省野生动物消化道寄生虫的感染情况，本研究对广州市某野生动物园的草食类及灵长类野生动物消化道寄生虫感染情况进行了调查。

1 材料与方法

1.1 样品采集2013年3月至2014年1月，每隔2个月对广州市某野生动物园的草食类及灵长类野生动物进行粪便检查。调查动物有36种，包括18种草食动物和18种灵长类动物(表1)。共采集粪样500份，分别装入一次性采集袋，做好标记，低温送至实验室，4℃保存待检。

1.2 漂浮法镜检取10～15 g粪样加5倍自来水搅匀，60目铜筛过滤，除去杂质，悬液加入5 mL离心管中，1600×g离心10 min，弃上清液，在沉淀中加入等体积33.3%的硫酸锌溶液（或饱和蔗糖/饱和NaCl），充分搅拌，100×g离心3 min，再加入饱和溶液至离心管口，其上放置一盖玻片，使盖玻片接触液面，静置5 min后，移开盖玻片，放置于载玻片上，卢戈氏碘液染色，100倍显微镜下观察。

1.3 幼虫培养与鉴定取镜检感染毛圆线虫的20份新鲜粪便30 g，玻棒捣碎，于直径15 cm的培养皿中塑成锥形，使粪便中间部分稍高出培养皿1～2 mm，四周低于培养皿10～15 mm。喷蒸馏水刚好没过培养皿底部，维持粪便湿润，27℃恒温箱中培养，每天取培养皿盖，加少量蒸馏水镜检，观察各期幼虫形态并获取图片数据，直到第三期幼虫出现，鉴定虫种。

2 结果

2.1 草食动物和灵长动物粪便检查结果广州市某野生动物园各种野生动物消化道寄生虫感染情况见表1。结果显示，总阳性率为50.6%，其中毛圆线虫、毛尾线虫、蛔虫、类圆线虫、钩虫、绦虫、片形吸虫、球虫的感染率分别为37.4%（187/500）、5.0% （25/500）、5.4%（27/500）、2.0%（10/500）、0.2%（1/500）、2.4%（12/500）、0.4%（2/500）、7.8%（39/500）。灵长类野生动物主要感染毛尾线虫、类圆线虫和球虫，其中猴科动物毛尾线虫感染率较高。草食类野生动物主要感染毛圆线虫、毛尾线虫、蛔虫、绦虫、球虫。

草食类和灵长类野生动物消化道寄生虫感染动态见图1。

图1 广州市某野生动物园草食类和灵长类野生动物寄生虫感染动态Fig.1 The dynamic of parasites infection of herbivores and primates in a wildlife park in Guangzhou

表1 广州市某野生动物园各种野生动物消化道寄生虫感染情况Table1 Gastrointestinal parasites infection in variouswild animals in awildlife park in Guangzhou

虫球Coccidia2---------------1 39虫吸Fasciola-----------------2 虫worm绦Tape-----2-----------12虫worm钩Hook-----------------1 线yloides 虫圆---1-1------1-1 3-10类Strongm 虫or蛔Roundw2----1-----------27虫线尾毛Trichuris-2 2 3 3 4 1-------1 2-25虫ylus线7 圆-----------------18毛Trichostrong阳Positiverate)(%率% % % % % % % % % % %% 性33.315.442.950.030.033.320.00 0 0 0 0 50.00 33.375.020.050.6bers数性3 2 3 4 3 7 1 0 0 0 0 0 1 0 2 3 1 阳Positivenum253 品mple数样Sambers nu9 137 8 10215 1 7 7 8 5 2 3 6 4 5 500 称e 猩gm猴猴紫pithecusvetulusalnam猴aeusPresbytis leucocephalus 猴maeus 爪pithecusdelacouri猴猴Trachypithecusfrancoisi猴Mandrillussphinx 猿Chlorocebus aethiops猿ico goeldii名叶叶Chiropotessatanas猴叶mur fulvusrufus猴yi魈尾 尾 猴猴吼臂臂猿猩面Pongo py物头叶哇Anim彩山Pygathrix ne猴长狐叶蛛鼠尾面长长趾节36黄白动七绿黑褐蜘Callim黑丛松iri sciureusAtelesgeoffro白红Saim帽合AlouattapigraTrachymphalangus戴银TrachyHylobates molochLeHylobates pileatusSysyndactylus 别al类计物动Animcategory总

对长颈鹿毛圆线虫和猴科动物（包括黑叶猴、白头叶猴、紫面叶猴、七彩叶猴、爪哇叶猴、山魈、绿长尾猴）毛尾线虫感染情况进行全年监测，结果见图2和图3。

图2 广州市某野生动物园长颈鹿毛圆线虫感染动态Fig.2 The dynamic of Trichostrongylus infection in Giraffa cameleopardalis in a wildlife park in Guangzhou

图3 广州市某野生动物猴科动物毛尾线虫感染动态Fig.3 The dynamic of Trichuris infection in Ceropithecidae in a wildlife park in Guangzhou

2.2 幼虫虫种鉴定结果将待检毛圆线虫虫卵培养至d2，镜检发现第一期幼虫（图4A）。培养至d5，镜检发现第二期幼虫（图4B）。培养至d8，发现大量第三期幼虫（图4C）。

通过观察比较发现，第一期、第二期幼虫处于动态的变化之中，不能作为鉴定依据。而第三期幼虫达到了外界环境中的最高发育阶段，同一种类形态大小基本不变，种间差异较大，具有形态鉴定意义。待检虫体的第三期幼虫形态特征多数与捻转血矛线虫形态相符，虫体长度为（763.86～764.00）μm，尾长与尾宽在（4.04～4.61）μm且小于5 μm，尾鞘长（84.48～71.31）μm，肠细胞数为16个，尾鞘呈波浪状，末端两个肠细胞膨大部交错排列，因此确定捻转血矛线虫为感染的优势虫种。

