紫外分光光度法检测桂叶、桂叶渣总黄酮研究

李军集，周丽珠，陈海燕，梁忠云，李桂珍，梁伟忠

(1.广西林业科学研究院，广西 南宁 530002;2.国家林业局八角肉桂工程技术研究中心，广西 南宁 530002;3.广西特色经济林培育与利用重点实验室，广西 南宁 530002;4.广西京桂香料有限公司，广西 藤县 543300)

肉桂(Cinnamomum cassia presl)又名玉桂，系樟科樟属，常绿乔木，是一种珍贵的药材，我国肉桂产量占世界肉桂产量的80%以上，广西是全国最大的肉桂产区，而广东、广西两省肉桂产量占我国肉桂产量的95%以上［1-2］。肉桂富含黄酮类化合物，大量研究表明，黄酮类化合物具有治疗心脑血管疾病、抗菌、消炎、镇痛、抗病毒、抗肿瘤、降低血糖、降血脂及血压、抗氧化自由基活性等生物活性［3-7］。

目前，肉桂皮主要作为香料食材、药材使用，肉桂叶主要用于肉桂油的提取。提取精油后的桂皮渣及桂叶渣基本当作燃料或直接遗弃，对桂皮渣的利用和研究有少量相关报道［8-9］。

本文用乙醇提取肉桂枝叶及桂叶渣中的黄酮类化合物，采用紫外分光光度计法检测提取液中的黄酮含量，为肉桂相关生产剩余物的综合利用，为更好地开发这一天然特色资源提供科学依据。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

肉桂枝叶、桂叶渣均来自西江流域梧州藤县广西京桂香料有限公司;石油醚、60%乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、三氯化铝均为分析纯;芦丁标准品(CASNO:153-18-4);蒸馏水。

UV-2550 型紫外-可见分光光度计;DF-101B 集热式恒温加热磁力搅拌器;TP3200 电子天平。

1.2 黄酮提取

将干燥的肉桂枝叶及桂叶渣粉碎，过50 目筛，用石油醚索氏回流脱脂、脱色4 h，温度60 ℃，风干密封保存。

精确称取5 g 脱油脂肉桂粉，乙醇回流浸提，温度60 ℃，时间5 h，料液比1 ∶30 g/mL。冷却、抽滤，测定滤液黄酮质量浓度。

1.3 检测方法

以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 作显色剂，采用紫外可见分光光度法测定最大吸收波长，选择最大吸收波长测定各浓度芦丁标准溶液的吸收值，绘制出芦丁标准曲线，根据标准曲线得出回归方程式。测定桂叶及桂叶渣提取液的吸收值，利用回归方程得出各提取液的黄酮含量。

1.3.1 光谱扫描图 配制芦丁0.1 mg/mL 标准品，分别稀释至浓度0.004，0.012 mg/mL，采用紫外分光光度计在450 ～600 nm 进行波长扫描，以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 为显色剂，结果见图1，在505 nm 处有最大吸收波长。

图1 芦丁液吸收波长扫描图Fig.1 Absorption wavelength scanning of rutin liquor

1.3. 2 标准曲线的绘制 用移液枪精确量取0.1 mg/mL 芦丁标准溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 mL，分别置于10 mL 容量瓶中;分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 mL，摇匀后放置6 min。分别加10%硝酸铝溶液0.30 mL，摇匀，静置6 min。加4%氢氧化钠溶液4.00 mL，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min。于505 nm 处测吸光度。以试剂作空白参比液。线性回归，得回归方程y =－0.56 ×10－2+9.119x，相关系数R2=0.999 5。

式中，x 为标准芦丁液浓度(mg/mL)，y 为吸光度。

芦丁标准溶液在浓度为0.002 ～0.016 范围内呈良好的线性关系(图2)。

图2 芦丁标准曲线Fig.2 Standard curve of rutin

2 结果与讨论

2.1 黄酮提取液浓度测定

分别取0. 1 mL 桂叶及桂叶渣提取液，加入NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 显色剂，用60%乙醇定容。在505 nm 测吸光度。桂叶提取液吸光度为0.228，桂叶渣提取液吸光度为0.102，利用回归方程求得桂叶及桂叶渣提取液浓度为2.56，1.02 mg/mL。桂叶渣黄酮类化合物含量的降低，说明桂叶中的黄酮类物质，在桂油提取工艺中，有部分被分解或溶解于蒸馏废水中流失，造成桂叶渣中黄酮类物质含量变低，但依然保持一定的浓度。

本实验所采用的提取工艺并非最佳提取工艺，仅为表明在相同工艺条件下桂叶在水蒸气蒸馏提取桂油后，桂叶中黄酮类化合物含量的变化。黄酮的提取工艺有待进一步深入研究，黄酮提取率可通过反复多次浸提浓缩或利用超临界萃取、微波、超声波、生物法等方法提高。本实验为黄酮的提取及检测方法仅供参考，为肉桂渣的综合开发利用提供可靠依据。

2.2 精密度

桂叶及桂叶渣黄酮提取液重复检测吸光值，结果见表1、表2。

表1 桂叶检测精密度Table 1 Cinnamon leaves detection precision

由表1 可知，桂叶黄酮提取液重复检测5 次，吸光度平均值为0.227，RSD 为0.308%。

表2 桂叶渣检测精密度Table 2 Cinnamon leaves residue detection precision

由表2 可知，桂叶渣黄酮提取液重复检测5 次，吸光度平均值为0.097，RSD 为1.13%。

3 结论

采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 显色，紫外分光光度计法检测桂叶及桂叶渣提取液中的黄酮含量。结果桂叶及桂叶渣提取液中黄酮含量分别为2.56，1.02 mg/mL。实验说明桂叶渣依然含有一定量的黄酮类化合物。

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