可溶性B7-H4在膀胱癌诊断中的价值

黄卫，陈湘

（中南大学湘雅医院泌尿外科，湖南 长沙 410008）

可溶性B7-H4在膀胱癌诊断中的价值

黄卫，陈湘

（中南大学湘雅医院泌尿外科，湖南 长沙 410008）

目的探讨可溶性B7-H4（sB7-H4）在膀胱癌中的诊断价值。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)夹心法检测117例膀胱癌患者与120例正常人血清sB7-H4水平，采用ELISA法检测膀胱癌抗原（UBC）和尿液细胞角蛋白19-片段（CYFRA21-1），利用受试者工作特性曲线（ROC）比较分析sB7-H4作为膀胱癌血清标志物的诊断价值。结果膀胱癌患者血清sB7-H4水平（48.73±14.69）ng/ml明显高于正常人（29.52±17.84）ng/ml，差异有统计学意义（P＜0.01）。sB7-H4在膀胱癌诊断中的灵敏性（87.18%）和准确性（78.48%）均高于尿UBC及CYFRA21-1，特异性（74.17%）低于CYFRA21-1及UBC。结论sB7-H4在膀胱癌诊断中具有良好的临床应用前景，联合检测sB7-H4、UBC和CYFRA21-1可提高膀胱癌的诊断率。

膀胱癌；B7-H4；ELISA；受试者工作特性曲线

膀胱癌大多为移行细胞癌。其术后复发率较高，并具有由浅表向深部浸润性发展的特点。膀胱镜是对膀胱癌进行诊断和随访的主要手段，但因其为侵入性检查，患者常因畏惧频繁复检而失去早期诊断治疗的机会。因此，寻找无创、简便的肿瘤标志物已成为近年研究的热点。B7-H4是最新发现的B7家族成员，它在抗原特异性的免疫反应中起到非常重要的调节作用[1]。利用免疫组织化学染色方法，业已发现B7-H4在各种肿瘤组织中均有过度表达，如结肠癌、肝癌、胰腺癌等。B7-H4可表达于肿瘤细胞的胞膜上和胞浆内，还能以可溶性形式存在于血清中，且有实验证明了宫颈癌和食管癌患者血清中可溶性B7-H4（soluble B7-H4,sB7-H4）水平的增高[2-3]。本研究用双抗体ELISA夹心法，定量检测膀胱癌患者血清中sB7-H4水平，比较分析sB7-H4与尿膀胱癌抗原（urinary bladder cancer antigen，UBC）、尿液细胞角蛋白19-片段（cytokeratin19fragment，CYFRA21-1）在灵敏性、特异性及准确度上的差异，探讨sB7-H4在膀胱癌诊断中的价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2012年1月-2013年12月湘雅医院泌尿外科住院117例膀胱癌患者。均经临床诊断和病理诊断确诊，年龄32～74岁。正常人120例，均为经本院体检健康的志愿者，年龄22～71岁。

1.2 标本留取

所有受试者均于清晨空腹抽静脉血6 ml，加入试管，室温静置30 min，3 000 r/min离心15 min，分离血清，留待测定sB7-H4，置入-20℃冰箱保存。

1.3 sB7-H4测定

采用双抗体夹心ELISA法，严格按照试剂盒说明书进行操作，试剂盒购于美国R&D公司[4]。

1.4 尿UBC和CYFRA21-1检测

所有研究对象在行膀胱镜或手术前留取晨尿，1000 g离心15min后，取上清液置入20℃冰箱保存，用作UBC和CYFRA21-1检测。UBC采用瑞典生物技术有限公司试剂盒，ELISA法检测，其中单克隆抗体对细胞角蛋白18（cytokeratin18，CKl8）有特异性，同时对CK8有交叉反应。CYFRA21-1采用法国CIS国际生物公司试剂盒，放射免疫技术检测，其测定为通过识别2株鼠单克隆抗体BM19-21、KS19-1的双抗体夹心法。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件对数据进行分析，数值用均数±标准差（±s）表示，组间比较用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 膀胱癌患者和正常人血清sB7-H4、尿液UBC和CYFRA21-1水平

与正常人比较，膀胱癌患者血清中sB7-H4水平均显著升高，差异有统计学意义（P＜0.0l）（见表1）。该结果提示，sB7-H4在膀胱癌早期诊断中具有潜在应用的价值。

