不同治疗方法对Graves病患者外周血淋巴细胞亚群的影响

2015-12-25 06:46赵永强田德增魏晓华陈瑞锋王升陈贵存高用琴王利强
国际内分泌代谢杂志 2015年4期
关键词:亚群病患者游离

赵永强 田德增 魏晓华 陈瑞锋 王升 陈贵存 高用琴 王利强

不同治疗方法对Graves病患者外周血淋巴细胞亚群的影响

赵永强 田德增 魏晓华 陈瑞锋 王升 陈贵存 高用琴 王利强

目的 探讨抗甲状腺药物、131I、外科手术对Graves病患者外周血淋巴细胞亚群的影响。方法 选取106例符合Graves病诊断的门诊及住院患者,根据患者实际情况分为抗甲状腺药物组(39例)、131I治疗组(48例)、甲状腺次全切除术组(19例),于治疗前及治疗后3、6、12个月采用化学发光免疫仪检测游离T3、游离T4、促甲状腺激素(TSH)水平。电化学发光仪检测TSH受体抗体(TRAb)。流式细胞术检测CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3/(CD16+CD56+)、CD3-CD19+等水平。结果 治疗后3个月,与其他两组相比,甲状腺次全切除术组游离T3、游离T4、TRAb水平降低,TSH水平升高(F=52.95~126.81,P均<0.05)。治疗后6个月,131I治疗组与抗甲状腺药物组相比,游离T3水平有降低趋势,但无统计学意义(P>0.05),游离T4、TSH无明显差异(P均>0.05),而TRAb水平的变化有统计学意义(F=42.69,P<0.05)。治疗后12个月,各治疗组游离T3、游离T4、TSH、TRAb趋向正常水平。治疗前,3组患者CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+、CD3/(CD16+CD56+)、CD3-CD19+的差异无统计学意义。治疗后各时间点,与其他两组相比,甲状腺次全切除术组CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+水平均最低(F=3.48~68.28,P均<0.05);与抗甲状腺药物组相比,治疗3个月后,131I治疗组CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+、CD3-CD19+明显升高(F=13.85~68.28,P均<0.05),随着治疗时间的延长各指标逐渐降低。相关性分析表明,游离T3、游离T4、TRAb与CD3+(r=0.319,0.402,0.426,P均<0.01)、CD3+CD4+(r=0.467,0.526,0.453,P均<0.01)、CD3-CD19+(r=0.493,0.462,0.241,P<0.01)呈正相关,与 CD3+CD8+(r=-0.422,-0.523,-0.344,P 均<0.01)、CD3(CD16+CD56+)(r=-0.597,-0.543,-0.487,P 均<0.01)呈负相关。TSH 与 CD3+CD8+、CD3(CD16+CD56+)(r=0.436,0.474,P 均<0.01)呈正相关,与CD3+、CD3+CD4+、CD3-CD19+(r=-0.360,-0.522,-0.530,P均<0.01)呈负相关。结论 不同的治疗方法对Graves病患者外周淋巴细胞亚群产生不同的影响,检测外周淋巴细胞亚群的水平对Graves病的治疗有一定的指导意义。

Graves病;甲状腺功能;淋巴细胞亚群

目前,Graves病的发病率明显升高。根据美国全国卫生和营养调查数据显示,甲状腺功能亢进症(甲亢)的患病率达1.3%,女性约占1%~2%,男性相对较少[1]。国内各地报道甲亢发病率约在0.28%~0.50%,其中Graves病约占所有甲亢的85%[2-3]。Graves病是一类自身免疫性疾病,通常伴有机体的免疫系统(包括细胞免疫和体液免疫)异常,其中,T淋巴细胞的免疫调节异常是一个主要原因[4]。国外最新研究也表明Graves病与T淋巴细胞CD25、CD128、CD4+、CD8+关系密切[5]。有研究表明抗甲状腺药物及介入栓塞治疗均可以在一定程度上调节机体的免疫系统,包括T淋巴细胞和B淋巴细胞[6-7]。但目前关于T淋巴细胞与Graves病之间的关系尚不清楚,本文对Graves病患者应用抗甲状腺药物、131I、外科手术3种方法治疗前、后对自然杀伤细胞和T、B淋巴细胞亚群分布的影响进行观察。

1 对象与方法

1.1 研究对象 根据《中国甲状腺疾病诊疗指南》(2010)诊断标准,选取河南省濮阳市安阳地区医院106例符合Graves病的门诊及住院患者,经医院伦理委员会批准并告知患者知情,均为初发未接受药物治疗者。排除Graves病合并浸润性突眼、甲状腺Ⅲ度肿大、妊娠或哺乳期妇女、甲亢危象、合并糖尿病、肝、肾、血液系统、免疫性疾病及近期或长期应用免疫抑制剂及糖皮质激素患者。其中男18例,女88例,平均年龄(39.54±11.09)岁。根据患者实际治疗情况将106例Graves病患者分为抗甲状腺药物组39例,男7例,女31例,平均年龄(38.27±10.27)岁;131I治疗组48例,男5例,女27例,平均年龄(40.78±11.34)岁;甲状腺次全切除术组19例,男4例,女30例,平均年龄(39.72±10.38)岁。

