四种试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体的对比试验

王1，赵月2

（1.河南省叶县动物疫病预防控制中心，河南平顶山 467200；2.河南农业大学疫病检测中心，河南郑州 450000）

四种试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体的对比试验

（1.河南省叶县动物疫病预防控制中心，河南平顶山 467200；2.河南农业大学疫病检测中心，河南郑州 450000）

使用国产的4种猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒（VP1-ELISA）、猪口蹄疫O型液相阻断ELISA检测试剂盒（LB-ELISA）、猪口蹄疫正向间接血凝试剂盒、猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒（O-ELISA）同时检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后的50份血清样品，阳性率分别为98.0%、94.0%、54.0%、90.0%。同时使用农业部规定的3种试剂盒分别检测20份血清样品的抗体滴度发现，VP1-ELISA试剂盒和LB-ELISA试剂盒阳性符合率为95%，平均抗体滴度相差0.7，与IHA试剂盒符合率为55%，平均抗体滴度相差3.8，故LB-ELISA试剂盒可以用来评价合成肽疫苗免疫的抗体，而IHA试剂盒不能用来检测合成肽疫苗免疫的抗体。

猪口蹄疫；合成肽疫苗；抗体检测

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物的一种急性、高度接触性传染病，被世界动物卫生组织列为A类传染病之首。在世界上许多国家地区都有发生和流行，对养殖业造成巨大经济损失。在我国实行以免疫为主的综合性预防措施，主要是通过疫苗免疫使动物产生抵抗口蹄疫病毒的有效抗体，以达到预防的目的。以前在国内猪的口蹄疫防疫主要使用传统的口蹄疫病毒灭活疫苗进行免疫，近7年一种新型的猪口蹄疫O型合成肽疫苗在国内也得到广泛使用，而要科学评价免疫质量就需要选择一种较好的实验室检测方法。因此，本检测室使用农业部免疫方案规定的猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒、猪口蹄疫O型液相阻断ELISA检测试剂盒和口蹄疫正向间接血凝试验同时对新型合成肽疫苗进行了免疫效果的对比检测。

1 材料与方法

1.1 疫苗种类

猪口蹄疫O型合成肽疫苗（多肽2600+2700+2800）：申联生物医药（上海）有限公司生产。

1.2 样品采集

选择2个接种猪口蹄疫O型合成肽疫苗的规模化猪场，从A场首次免疫后30d的猪群中采集30份血样，从B场二次免疫后15d的猪群中采集20份血样。

1.3 检测试剂盒

1.3.1 猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒（VP1-ELISA）：购自上海优耐特生物医药有限公司。

1.3.2 猪口蹄疫O型液相阻断ELISA检测试剂盒（LB-ELISA）：购自兰州兽医研究所。

1.3.3 正向间接血凝试剂盒（IHA）：购自兰州兽医研究所。

1.3.4 猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒（O-ELISA）：购自武汉科前生物制品有限公司。

1.4 检测方法

按使用说明书进行检测。同时取20份样品做2的倍比稀释，使用农业部免疫方案规定的VP1-ELISA、LB-ELISA和IHA试剂盒检测出最高抗体效价。

1.5 结果判定

按照试剂盒要求判定，使用VP1-ELISA的抗体效价≥25判定为合格，使用液相阻断ELISA的抗体效价≥26判定为合格,使用IHA的抗体效价≥25判定为合格，使用O-ELISA的抗体效价≥25判定为合格。

2 结果

2.1 从表1可以看出，4种试剂盒检测2个猪场的50份血清样品平均阳性率分别为98.0%、94.0%、54.0%、90.0%，3种ELISA试剂盒检测阳性率在90%以上，IHA试剂盒检测阳性率最低。

表1 4种试剂盒抗体检测合格率（%）

2.2 使用3种试剂盒同时检测20份血清样品，从表2抗体检测阳性合格率可以看出，使用VP1-ELISA试剂盒与LB-ELISA试剂盒检测相比较，阳性吻合率为95%，有1份样品不合格；但与IHA试剂盒检测相比较，阳性吻合率为55%，有9份样品不合格。

2.3 从检测抗体效价滴度可以看出，同一份血清的效价使用VP1-ELISA与LB-ELISA检测结果相差不大，在0～2个滴度之间，整体平均抗体效价相差0.7个滴度；但与IHA的检测结果相差较大，整体平均抗体效价相差3.8个滴度。

表2 20份血清样品抗体效价

3 分析讨论

3.1 根据检测结果，猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒（VP1-ELISA）和口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒（LB-ELISA）都可以用来评价猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后血清抗体水平，这和朱图寿、云涛、侯英慧、陈晶等试验结果相同。虽然都可以用来评价猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后血清抗体水平，但LB-ELISA试剂盒操作过程时间较长，工作量大，技术要求较高，建议使用农业部文件规定的、操作简便、快速、特异性高的VP1-ELISA试剂盒。

3.2 间接血凝试剂盒因其操作简便，仪器设备、操作技术等要求不高，在国内基层使用比较普遍，但多数省份反映该方法的特异性、敏感性存在质疑，建议有条件的检测室最好选用ELISA试剂盒进行口蹄疫免疫抗体的评价。

3.3 正向间接血凝试验是在基层口蹄疫灭活苗检测中应用最为普遍的检测方法，操作简单，但应用该方法不能科学评价猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后血清抗体水平，这与占松鹤、秦荣香等人的报道相一致。可能是因为其致敏抗原非纯净病毒粒子，而是含大量的细胞蛋白，故而特异性不好；同时其致敏抗原是全病毒粒子，检测的抗体是全病毒结构的多克隆抗体，因而通过它们检测结构蛋白中微小的多肽抗体的敏感性显然远远不够。

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10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．05.026