表1 膀胱癌患者和正常人3种血清标记物水平比较

2.2 sB7-H4与UBC、CYFRA21-1相关性分析

将117例膀胱癌患者血清sB7-H4水平分别与UBC、CAl5-3水平进行单因素直线相关分析，结果显示，sB7-H4与UBC、CYFRA21-1均呈正相关（r分别为0.521和0.531，P＜0.0l）。

2.3 膀胱癌患者血清sB7-H4、UBC、CYFRA21-1曲线下面积比较

利用受试者工作特性曲线（ROC）测得sB7-H4对应产生的曲线下面积（AUC）为0.837（95%可信区间为0.764～0.928），大于UBC的0.713（95%可信区间为0.645～0.824）和CYFRA21-1的0.782（95%可信区间为0.739～0.892）（见附图）。

附图 早期膀胱癌患者血清sB7-H4、UBC、CYFRA21-1曲线下面积比较

表2 sB7-H4、UBC、CYFRA21-1诊断效率比较%

2.4 膀胱癌患者血清sB7-H4、UBC、CYFRA21-1诊断效率比较

通过ROC曲线分析，sB7-H4的最佳诊断值为35.32 ng/ml，它在膀胱癌诊断中的灵敏性（87.18%）和准确性（78.48%）均高于UBC及CYFRA21-1，特异性（74.17%）低于UBC及CYFRA21-1，UBC和CYFRA21-1单项检测时的阳性率都比较低，而联合检测sB7-H4、UBC和CYFRA21-1可将膀胱癌的诊断率提高至92%。见表2。

3 讨论

由于膀胱癌的早期症状以血尿为主，但引起血尿的病因有很多，如泌尿系统感染、结石等，往往容易漏诊。尿细胞学检查可作为血尿的初步筛查，但其检出率较低，不易于鉴别出分化良好的肿瘤细胞，亦可导致漏诊。虽然膀胱镜检查可作为检测膀胱癌的金标准，但费用高，且检查过程往往引起患者不适，不适合作为筛查使用。所以临床上急切需要寻找敏感性高、特异性好的膀胱癌肿瘤标志物。目前已知血清或尿液中的某些肿瘤标志物，如CYFRA21-1、UBC等在复发转移性膀胱癌的诊断以及疗效监测方面具有一定应用价值[7]。但是否也能用于膀胱癌的早期诊断或筛查目前尚不明确。

目前，国内有关B7-H4与肿瘤关系的研究越来越多，已证实大多数肿瘤组织均高表达B7-H4，如前列腺癌、子宫内膜癌、胰腺癌等等[6-8]，几乎涵盖肿瘤的各个领域。众多研究表明，B7-H4在肿瘤的发生、发展及预后有重要作用，可为肿瘤的诊断和治疗提供一种新的靶位点，具有良好的临床应用前景。然而，目前对B7-H4的研究大多采用Western blot和免疫组织化学染色的方法，其操作繁锁，只能定性研究B7-H4在肿瘤组织中表达情况，很难比较手术前后患者B7-H4含量的变化。本研究采用ELISA法定量检测117例膀胱癌患者血清中sB7-H4水平，同时与膀胱癌常用的辅助诊断指标UBC、CYFRA21-1进行比较，分析3者在灵敏性、特异性及准确性上的差异，以探讨sB7-H4在膀胱癌诊断中的价值。结果发现，膀胱癌患者血清sB7-H4水平明显高于正常人，差异有统计学意义（P＜0.01）。直线相关分析显示，sB7-H4与UBC、CYFRA21-1均呈正相关，提示sB7-H4初步具备膀胱癌血清标志物的潜质。利用受试者工作特性曲线（ROC）测得sB7-H4对应产生的曲线下面积（AUC）为0.868，大于UBC的0.745和CA125的0.796。该结果说明虽然3者在膀胱癌的诊断中均有一定的准确性，但sB7-H4的准确性要稍高于CA125和UBC。sB7-H4的灵敏性、准确性分别为87.18%和78.48%，明显高于UBC和CYFRA21-1，而特异性仅为74.17%，低于UBC的85.83%和CYFRA21-1的92.5%，提示sB7-H4可能是一个广谱的肿瘤标志物。尽管3种血清标志物均具有一定的诊断价值，但sB7-H4的诊断效率要高于UBC和CYFRA21-1。UBC和CYFRA21-1单项检测时的阳性率都比较低，而联合检测sB7-H4、UBC和CYFRA21-1可将膀胱癌的诊断率提高至94.87%。因为肿瘤的发生是多基因、多步骤改变的结果，也是多靶点、多环节的调控过程，联合检测正成为该领域一个重要的探索方向，能弥补单项检测的不足，可明显提高膀胱癌的诊断率。

