Peroxiredoxin 1与EMT相关蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

蔡重阳，汤志刚，黄 强，陈 炯，潘婷婷，翟路路

Peroxiredoxin 1与EMT相关蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

蔡重阳1，汤志刚1，黄 强1，陈 炯1，潘婷婷2，翟路路1

目的探讨过氧化物还原酶1（Prx1）与上皮细胞间质转化（EMT）相关蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义方法采用免疫组化法分别检测Prx1、E-钙黏素（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）在66例胰腺癌组织和11例正常胰腺组织中的表达，并分析三者之间的关系及与临床病理因素间的关系结果Prx1、E-cadherin和Vimentin分别在66例胰腺癌组织中的阳性表达率为69．70%（46／66）、40．91%（27／66）、56．06%（37／66）；Prx1、E-cadherin和Vimentin分别在11例正常胰腺组织中的阳性表达率为18．18%（2／11）、90．90%（10／11）、18．18%（2／11）。Prx1、E-cadherin和Vimentin在胰腺癌组织中的表达均与TNM分期、淋巴结转移和肿瘤分化程度显著相关（P＜0．05），而与性别、年龄、肿瘤大小、病变部位均无关；Prx1与神经侵犯显著相关（P＜0．05），而E-cadherin和Vimentin与神经侵犯无关。Prx1的表达与Vimentin表达呈正相关（P＜0．05），Prx1和Vimentin的表达均与E-cadherin表达呈负相关（P＜0．05）结论Prx1与EMT相关蛋白在胰腺癌组织中的表达呈显著相关性，并与其侵袭转移能力相关，提示Prx1的高表达可能为预测胰腺癌患者预后不良的辅助指标之一。

胰腺癌；过氧化物还原酶1；E-钙黏素；波形蛋白

胰腺癌是消化系统恶性程度最高的肿瘤之一，在我国其发病率呈逐年上升趋势，早期易侵袭转移的生物学特性是影响胰腺癌临床预后不良的重要因素，但目前尚缺乏有效特异的预测指标。过氧化物还原酶1（Peroxiredoxin 1，Prx1）是一种含硫醇的抗氧化剂，与细胞分化、增殖、凋亡和调节信号转导通路密切相关。近期研究［1－3］表明，Prx1在多种肿瘤中异常表达，如在肺癌、胆管癌和肝癌等表达上调，但目前国内外关于Prx1在胰腺癌组织中的表达及其临床意义尚未有报道。该研究通过免疫组化法联合检测Prx1、上皮细胞间质转化（epithelial-mesenchvmal transition，EMT）相关E-钙黏素（E-cadherind）和波形蛋白（Vimentin）在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达，探讨其与胰腺癌临床特征和生物学行为的关系。

1 材料与方法

1．1 病例资料选择安徽医科大学附属省立医院普通外科2007年～2013年手术切除并经病理证实为胰腺癌的患者66例，其临床和病理资料均齐全，术前均未行放疗或化疗。其中男24例，女42例；年龄40～76（64．03±9．09）岁，＜60岁20例，≥60岁46例；胰头癌29例，胰体尾癌37例；肿瘤直径＜2 cm者8例，2～4 cm者33例，＞4 cm者25例。病理组织学分型：高分化腺癌3例，中分化腺癌31例，低分化腺癌32例；有淋巴结转移30例，无淋巴结转移36例；有神经侵犯26例，无神经侵犯40例。以国际抗癌协会（UICC）2013年胰腺癌TNM分期为标准，其中Ⅰ期6例，Ⅱ期27例，Ⅲ期22例，Ⅳ期11例。正常胰腺组织11例，标本取自胰腺非恶性肿瘤或胰腺外伤手术时所切胰腺组织，均经组织学检查证实。

1．2 试剂与方法

1．2．1 主要试剂 兔抗人Prx1单克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司；鼠抗人E-cadherin、Vimentin抗体工作液和DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1．2．2 试验方法 采用免疫组化法检测相关蛋白的表达。组织切片，经脱蜡、枸橼酸盐微波抗原修复、过氧化氢消除内源性过氧化物酶活性，分别滴加一抗Prx1（浓度1∶100）、E-cadherin、Vimentin，4℃过夜，复温后滴加二抗，37℃孵育30 min，最后DAB显色、苏木精复染、封片。