1.2 治疗方法 抗甲状腺药物组:给予甲巯米唑片10mg口服,每天3次,依据临床症状及检测的甲状腺功能调整药物用量。131I治疗组:采用131I液体口服法,剂量依据[MBq=(22×甲状腺重量(g)×(50~90)Gy]/[24 h摄131I率×有效半衰期(d)]。甲状腺次全切除术组:术前均在门诊口服抗甲状腺药物治疗,同时加用盐酸普萘洛尔片10~30mg、3次/日、口服,症状稳定后改口服复方碘液,甲状腺叶切除时腺体残留量的估计:根据患者的年龄和症状不同,保留8~12 g。

1.3 观察指标 3组均在治疗前、治疗后3个月、6个月、12个月于清晨空腹抽取肘静脉血检测游离T3、游离T4、促甲状腺激素(TSH)、促甲状腺激素受体抗体(TRAb)、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3/(CD16+CD56+)、CD3-CD19+。我院甲状腺功能的参考值为:游离T3(2.53~3.90μg/L)、游离T4(7.50~21.50μmol/L)、TSH(0.34~5.06m IU/L)、TRAb(0~1.75 IU/L)

1.4 试剂来源 游离T3、游离T4、TSH的检测试剂盒购自美国贝克曼公司(Beckman Coulter),TRAb的检测试剂盒购自德国罗氏公司(RocheDiagnosticsGmbH)。抗人单克隆抗体(单抗)及溶血素均购自法国Immunotech公司,单抗包括CD4/CD8/CD3-PC5、CD3/(CD16+CD56+)/CD19-PC5以及相应对照。

1.5 标本处理及检测

1.5.1 甲状腺激素及抗体的检测 空腹血2 m l,1 500 r/min(r=400mm),离心 5min,化学发光免疫仪分析游离 T3、游离 T4、TSH(Unicel DxI800,Beckman Coulter公司,美国),电化学发光仪分析TRAb(Cobas 6000,Roche公司,德国)。

1.5.2 流式细胞术检测淋巴细胞亚群 每一样品测定管加入100μl全血与10μl特异性抗体后,混匀,室温避光温育20 min溶解红细胞;然后加入500 μlPBS,室温避光 5min,1 500 r/min(r=400mm),离心5min,弃上清液,加入800μlPBS重悬细胞,流式细胞术分析。每个测定管分析10 000个淋巴细胞,数据处理应用SystemⅡversion 3.0分析软件,检测结果以阳性细胞的百分率(%)表示。

1.6 统计学处理 采用SPSS19.0统计软件进行分析,正态分布的计量资料以±s表示。对于非正态分布资料正态化后进行分析,多组间比较采用重复测量方差分析检验,相关性分析采用Pearson相关分析,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗前、后甲状腺激素及TRAb水平的比较 治疗前抗甲状腺药物组、131I治疗组、甲状腺次全切除术组患者的游离T3、游离T4、TSH、TRAb水平差异无统计学意义,均显著高于正常水平。治疗后3个月,与其他两组相比,甲状腺次全切除术组游离T3、游离T4、TRAb 水平降低,TSH 水平升高(P 均<0.05)。治疗后6个月,131I治疗组与抗甲状腺药物组相比,游离T3水平有降低趋势,但无统计学意义(P>0.05),游离T4、TSH无明显差异(P>0.05),TRAb水平的变化有统计学意义(P<0.05),同时甲状腺次全切除术组TRAb水平降低最显著。治疗后12个月,各治疗组游离 T3、游离 T4、TSH、TRAb 趋向正常水平(表1)。

表1 Graves病患者治疗前、后血清甲状腺激素及TRAb的水平变化(±s)

表1 Graves病患者治疗前、后血清甲状腺激素及TRAb的水平变化(±s)

注:与抗甲状腺药物组相比,a P <0.05;与 131 I治疗组相比,b P <0.05;FT3:游离 T3;FT4:游离 T4;TSH:促甲状腺激素;TRAb:促甲状腺激素受体抗体

2.2 治疗前、后外周血淋巴细胞亚群的改变 治疗前,3 组患者 CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+、CD3/(CD16+CD56+)、CD3-CD19+比较差异无统计学意义(P均>0.05)。治疗后各时间点,与其他两组相比,甲状腺次全切除术组 CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+水平,CD4+/CD8+比值均最低(P均<0.05);与抗甲状腺药物组相比,治疗3个月后,131I治疗组CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比值、CD3-CD19+明显升高(P均<0.05),随着治疗时间的延长各指标逐渐降低(表2)。

