survivin及P16在胰腺癌中的表达及临床意义*

survivin及P16在胰腺癌中的表达及临床意义*

常军

(泰山医学院附属医院肿瘤内科，山东 泰安271000)

摘要：目的检测survivin及P16在人类胰腺癌组织中的表达，探讨胰腺癌患者抑癌基因及癌基因变化规律。 方法50例胰腺癌患者的肿瘤组织蜡块，以免疫组化法检测胰腺癌组织中P16及survivin的表达。对照组10例胰腺组织标本取自外伤的胰腺组织。结果survivin在胰腺癌组织中的表达高于正常胰腺组织 (P<0.05)；P16在胰腺癌的表达低于正常胰腺组织(P<0.05)。survivin及P16在胰腺癌组织中的表达呈负相关，两者与胰腺癌的组织分化程度亦存在相关。结论survivin及P16与胰腺癌的发生、发展有着关系密切，进一步研究有助于从基因水平寻找更佳的诊断和治疗方法。

关键词：胰腺癌；survivin； P16

ClinicalsignificanceofexpressionofsurvivingandP16cytokinesinpancreaticcarcinomatissues

CHANG Jun

(AffiliatedHospitalofTaiShanMedicalcollege,Taian271000，China)

Abstract:Objective: To observe the expression of surviving and P16 cytokines in pancreatic carcinoma tissues，and discuss the development regulation and clinical significance of pancreatic carcinoma patients. Methods: The respectable pancreatic carcinoma tissues of 50 patients was stained with immunohistochemistry and DAB coloration kit, to detect the expression of surviving and P16 cytokines in pancreatic carcinoma tissues. The control group is 10 normal pancreas tissues from traumatic pancreas. Results: The expression of p16 in pancreatic carcinoma tissues were lower than in normal pancreatic tissues which had significant difference (P<0.05). The expression of survivin in pancreatic carcinoma tissues was significantly higher than in the normal pancreatic tissues (P<0.05). The expression of survivin and p16 cytokines has significant correlation with the degree of differentiation of pancreatic carcinoma. Conclusion: The expression of surviving and P16 is closely related to pancreatic carcinoma. More researching and studying conduce to understanding the immune state of the pancreatic carcinoma patients, searching better clinical diagnosis and therapy methods.

Key words:pancreatic carcinoma; survivin; P16

胰腺癌近年来发病率呈明显上升趋势(男性第四位，女性第五位)[1]，其早期诊断十分困难，大部分患者失去了根治性切除的机会，手术切除率仅10%～15%，加之胰腺癌对放疗、化疗的敏感性不高，是预后最差的恶性肿瘤之一[2,3]。近年来陆续发现了许多用于肿瘤诊断和早期诊断的标记物，本课题研究p16及survivin在胰腺癌中的表达，以期能进一步探讨其与胰腺癌的发病、治疗及预后的关系，为寻找新的确实可靠的诊断和治疗方法提供依据。

1材料和方法

1.1试剂

PV-9000试剂盒、mouseanti-p16、mouseanti-survivin均购自中杉金桥生物技术有限公司；DAB显色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2标本的采集

收集泰山医学院附属医院2003年9月～2013年9月间住院并手术的胰腺癌患者病历，在病理科按照病理号查找切除组织的蜡块标本，根据实验需要和蜡块标本选择50例实验备用，其中男35例，女15例，年龄44～70岁，平均年龄63.8岁。其中胰头癌38例，胰体尾癌12例。对照组10例取自外伤胰腺组织，用福尔马林固定制作成蜡块。

1.3免疫组织化学染色

石蜡切片装架后放入60 ℃烤箱12h以上，脱蜡至水化之后3%过氧化氢室温孵育，微波修复，取出室温冷却后将切片装入切片架，PBS液冲洗，滴加一抗mouseanti-p16、mouseanti-survivin，置入湿盒，37.0 ℃恒温水浴箱中孵育，之后装入切片架，PBS液冲洗；滴加PV-9000 试剂1、2，依次恒温水浴箱中孵育，然后将切片装入切片架，PBS液冲洗；DAB显色；苏木素复染；中性树胶封片，干燥后标记，显微镜观察。