综上所述，本研究表明sB7-H4在膀胱癌诊断中具有良好的临床应用前景，但尚需做以下的基础研究进一步证实：①目前对于B7-H4的受体及其信号转导途径尚未明确，尚不清楚sB7-H4来源于何处，以及sB7-H4能在多大程度上代表体内总的B7-H4含量；②对B7-H4分子表达的调控机制有待进一步明确。

[1]GILBERT SM,WOOD DP,DUNN RL,et al.Measuring healthrelated quality of life outcomes in bladder cancer patients using the Bladder Cancer Index(BCI)[J].Cancer,2007,109(9):1756-1762.

[2]CHEN L,SUN J,WU H,et al.B7-H4 expression associates with cancer progression and predicts patient's survival in human esophageal squamous cell carcinoma[J].Cancer Immunology,Immunotherapy,2011,60(7):1047-1055.

[3]GALAZKA K,OPŁAWSKI M,WINDORBSKA W,et al.The immunohistochemical analysis of antigens such as RCAS1 and B7H4 in the cervical cancer nest and within the fibroblasts and macrophages infiltrating the cancer microenvironment[J].American Journal of Reproductive Immunology,2012,68(1):85-93.

[4]胡国艳,郑淑华,刘伟,等.检测可溶性B7-H4 ELISA夹心法的建立[J].细胞与分子免疫学杂志,2008,24(8):831-833.

[5]王兴亮,宋明山.CYFRA21-1在膀胱癌患者中的表达研究[J].中国实用医药,2012,7(29):9-1.

[6]MIYATAKE T,TRINGLER B,LIU W,et al.B7-H4(DD-O110) is overexpressed in high risk uterine endometrioid adenocarcinomas and inversely correlated with tumor T-cell infiltration[J].Gynecologic Oncology,2007,106(1):119-127.

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[8]ROTH TJ,SHEININ Y,LOHSE CM,et al.B7-H3 ligand expression by prostate cancer:a novel marker of prognosis and po tential target for therapy[J].Cancer Research,2007,67(16):7893-7900.

（张蕾 编辑）

Diagnostic value of soluble B7-H4 in bladder cancer

Wei HUANG,Xiang CHEN
(Department of Urology,Xiangya Hospital,Central South University, Changsha,Hunan 410008,P.R.China)

【Objective】To discuss the diagnostic value of soluble B7-H4(sB7-H4)in bladder cancer.【Methods】Using sandwich ELISA method,the serum level of soluble B7-H4 was detected in 117 cases of bladder cancer patients and 120 cases of normal people.ELISA method was used to determine the urine levels of urinary bladder cancer antigen(UBC)and cytokeratin 19 fragment(CYFRA21-1),then the diagnosis value of sB7-H4 in bladder cancer was analyzed with ROC(receiver operating characteristic)curve.【Results】The serum level of soluble B7-H4 in the bladder cancer patients[(48.73±14.69)ng/ml]was significantly higher than that in the normal people[(29.52±17.84)ng/ml],there was a significant difference between them (P＜0.01).The sensitivity(87.18%)and accuracy(78.48%)of sB7-H4 in bladder cancer were higher than those of UBC and CYFRA21-1,but the specificity(74.17%)was lower than that of UBC and CYFRA21-1.【Conclusions】Soluble B7-H4 has good prospects in clinical application in diagnosing bladder cancer.Detection of serum level of sB7-H4 together with UBC and CYFRA21-1 can raise the positive diagnostic rate of bladder cancer.

bladder cancer；B7-H4；ELISA；receiver operating characteristic(ROC)curve

R737.14

B

1005-8982（2015）30-0065-03

2015-04-08