2.3 甲状腺激素及TRAb与淋巴细胞的相关性 分别以游离 T3、游离 T4、TSH、TRAb 为因变量,以 CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3(CD16+CD56+)、CD3-CD19+为自变量,进行Pearson相关分析,游离T3、游离T4、TRAb与CD3+(r=0.319,0.402,0.426,P均<0.01)、CD3+CD4+(r=0.467,0.526,0.453,P 均<0.01)、CD3-CD19+(r=0.493,0.462,0.241,P<0.01)呈正相关,与CD3+CD8+(r=-0.422,-0.523,-0.344,P均<0.01)、CD3(CD16+CD56+)(r=-0.597,-0.543,-0.487,P均<0.01)呈负相关。TSH 与 CD3+CD8+、CD3(CD16+CD56+)呈正相关(r=0.436,0.474,P均<0.01),与CD3+、CD3+CD4+、CD3-CD19+呈负相关(r=-0.360,-0.522,-0.530,P 均<0.01)。

3 讨论

表2 Graves病患者治疗前、后外周血淋巴细胞亚群的变化(±s)

表2 Graves病患者治疗前、后外周血淋巴细胞亚群的变化(±s)

注:与抗甲状腺药物组相比,a P<0.05;与131 I治疗组相比,b P<0.05

Graves病的发病与遗传和环境及自身免疫关系密切,机体的免疫应答发生机制目前还不清楚。T淋巴细胞持续浸润甲状腺组织是Graves病的特征性表现[8]。Graves病患者外周血T淋巴细胞的免疫功能变化也是研究的热点,为了解目前Graves病治疗方法对外周淋巴细胞亚群的影响,本研究对Graves病患者外周T淋巴细胞在不同治疗阶段进行检测,结果发现:治疗前各组的游离T3、游离T4、TSH、TRAb、CD3+、CD3+、CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+CD3/(CD16+CD56+)、CD3-CD19+水平差异无统计学意义,治疗后3个月、6个月、12个月各治疗组存在着不同的变化,差异有统计学意义。Mclver和Morris[9]指出,Graves病患者细胞免疫异常主要表现在抑制性T细胞亚群CD8+的数目下降及免疫调节失衡。本研究也表明未经治疗的Graves病患者抑制性T淋巴细胞减少,失去了免疫监护,随后B淋巴细胞活跃,自然杀伤细胞清除能力下降,导致免疫调节障碍。目前抗甲状腺药物的治疗通常采用他巴唑或丙基硫氧嘧啶,抑制甲状腺激素的合成从而缓解症状,抗甲状腺药物是否存在免疫调节作用虽已有文献报道,但目前研究结果各有不同。有研究表明,他巴唑治疗对体液及细胞免疫均存在调节作用,可导致外周血免疫活化指标的降低[10]。本研究显示抗甲状腺药物治疗组经治疗后随着甲状腺功能好转,CD3+、CD3+CD4+较前降低,CD3+CD8+升高,CD4+/CD8+比值降低,与其研究一致,说明抗甲状腺药物对T淋巴细胞有一定的免疫调节作用,但自然杀伤细胞、B淋巴细胞变化不大,12个月后甲状腺功能恢复正常,CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+、CD3/(CD16+CD56+)仍然与其他组存在差别,可能抗甲状腺药物对免疫调节作用较弱,这也是抗甲状腺药物治疗时间长,复发率高的原因之一。131I治疗组治疗3个月后发现,与治疗前相比,外周淋巴细胞CD3+、CD8+CD4+、CD3-CD19+升高,CD3+CD8+降低,CD4+/CD8+比值升高,自然杀伤T淋巴细胞无明显异常,治疗后6个月及12个月后逐渐恢复。131I衰变发出β射线电离辐射对甲状腺组织产生破坏,甲状腺组织内大量淋巴细胞抗原释放入血液,引起外周T淋巴细胞的改变,随着甲状腺被射线破坏,针对甲状腺产生淋巴细胞表面抗原失去作用的靶器官,也逐渐恢复。甲状腺次全切除术组治疗3个月后,与其他两组比较存在差异,且有统计学意义,治疗6个月、12个月后自然杀伤细胞、B淋巴细胞逐渐恢复正常。手术切除了大部分甲状腺组织,同时淋巴细胞表面抗原失去靶器官,免疫异常的恢复较其他两组明显。经过12个月治疗,抗甲状腺药物组、131I治疗组、甲状腺次全切除术组的甲状腺功能逐渐恢复正常,组间比较发现,甲状腺次全切除术组治疗效果相对较好,抗甲状腺药物组较131I治疗组短期治疗效果较好,而131I治疗组较抗甲状腺药物组远期治疗效果较好;相关性分析表明,游离 T3、游离T4、TRAb 与CD3-CD19+、CD3+CD4+、CD3+呈正相关,与 CD3+CD8+、CD3(CD16+CD56+)呈负相关。TSH 与 CD3+CD8+、CD3(CD16+CD56+)呈正相关,与 CD3+、CD3+CD4+、CD3-CD19+呈负相关。说明甲状腺功能的变化与外周T淋巴细胞关系密切,甲状腺本身也是T淋巴细胞攻击的靶器官。