1.4统计学分析

采用SPSS11.5软件进行分析，所用统计学方法为χ2检验，两样本均数比较的t检验，P﹤0.05认为有统计学意义。

2结果

2.1P16的表达

染色结果判定标准:参照Fromowitz[4]方法,在高倍镜下作如下评分: (1)无着色为0, 淡黄色为1, 棕黄色为2, 棕褐色为3; (2)阳性范围:<5%为0, 5%～25%为1, 26%～50%为2, 51%～75%为3, >75%为4。两项结果相加<2为阴性,2及以上为阳性。

在所检测的50例胰腺癌患者的手术切除组织蜡块中，有21例P16表达，阳性表达率为42.00%。在10例正常胰腺组织标本中，P16阳性表达9例，阳性表达率90%具体见表1。P16在胰腺癌组织中的表达见图1 。P16在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达有明显差异(χ2=5.88，P=0.0153，P<0.05)。

表1　P16在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达

注：P=0.03，P<0.05vs正常胰腺组

图1　P16在胰腺癌组织中的阳性表达(×100)

2.2survivin的表达

按文献[5]标准,Survivin为胞浆蛋白，胞浆内呈棕黄色颗粒者为Survivin阳性细胞。在400倍光镜下至少观察5个视野，阳性细胞>5%定义为阳性，<5%为阴性。

在所检测的50例胰腺癌患者的手术切除组织蜡块中，有11例无survivin表达，阳性表达率为78.0%。在10例正常胰腺组织标本中，均无survivin表达，阳性表达率为0%。具体见表2。survivin在胰腺癌组织中的表达见图2。survivin在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达有明显差异(χ2=18.2488,P=0.0000，P<0.05)。

表2　survivin在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达

注:2=18.989, P=0.0000，P<0.05vs正常胰腺组

图3　survivin在胰腺癌组织中的阳性表达 (×400)

3讨论

胰腺癌的发生、发展与原癌基因、抑癌基因的异常有关[6]。在已发现的100多种癌基因和10 余种抑癌基因中，最常见于胰腺癌的失活基因是p16[7]。p16基因的突变及蛋白表达异常,与人类胰腺癌的发生、浸润转移及临床分期、组织分化程度有明显的相关性，有助于判断胰腺癌的恶性程度和患者的预后[8]。胰腺癌p16基因失活极为常见，失活率高达98%。因此有的学者认为p16基因失活在胰腺癌发生、发展过程中起着“核心“作用[9]。人类survivin基因位于染色体17q25，长度范围在75～130kb，可引起3种选择性剪切，其中野生型含3个内含子和4个外显子[10]。Survivin的可抑制细胞凋亡。Uren等[11]通过研究证明survivin与有丝分裂、卵裂沟形成及胞浆移动有关。Mucbore等[12]发现干扰survivin的功能可引起多向性细胞分化缺陷和凋亡。survivin可能是血管形成中生长因子诱导的保护性基因，维持血管内皮细胞的正常增殖[13]。

我们发现在本组50例胰腺癌标本中，p16蛋白检出率达42.00%(21/50)，与肿瘤分化程度明显相关。本组50例胰腺癌标本中survivin蛋白的表达率为78.00%(39/50)，与不同分化程度胰腺癌有明显的相关性。更重要的是survivin蛋白在正常胰腺中未见表达，说明survivin蛋白的表达有很高的组织特异性，这对于胰腺癌的诊断有较高的辅助价值。该研究发现，P16阳性表达率和survivin阳性表达率存在负相关，说明胰腺癌的发生、发展与原癌基因、抑癌基因的异常有关关。另外研究表明P16及survivin的表达与胰腺癌的分化程度之间明显相关，与国内外相关研究符合[14]。这说明癌基因谱的异常与肿瘤分化有直接的关系，survivin蛋白的表达提示更高的侵袭性和更差的预后。因此，预想通过进一步研究，它们可以作为肿瘤治疗药物的载体，或者基因治疗的靶点。尤其是survivin有着较高的特异性，随着对survivin研究的进一步深入，靶向survivin的阻断性抗体免疫治疗或基因治疗、促进人类恶性肿瘤细胞凋亡的抗肿瘤疗法及针对性开发相应新的抗肿瘤药物，对恶性肿瘤的治疗将具有重大意义[15]。

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收稿日期(2014-10-28)

doi:10.3969/j.issn.1004-7115.2015.02.004

中图分类号：R730

文献标识码：A

文章编号：7115-1004(2015)02-0130-03

作者简介：*常军(1964—)，男，山东泰安人，主治医师，本科，主要从事临床肿瘤内科工作。