图4 毛圆线虫的三期幼虫（100×）Fig.4 Three stage larvae of Trichostrongylus（100×）

3 讨论

本次野生动物肠道寄生虫流行病学调查针对18种草食类和18种灵长类动物。调查的草食动物包括亚洲象、列氏水羚、羚牛、南非剑铃、白跳羚、大羚羊、角马、斑马、藏羚羊、梅花鹿、驼羊、骆驼、弯角剑羚、弯角大羚羊、白面牛羚、高角羚，以上动物均列入《世界自然保护联盟》（IUCN）红色名录。IUCN红色名录是根据严格准则去评估数以千计物种及亚种的绝种风险所编制而成的，准则是根据物种及地区厘定，旨在向公众及决策者反映保育工作的迫切性，并协助国际社会避免物种灭绝。此外，长颈鹿、小龙马（即矮马）虽未列入相关保护名单，但属于特种经济动物，具有独特观赏性与不菲经济价值。调查的灵长类动物包括黑猩猩、黄猩猩、紫面叶猴、白头叶猴、爪哇叶猴、七彩叶猴、黑叶猴、山魈、绿长尾猴、节尾猴、黑丛尾猴、褐狐猴、蜘蛛猴、松鼠猴、红面吼猴、银白长臂猿、戴帽长臂猿、合趾猿，均已列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》（CITES）附录I中，附录I的物种明确规定禁止其国际性交易，若再进行国际贸易会导致灭绝。因此，针对这些野生动物进行胃肠道寄生虫调查，对于动物园野生动物保护和人类健康以及公共卫生具有重要意义。

本次调查36种野生动物中，28种野生动物均有胃肠道寄生虫感染，其中草食类动物15种，灵长类动物13种，表明草食类和灵长类野生动物寄生虫感染较为普遍。此外，草食类野生动物主要感染毛圆线虫、毛尾线虫、蛔虫、绦虫、球虫，偶有类圆线虫、钩虫、片形吸虫感染。灵长类野生动物主要感染毛尾线虫、类圆线虫和球虫，偶有蛔虫、绦虫感染，检查结果符合上述寄生虫的宿主生物学特性，与以往的报道相符[8-11]。根据季节动态观察，草食类野生动物在7月感染最严重，感染率达100.0%；灵长类野生动物在5月感染率最高，达到62.5%。感染高峰均为夏季，此时广州温度、湿度较高。相反，在11月、1月采集的样品感染率均为最低水平，此时广州市温度最低，不适宜寄生虫的生长发育，可能与线虫的滞育现象有关[12]。

该野生动物园灵长类野生动物中，猴科毛尾线虫感染较严重。根据季节动态观察，年平均感染率为31.2%，5月感染率高达83.3%，11月和1月粪检均为阴性。同时，草食类野生动物毛圆线虫感染较为普遍，其中，长颈鹿的感染尤为严重，年平均感染率为64.5%，5月与7月感染率最高，分别达97.7%和100.0%，11月与1月感染率最低时，也达到了14.6% 和46.0%。令人困惑的是该园每季度均用史克肠虫清（阿苯达唑片）对园内动物实施驱虫，说明可能由于给药方案不合理、虫体产生抗药性或药物失效等原因，驱虫失效。

采用粪便培养法将虫卵培养至第三期幼虫以鉴定虫种，培养温度在王治才等[13]的基础上稍作改进，采用27℃培育，d8即孵育出大量三期幼虫。摒弃贝尔曼法、广口罐法和纱布袋浸泡法，将培养液置于倒置显微镜下，镜检观察，再用10 μL移液枪吸取幼虫至载玻片，加盖玻片，放置显微摄像系统拍照获得图片资料，从而对其进行虫种鉴定。由于毛圆科线虫科内虫卵较为相似，同时与钩虫、结节虫虫卵难以区分，需要借助其他方法鉴别到种。虽然采用幼虫培养能够定种[14]，但费时费力，需要寻找快速高效的分子鉴定方法。

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INVESTIGATION OF PARASITIC INFECTION IN GASTROINTESTINAL TRACTS OF WILD ANIMALS IN A WILDLIFE PARK

LUO Qin, TAN Li-ping, HU Wei, ZHENG Guo-chao, LIN Li-qin, LU Peng-yun, LI Guo-qing
(College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China)

To understand the infection status of gastrointestinal parasites in herbivores and primates in a wildlife park in Guangzhou, 500 fecal samples were collected from 36 species of wild animals and examined using fl otation and Lugol′s staining.Total positive rate was 50.6%, in which the infection rates of trichostrongyle, whipworm, roundworm, Strongyloides, hookworm, cestode, Fasciola and coccidia were 37.4%, 5.0%, 5.4%, 2.0%, 0.2%, 2.4%, 0.4% and 7.8%, respectively.The infection rates of herbivores and primates were 61.3% and 28.4%.Giraffa cameleopardalis and Ceropithecidae were severely infected with Trichostrongylus and Trichuris with average infection rates at 64.5% and 31.2% and noticeable seasonality.In addition, parasite eggs from Trichostrongylus positive feces developed into the third stage larvae (L3) for morphological identifi cation.The results showed that samples from Giraffa cameleopardalis, wildebeest and Oryx dammah were infected with several trichostrongyles, among which Haemonchus contortus was predominant.

Wild animal; gastrointestinal parasite; Haemonchus contortus; Trichuris; wildlife park

S858.927

：A

：1674-6422（2015）01-0027-06

2014-08-27

国家自然科学基金资助项目（31272551）

罗琴，女，硕士研究生，预防兽医学专业

李国清，E-mail∶ gqli@scau.edu.cn