1．3 结果判定由两名未参加实验的病理医师观察所有切片，随机选取10个高倍镜视野，每个视野计数100个细胞。Prx1、Vimentin按胞质内棕黄色染色的强度分为“－”、“＋”、“＋＋”；“－”代表任意视野下无棕黄色染色或者染色面积＜10%的为阴性表达；“＋”代表染色面积10%～30%，表示弱阳性；“＋＋”代表染色面积＞30%，代表强阳性。“＋”、“＋＋”均属于阳性表达。E-cadherin染色主要在细胞膜，阳性、阴性表达判定标准：＜90%的胞膜均质染棕黄色被判定为E-cadherin阴性表达，胞膜中出现棕黄色染色同时，＞90%的胞膜均质染棕黄色为E-cadherin阳性表达。

1．4 统计学处理采用SPSS 17．0统计软件进行分析，运用χ2检验及Fisher精确概率法进行检验分析数据，分类变量的关联性分析采用在χ2检验的基础上计算Pearson列联系数。

2 结果

2．1 Prx1与E-cadherin、Vimentin的表达Prx1、Vimentin在胰腺癌中阳性表达率为69．70%（46／66）、56．06%（37／66），在正常胰腺组织中Prx1、Vimentin的阳性表达率均为18．18%（2／11），差异均有统计学意义（χ2＝10．658，P＝0．002；χ2＝5．412，P＝0．025）。E-cadherin在胰腺癌中的阳性表达率为40．91%（27／66），正常胰腺组织中E-cadherin阳性表达率为90．90%（10／11），差异有统计学意义（χ2＝9．443，P＝0．003），见图1、2。

2．2 Prx1、E-cadherin、Vimentin的表达与临床病理资料的相关性Prx1、E-cadherin和Vimentin在胰腺癌组织中的表达均、TNM分期、淋巴结转移和肿瘤分化程度显著相关（P＜0．05），Prx1与神经侵犯显著相关（P＜0．05）；Prx1、E-cadherin、Vimentin的表达与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位无关，差异无统计学意义。同时E-cadherin、Vimentin的表达与神经侵犯也无关，差异无统计学意义，见表1。

2．3 Prx1与E-cadherin、Vimentin表达的相关性

胰腺癌中Prx1的表达与Vimentin的表达呈正相关（P＜0．05），与E-cadherin表达呈负相关（P＜0．05），见表2。

2．4 E-cadherin与Vimentin表达的相关性胰腺癌中E-cadherin的表达与Vimentin的表达呈负相关（P＜0．05），见表3。合

3 讨论

Prx1属于过氧化物还原酶家族中重要的一员，具有抗氧化作用，能够清除活性氧自由基和H2O2，被称为“清道夫蛋白”［4］。有研究显示Prx1在肝细胞癌［3］、胆管癌［2］、胆囊癌［5］中明显高表达，并且与淋巴结转移、神经侵犯转移相关，但国内外在胰腺癌中研究却罕有报道，本研究结果表明，Prx1在胰腺癌中呈高表达，并与胰腺癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯相关，而与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位无关。提示Prx1与胰腺癌的侵袭、转移有一定的相关性，可能成为预测胰腺癌患者预后的新指标。

EMT指上皮细胞通过特定的程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程，上皮细胞通过EMT失去了细胞的极性，失去与基底膜的连接等上皮表型，获得了较高的侵袭与迁徙、抗凋亡和降解细胞外基质的能力等间质表型，是肿瘤发生、侵袭和转移的分子基础［6］，E-cadherin和Vimentin都是反映EMT转化过程的重要蛋白指标，EMT的转化主要标志是E-cadherin在肿瘤中低表达和Vimentin在肿瘤中高表达，E-cadherin存在于上皮的细胞黏附分子，通过组织的细胞内连环蛋白、肽段蛋白与细胞骨架肌动蛋白相连而聚集，参与细胞黏附、生长、增殖等一系列过程并维持上皮细胞形态和结构完整性，Vimentin是存在于间质细胞中的一种主要的中间丝蛋白，通过调节细胞骨架蛋白、细胞黏附分子等蛋白间的相互作用，参与肿瘤细胞的黏附、迁移、侵袭和细胞信号转导。研究结果显示，E-cadherin在胰腺癌中的表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移高度相关，而与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、神经侵犯无关。Vimentin在胰腺癌中呈高表达并与胰腺癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关，而与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、神经侵犯无关。胰腺癌组织中Vimentin表达上调的同时E-cadherin的表达下调，这与国内外研究报道［7－8］基本一致。

Ha et al［1］在肺癌中的研究显示，Prx1高表达能够下调E-cadherin的表达，Prx1低表达又能够上调E-cadherin的表达，研究结果也同样显示在胰腺癌中Prx1的表达与Vimentin表达呈正相关，与E-cadherin表达呈负相关，说明Prx1的表达与EMT相关，但EMT转化过程有多种转导通路存在，未来仍需进一步深入探索，详细解析其具体的相关分子机制。