综上所述,外周淋巴细胞亚群与Graves病之间关系密切,甲状腺本身可能是淋巴细胞攻击的靶器官,各种治疗方法可能是通过调节机体外周血淋巴细胞亚群来调节机体免疫应答,从而达到对Graves病的治疗作用,为Graves病诊断和治疗提供一定的指导意义,但其具体机制仍有待进一步研究。

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Effects of different therapeutic methods on peripheral blood lymphocyte subgroups in patients w ith Graves'disease

Zhao Yongqiang*,Tian Dezeng,Wei Xiaohua,Chen Ruifeng,Wang Sheng,Chen Guicun,Gao Yongqin,Wang Liqiang.*Department of Endocrinology,Anyang District Hospital,Anyang 455000,China

Objective To explore the influences of anti-thyroid drug,131Iand surgery on peripheral blood lymphocyte subgroups in patientswith Graves'disease.M ethods A totalof106 inpatients and outpatients with Graves'disease were included.According to their therapeutic method of Graves'disease,patients were divided into 3 groups:39 patients in anti-thyroid drug therapy group,48 patients in131Itherapy group,19 patients in surgery therapy group.Before and 3,6,12 months after treatment,free T3,free T4,and thyroid stimulatinghormone(TSH) were tested by chemiluminescence immunoassay,TSH receptorantibody(TRAb)was tested by electro-chemiluminescence immunoassay and CD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+,CD3/(CD16+CD56+),CD3-CD19+were tested by flow cytometry.Results After treatment for3months,compared with anti-thyroid drug therapy group and131I therapy group,levels of free T3,free T4,TRAb in surgery therapy group were decreased,but level of TSH was increased(F=52.95-126.81,all P<0.05).After treatment for 6months,compared with anti-thyroid drug therapy group,levels of free T3in131I therapy group was decreased,although withoutstatisticalsignificance(P >0.05);levelof free T4and TSH had no significance(all P >0.05),whereas TRAb was different(F=42.69,P<0.05).After treatment for 12months,free T3,free T4,TSH and TRAb in three groupsweregradually returned tonormal.Before treatment,therewerenodifferencesofCD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+,CD4+/CD8+,CD 3/(CD16+CD56+),CD3-CD19+between the three groups.After treatment,the levels of CD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+,CD4+/CD8+in surgery therapy group were lower than those in other groups(F=3.48-68.28,all P<0.05).After treatment for 3 months,compared with anti-thyroid drug therapy group,CD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+,CD4+/CD8+,CD3-CD19+in131Itherapy group were increased greatly(F=13.85-68.28,all P<0.05).However,all thosemarkerswere decreased gradually.The correlation analysis showed thatfree T3,freeT4and TRAbwerepositively correlatedwith CD3+(r=0.319,0.402,0.426,all P<0.01),CD3+CD4+(r=0.467,0.526,0.453,all P <0.01),CD3-CD19+(r=0.493,0.462,0.241,all P <0.01),butnegatively correlated with CD3+CD8+(r=-0.422,-0.523,-0.344,all P <0.01),CD3(CD16+CD56+)(r=-0.597,-0.543,-0.487,all P<0.01).TSH was positively correlated with CD3+CD8+,CD3(CD16+CD56+)(r=0.436,0.474,all P<0.01),but negatively correlated with CD3+,CD3+CD4+and CD3-CD19+(r=-0.360,-0.522,-0.530,all P <0.01).Conclusions The different therapeutic methods have different impacted on peripheralblood lymphocyte subgroups in patientswith Graves'disease.Detecting peripheralblood lymphocyte subgroupshave a certain significance for treating Graves'disease.

Graves'disease;Thyroid function;Lymphocyte subgroups

(Int JEndocrinolMetab,2015,35:234-237)

10.3760/cma.j.issn.1673-4157.2015.04.005

455000 河南省安阳地区医院内分泌科(赵永强,田德增,魏晓华,高用琴),心内科(陈瑞锋),临床试验室(王升),输血科(陈贵存),核医学科(王利强)

2014-11-17)

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