［1］ Ha B，Kim E K，Kim J H，et al．Human peroxiredoxin 1 modulates TGF-β1-induced epithelial-mesenchymal transition through its peroxidase activity［J］．Biochem Biophys Res Commun，2012，421（1）：33－7．

［2］ Yonglitthipagon P，Pairojkul C，Chamgramol Y，et al．Prognostic significance of peroxiredoxin 1 and ezrin-radixin-moesin-binding phosphoprotein 50 in cholangiocarcinoma［J］．Hum Pathol，2012，43（10）：1719－30．

［3］ Sun Q K，Zhu J Y，Wang W，et al．Diagnostic and prognostic significance of peroxiredoxin 1 expression in human hepatocellular carcinoma［J］．Med Oncol，2014，31（1）：786．

［4］ Neumann C A，Cao J，Manevich Y，et al．Peroxiredoxin 1 and its role in cell signaling［J］．Cell Cycle，2009，8（24）：4072－8．

［5］ Li J，Yang Z L，Ren X，et al．ILK and PRDX1 are prognostic markers in squamous cell／adenosquamous carcinomas and adenocarcinoma of gallbladder［J］．Tumour Biol，2013，34（1）：359－68．

［6］ De Craene B，Berx G．Regulatory networks defining EMT during cancer initiation and progression［J］．Nat Rev Cancer，2013，13（2）：97－110．

［7］ Handra-Luca A，Hong S M，Walter K，et al．Tumour epithelial vimentin expression and outcome of pancreatic ductal adenocarcinomas［J］．Br J Cancer，2011，104（8）：1296－302．

［8］ Roy L D，Sahraei M，Subramani D B，et al．MUC1 enhances invasiveness of pancreatic cancer cells by inducing epithelial to mesenchymal transition［J］．Oncogene，2011，30（12）：1449－59．

Clinical significance of expression of Peroxiredoxin 1 and EMT related factors in pancreatic carcinoma

Cai Chongyang，Tang Zhigang，Huang Qiang，et al
（Dept of General Surgery，The Affiliated Provincal Hospital of Anhui Medical University，Anhui Province Key Laboratory of Hepatopancreatobiliary Surgery，Hefei 230001）

ObjectiveTo investigate the expression clinical significance of Peroxiredoxin 1（Prx1）and epithelial mesenchymal transition（EMT）-related factors in pancreatic carcinoma．Methods The expression of Prx1，E-cadherind and Vimentin were detected in 66 pancreatic carcinoma samples and 11 normal pancreatic tissues by immunohistochemical method．The correlation between Prx1，E-cadherin，Vimentin and clinicopathologic characteristics was also analyzed．Results The positive expression rates of Prx1，E-cadherind and Vimentin were 69．70%（46／66），40．91%（27／66）and 56．06%（37／66）in pancreatic carcinoma，and 18．18%（2／11），90．90%（10／11）and 18．18%（2／11）in normal pancreatic tissue，respectively．The expression rates of Prx1，E-cadherin and Vimentin were correlated with TNM stage，lymph node metastasis，degree of differentiation（P＜0．05）．Prx1 expression was correlated with nerve invasion in pancreatic carcinoma tissue（P＜0．05）．The expression rates ofPrx1，E-cadherin and Vimentin were not correlated with sex，age，size，site of tumor．E-cadherin and Vimentin expression were not correlated with nerve invasion inpancreatic carcinoma tissue．Prx1 expression in pancreatic carcinoma was positively correlated with Vimentin expression（P＜0．05）；Prx1 and Vimentin were negatively correlated with E-cadherin expression（P＜0．05）．Conclusion Prx1，E-cadherin and Vimentin expressions are associated with the ability of invasion and metastasis in pancreatic carcinoma，Prx1 abnormal expression maybe serve as a potential poor prognostic marker of patients with pancreatic carcinoma．

pancreatic carcinoma；Peroxiredoxin 1；E-cadherind；Vimentin

R 735．7

A

1000－1492（2015）03－0368－05

2014－11－23接收

国家自然科学基金（编号：81272740）

1安徽医科大学附属省立医院普通外科，肝胆胰外科安徽省重点实验室，合肥 230001

2天津医科大学研究生院，天津 300070

蔡重阳，男，硕士研究生；汤志刚，男，教授，主任医师，硕士生导师，责任作者，E-mail：tzg7031＠163．com